Реферат: Определение содержания аскорбиновой кислоты в яблоках различных сортов - текст реферата. Скачать бесплатно.
Банк рефератов, курсовых и дипломных работ. Много и бесплатно. # | Правила оформления работ | Добавить в избранное
 
 
   
Меню Меню Меню Меню Меню
   
Napishem.com Napishem.com Napishem.com

Реферат

Определение содержания аскорбиновой кислоты в яблоках различных сортов

Банк рефератов / Химия

Рубрики  Рубрики реферат банка

закрыть
Категория: Реферат
Язык реферата: Русский
Дата добавления:   
 
Скачать
Архив Zip, 43 kb, скачать бесплатно
Заказать
Узнать стоимость написания уникального реферата

Узнайте стоимость написания уникальной работы

Министерство общего и профессионального образования Российской Ф едерации Уральский Государственный Технический Университет – УПИ Учебно-исследовательская работа студента по кафедре аналитической хим ии: Определение общей кислотности и содержания p - активных вещест в в различных сортах яблок Выполнил: Студент гр. Х-349 Галкин И.В. Преподаватель: Марина Н.В. Екатеринбург 2000 Яблоки Большинство зимних сортов яблок отличается невысокой С-Р витаминность ю, и на них можно не останавливаться. Количество витамина С к весне обычно составляет у яблок половину бывшего к потребительской спелости – Р-акт ивные соединения убывают за 3 – 6 месяцев холодного хранения на 15 – 30%. Химическая классификация яблок. 1. Поливитаминные. Скрещивания основываются на объединении признаков со ртов, взаимно дополняющих друг друга защитными веществами. Например, есл и яблоки сорта Первенец содержат много витаминов В и Р, а Полярное Олонич енко много С и Р, то скрещивая их, можно получить поливитаминные гибриды, в ысокое содержание Р-веществ будет скрываться обилием сахаров. 2. Каротиновые. Получаются скрещиванием желтомясых крупноплодных (Эдель стенер) друг с другом. Отбор ведется по интенсивности оранжевой окраски мякоти. 3. Антоциановые. Исходные красномясые сорта Молдавии, Грузии и Казахстан а. При селекции усиливается красная окраска мякоти (Р-активные соединени я) и устраняется обычно низкая ее сахаристость. 4. Гематогенные. Накапливающие много фолиевой кислоты и железа. 5. Бактерицидные (эфироносные). Отличаются ароматичной мякотью и накопле нием большого количества эфирных масел. Витамины Так называемые органические соединения, недостаток которых в пище вызы вает в начале заболевания средней интенсивности (гиповитаминозы), а при длительном недостатке тяжелые заболевания (авитаминозы). Смотря по тому , какого именно витамина недоставало в пище возникают различные заболев ания. Каждый из нас нуждается в ежедневном поступлении 16 различных витаминов, два из них могут заменяться провитаминами, такими как каротин (провитами н А) и провитамин D ( бета-ситостерин), которые в организме могут перехолдить в соответствующие витамины. Необходим и ряд витаминоподобных веществ в в иде холина, инозита, витамина F и других. В плодах и ягодах чаще всего присутствует два витамина, а именно: витамин С (аскорбиновая кислота) и витамин Р. Так как витаминная природа последне го многими отрицается, то вещества этого типа действия носят еще названи е Р-активные соединения, или полифенолы. Два универсальных витамина С и Р часто встречаются вместе и усиливают взаимное действие друг другу. Каждый витамин должен поступать в определенном количестве. Так, наприме р, суточная норма витамина С составляет для взрослого (но нестарого) здор ового человека, занятого работой средней трудности, 75 мг. При более тяжело й физической или умственной работе или в более пожилом возрасте потребн ость в нем возрастает до 100 – 200 мг. Содержание биоактивных веществ в плодах принято выражать в виде мг %, т.е. указывать, сколько мг интересующего нас соединения находится в 100 г плодо в или ягод или в 100 г мякоти плодов. Иногда указывают содержание в мг в мякот и из 100 г плодов, например смородины или крыжовника. В тех случаях, когда вещ ества очень много, например 300 – 500 мг%, выражают его содержание в %, приравни вая каждые 100 мг% - 0.1%. Для оценки полезности плодов как источника того или иного биоактивного соединения необходимо сопоставить суточную потребность в нем с тем его количеством, которые содержится в 250 г оцениваемых фруктов. Вынесем сводные данные о содержании витаминов во фруктах в таблицу: Витамин или провитамин Где содержится в большом количеств е Дозы в мг Профилак-тичес кая Терапевти-ческая п-А (каротин) В 2 В 9 С Е Р К 1 Шиповник, облепиха, рябина, абрикос, хурма, некоторые сливы, мандарины. Сливы, алыча, персик, шиповник, гранат Виноград, малина, земляника, вишня Шиповник, смородина черная, облепиха, земляника, цитрусовые, унаби Облепиха, миндаль, лещина, маслина, шиповник, рябина Арония, рябины мичуринские, мелкоплодные, яблоки Смородина, рябина, арония, облепиха, виноград 3 – 4 2 – 3 0.5 – 1 60 – 75 25 100 – 200 10 10 – 15 10 2 – 3 150 – 300 100 1000 – 2000 50 Определение витаминов. Особенности витаминов и методов их определения. Среди других химических веществ растений витамины занимают особое мес то тем, что они, как правило, содержатся в растениях в исключительно малом количестве. Если количество белков, жиров и углеводов в растительных тка нях составляет целые проценты, то количество витаминов измеряется лишь тысячными или десятитысячными долями процента. Это обстоятельство обу славливает особые требования, предъявляемые к химическим методам опре деления витаминов; такие методы должны отличаться высокой чувствитель ностью, оставаясь в то же время достаточно точными. Достигается это в бол ьшинстве случаев применением физико-химических методов анализа (хрома тография, колориметрия, спектрофотометрия, флюорометрия и т.д.). Трудност ью разработки простых, чувствительных и точных методов объясняется то о бстоятельство, что в настоящее время мы еще не имеем надежных химических методов для количественного определения некоторых известных витамино в, несмотря на то, что химическое строение их хорошо выяснено. Для установ ления наличия и для количественного определения таких витаминов пока п ользуются биологическими или микробиологическими методами. Название "витамины" не отражает химического состава этих веществ. К вита минам относятся вещества самого разнообразного строения и характера, п ринадлежащие к различным классам органических соединений. Среди них им еются углеводороды, спирты, кислоты и т.п. Поэтому естественно, что и метод ы определения отдельных витаминов не сходны между собой. Витамины синтезируются растениями. Несмотря на малое содержание их в ра стениях, народнохозяйственное значение их огромно; оно заключается в их роли в народном здравоохранении, связанной с проблемой питания. Огромно е значение имеют витамины также и в животноводстве. Универсальное распр остранение витаминов и в растительном мире говорит о том, что эти вещест ва играют самую значительную роль также и в физиологии самих растительн ых препаратов. Витамины необходимы человеку, животным и растениям для нормального рос та и поддержания жизни. Значение их, как регуляторов процессов обмена ве ществ в организме, очень велико. Витамины являются физиологически весьм а активными веществами. В живой клетке они выполняют роль биологических катализаторов, участвуя в энзиматических системах, связанных с окислит ельно-восстановительными функциями организма. Многие из них, в виде соот ветствующих деривативов, выполняют роль коферментов. Потребность в витаминах в основном удовлетворяется продуктами сельхох озяйственного производства. Поэтому задачей сельского хозяйства, в час тности растениеводства, является проведение мероприятий, обеспечивающ их высокое содержание витаминов во всех видах продукции, используемых в пищевых и кормовых целях и служащих сырьем для витаминной промышленнос ти. Эту задачу нельзя разрешить без наличия быстрых и точных методов кол ичественного учета витаминов в сельскохозяйственной продукции. В настоящее время уже проведены довольно многочисленные исследования культурных и дикорастущих растений на содержание витаминов и провитам инов. Результаты этих исследований показывают, что любой витамин или его провитамин, вероятно, можно найти в любом растении. Однако количественн ое содержание их не одинаково у различных видов и сортов; оно сильно зави сит также от воздействия внешних условий произрастания. Отдельные ткани одного и того же растения значительно различаются по со держанию витаминов. Так, например, аскорбиновая кислота сконцентрирова на в листьях и плодах; подземные части растений, как правило, содержат ее м ало. Концентрация аскорбиновой кислоты больше в листьях верхних ярусов, чем нижних. Наружные слои плодов, кочанов или корнеплодов содержат ее бо льше, чем внутренние. Аневрин сконцентрирован преимущественно в семена х растений, в которых он находится главным образом в зародыше и в тех нару жных слоях, которые при помоле отходят в виде отрубей. Некоторые количес тво аневрина находится в листьях, корнях и клубнях. Концентрация его в ли стьях и стебле постепенно снижается вниз по растению. Концентрация каро тина, за редким исключением, наибольшая в зеленых листьях. Так, наружные з еленые листья кочанной капусты содержат его намного больше, чем внутрен ние, белые листья. Корни и клубни содержат лишь следы каротина, за исключе нием разве только красных корней моркови. Различные ткани корня моркови различаются по содержанию каротина. Отдельные растения, плоды и даже отдельные семена могут значительно раз личаться между собой по содержанию витаминов. Между отдельными плодами существуют различия, связанные с их величиной и возрастом. Так, например, мелкие плоды и кочаны обычно содержат аскорбиновой кислоты больше, чем к рупные, что, вероятно, определяется степенью их зрелости; некоторое знач ение приписывают и относительной величине поверхности плодов, освещае мой солнцем, которая больше у мелких плодов. По содержанию каротина были обнаружен значительные различия у плодов томата с одного и того же раст ения и у корней одного и того же сорта моркови при выращивании в одинаков ых условиях. Различия в содержании аскорбиновой кислоты в плодах на одно м растении или в плодах различных растений одного и того же сорта могут б ыть значительно больше, чем различия между отдельными сортами в одинако вых условиях их выращивания. Однако при правильном отборе средних проб д ля анализа эти различия не мешают рассматривать аскорбиновую кислоту к ак признак, связанные с определением биологической единицей – видом и с ортом. Изучение овощных и плодовых культур по видам и сортам дало возможность в ыявить образцы с высоким содержанием аскорбиновой кислоты. Так наприме р некоторые виды дикого картофеля содержат в 2-3 раза больше аскорбиновой кислоты, чем обычные селекционные сорта; среди послдених также обнаруже ны значительные различия. Широкая амплитуда сорртовой изменчивости по этому витамину обнаружена у капусты (особенно кочанной) и томатов. Это ук азывает на большие возможности селекции путем отбора и выведения новых витаминных форм растений путем гибридизации. Изучение сортовой изменчивости содержания витаминов в культурных раст ениях показывает, что сортовые различия резко выявляются только в более или менее одинаковых условиях среды. Внешние условия даже в одном и том ж е пункте значительно меняются, вследствие чего изменяется и содержание витаминов. Поэтому при исследовании культур и сортов в отношении витами нов постоянно следует учитывать влияние условий выращивания. Было бы не правильно говорить о сортовых различиях культур в отношении витаминов, не указывая конкретно где, в каких условиях выращивались растения, ибо в других условиях сортовые различия могут быть иные. На большое значние условий среды для накопления в растении витаминов ук азывает изменчивость содержания последних в одном и том же сорте при вы ращивании в различных географических пунктах. Так, например, найдено, чт о сорта яблок, произрастающие на юге (Кавказ, Крым, Средняя Азия), содержат аскорбиновой кислоты меньше, чем произрастающие на севере. Аналогичная изменчивость была обнаружена и в отношении содержания этого витамина в плодах северных и южных видов шиповника. Влияние географического фактора наблюдается не только при передвижени и с севера на юг, но и в зависимости от высоты местности над уровнем моря. Т ак, было обнаружено для овощей, выращенных на Памире, увеличение содержа ния витамина С с высотой; на высоте 3860 м капуста, шпинат и салат содержат ви тамина С в 2-3 раза больше, чем в долине. Южные высокогорные виды шиповника п о содержанию этого витамина не уступают северным шиповникам. Изменчивость содержания других витаминов под влиянием различных услов ий среды освещена еще очень мало. Имеющиеся данные показывают, что неоди наковость условий мест произрастания может оказывать значительное вли яние на содержание аневрина в зерне пшеницы и ржи, чем видовой или сортов ой фактор. На накопление каротина в плодах, очевидно, влияют световые усл овия. Так, было найдено, что томаты несколько снижают содержание каротин а при выращивании в закрытом грунте. Наибольшее влияние на биосинтез аскорбиновой кислоты, очевидно, оказыв ает интенсивность света. Было показано, что после увеличения интенсивно сти света в 25 раз содержание аскорбиновой кислоты в листьях турнепса уве личивается в 8.3 раза (от 28.2 до 235 мг%). Показано также, что определенное значени е имеет фотопериод. Что касается влияния различного спектрального сост ава света, то на основании довольно ограниченных данных можно полагать, что биосинтезу аскорбиновой кислоты более способствуют длинноволновы е, чем коротковолновые лучи спектра. Определение аскорбиновой кислоты (витамина С) Недостаток аскорбиновой кислоты в пище человека ведет к развитию ряда н едомогания, приводящих постепенно к тяжелой болезни – цынге. Симптомы гиповитаминоза следующие: общая слабость, легкая утомляемост ь, вялость, сонливость (особенно весной), сердечная недостаточность. Сниж ается устойчивость к различным заболеваниям, в том числе простудным. Зам едляется заживление ран и выздоровление при различных болезнях. Ухудша ется общее самочувствие. Усиливаются склеротические изменения в сосуд ах. Увеличивается содержание холестерина в крови, и развивается холесте риновый атеросклероз. Происходят частые кровоизлияния из носа. Появляю тся синие пятнышки на коже (синяки без ушибов). Усиливается гипертония. Во зникают боль и кровотечения десен, кариес, расшатывание и выпадение зубо в. Аскорбиновая кислота (С 6 Н 8 О 6 ) об разует бесцветные кристаллы и является одноосновной кислотой, дающей с оли, типа С 6 Н 7 О 6 М. Аскорбиновая кислота отличается непрочностью вследствие наличия двой ной связи в молекуле. Она способна обративо окисляться и восстанавливат ься. При обратимом окислении образуется дегидроаскорбиновая кислота (С 6 Н 6 О 6 ), что обуславливается нал ичием в молекуле редко встречающейся в природе эндиольной группировки . Последняя способна чрезвычайно легко окисляться в дикетогруппировку , обуславливая тем самым исключ ительную восстановительную способность аскорбиновой кислоты. Молекул ярный вес аскорбиновой кислоты 176, эквивалентный вес 88. Она легко раствори ма в воде и в метиловом спирт, но в высших спиртах (например амиловом) почт и нерастворима. Умеренно растворима в ацетоне и совсем нерастворима в бе зводном серном эфире и петролейном эфире. Наиболее характерным свойством аскорбиновой кислоты является ее спосо бность давать химически и термодинамически обратимую ОВ-систему; с этим свойством обычно связывают ее физиологическую функцию. Количественное определение аскорбиновой кислоты Принцип метода. Метод основан на редуцирующих свойствах аскорбиновой кислоты. Синяя кр аска (индикатор), 2,6-дихлорфенолиндофенол, восстанавливается в бесцветно е соединение экстрактами растений, содержащими аскорбиновую кислоту (р еакция Тильманса). 2,6-дихлорфенолиндофенол показывает два вида реакции. Один вид обусловли вается изменением pH среды, как у обычных ацидометрических индикаторов; при этом происходит переход от интенсивного синего цвета в щелочной среде к бледнокрасному в кислой среде. Переход окраски происходит между рН 4 и 5, в этом интервале индикатор имеет фиолетовый цвет. Второй вид реакции – эт о ОВ-переход от темносинего окисленного состояния к бесцветному. Эту пос леднюю реакцию и используют для определения аскорбиновой кислот. Кисло тные вытяжки из растений титруют раствором индикатора (известного титр а) до наступления розового окрашивания, обуславливаемого избытком инди катора в кислой среде. На одну молекулу аскорбиновой кислоты (молекулярн ый вес 176) приходится две молекулы индикатора. При приготовлении этой крас ки получается натриевая соль 2,6-дихлорфенолиндофенола, имеющая молекуля рный вес 290. Точность метода во многом зависит от применяемой техники анализа. Так ка к аскорбиновая кислота является весьма лабильным веществом, то в растер той растительной ткани она быстро окисляется, превращаясь в дегидроаск орбиновую кислоту. Поэтому все операции, связанные со взятием средней пр обы материала для анализа, измельчением и растиранием навески и т.п., долж ны быть выполнены возможно быстрее. Дегидроаскорбиновая кислота может быть определена после восстановления ее, например, сероводородом, что в значительно степени усложняет технику анализа. Дегидроаскорбиновая ки слота в небольших количествах присутствует и в нерастертых тканях раст ений, но ввиду сравнительно незначительного содержания ее можно и не учи тывать при выполнении массовых анализов культур и сортов на аскорбинов ую кислоту. При оценке свежего растительного материала не допускается предварител ьная сушка его или какой-либо друго способ консервирования, так как коли чество аскорбиновой кислоты при консервировании уменьшается. Такие объекты, которые обладают очень короткой лежкостью (листовые овощ и, мелкие плоды, ягоды и пр.), следует анализировать в день их сбора, так как изменения в содержании витаминов в них происходят быстро. Реактивы и аппаратура. 1) 1-процентная соляная к ислота (23 мл концентрированой соляной кислоты, удельного веса 1.19 доводят д истилированной водой до 1 л); 2) 2-процентная метафосф орная кислота (НРО 3 ) ; 20 грамм кристал лической кислоты растворяют и доводят водой до 1л; она может хранится в хо лодильнике 2-3 недели, не подвергаясь порче; 1-процентный водный раствор ща велевой кислоты может заменить метафосфорную; 3) 2-процентная серная ки слота; 11.4 мл концентрированной кислоты, удельного веса 1.84, доводят водой до 1 л; 4) аскорбиновая кислота , кристаллическая; 5) иодистый калий, крист аллический; 6) крахмал, 1-процентный р аствор (как индикатор); 7) 10-процентный раствор с ернокислой меди (9.25 г CuSO 4 5 H 2 O растворяют в 50 мл воды); 8) 0.001 н. раствор иодата кал ия ( KJO 3 ); на аналитических весах берут 0.3568 г иодата, в ысушенного в течение 2 часов при 102 о , растворяют и доводят водой до 1л; полученный таким образом децинормальн ый раствор разбавляют в 10 раз и доводят водой до 1л; раствор удобно хранить в склянке со вставленной в нее микробюреткой, наполняющейся раствором с низу при помощи груши; 9) 0.001 н. раствор 2,6-дихлорфе нолиндофенола; на технических весах отвешивают 60 мг сухой краски, перено сят в мерную колбу на 200 мл, прибавляют 100-150 мл теплой дистилированной воды и 4-5 капель 0.01 н. щелочи; сильно взбалтывают колбу руками 10 минут, затем долива ют до метки водой и фильтруют через плотный фильтр в сухую колбу; 10) 2 микробюретки с граду ировкой на 0.01 мл, емкостью 1-5 мл. 11) пипетки на 5 и 10 мл; 12) мерные колбы на 100, 200 и 1000 мл; 13) коническая колба на 100 мл; 14) мерный цилиндр на 50 мл; 15) химические стаканы на 50 мл; 16) стеклянная воронка; 17) часовое стекло 18) фарфоровые чашки диам етром 20 см; 19) ступка диаметром 15 см; 20) технохимические весы на 200 г; 21) нож из нержавеющей ил и хромированной стали. Установление титра краски по аскорбиновой кислоте (по С.М.Прокош еву). Метод установления титра краски основан на параллельном титровани и раствора аскорбиновой кислоты краской и 0.001 н. раствором иодата калия. Та к как 1 мл 0.001 н. раствора иодата эквивалентен 0.088 мг аскорбиновой кислоты, то л егко рассчитать титр краски. Перед установлением титра краски растворяют несколько к ристалликов аскорбиновой кислоты приблизительно в 50 мл 2-процентной сер ной кислоты. 5 мл этого раствора титруют краской из микробюретки. Тотчас ж е после этого такой же объем раствора аскорбиновой кислоты титруют из др угой микробюретки точно 0.001 н. раствором иодата с прибавлением в колбочку перед титрованием нескольких кристалликов (около 5-10 мг) иодистого калия и 5 капель 1-процентного раствора растворимого крахмала. Применение больш их концентраций иодистого калия недопустимо, ибо при высоких концентра циях этой соли сильно тормозится оксисление аскорбиновой кислоты иодо м. Подготовка материала. Среднюю пробу предварительно грубо измельчают ножом на стеклянной пла стине, либо фарфоровой чашке. Необходимо помнить, что следы железа и меди катализируют разрушение витамина С. Весь процесс измельчения необходи мо выполнить как можно быстрее. Из измельченного и хорошо перемешанного материала берут на часовые сте кла две параллельные навески на технохимических весах для определения аскорбиновой кислоты. При одновременном анализе нескольких образцов с ледует стремиться все навески для определения аскорбиновой кислоты ср азу залить кислотой и после уже растирать до образования гомогенной сме си. Ход определения. Приготовление вытяжек. Навеску исследуемого материала в 5-10 г заливают в ступке 20 мл 1-процентной с оляной кислоты и быстро растирают в присутствии кислоты до образования гомогенной массы. Процесс растирания не должен длиться больше 10 минут. По лученную массу сливают из ступки (через стеклянную палочку и воронку) в м ерную колбу на 100 мл. Ступку споласкивают несколько раз 2-процентной метаф осфорной кислотой, которую выливают в ту же мерную колбу. Содержимое кол бы доводят до метки 2-процентной метафосфорной кислотой, колбу закрывают пробкой, сильно встряхивают и оставляют стоять около 5 минут. Затем содер жимое колбы выливают на сухой фильтр и отфильтровывают часть экстракта ( около 50 мл) в сухой стакан или колбу. Соляная кислота извлекает из растительной ткани как свободную, так и свя занную аскорбиновую кислоту. Метафосфорная же кислота осаждает белки и улучшает стойкость аскорбиновой кислоты в экстрактах. Метафосфорная кислота не извлекает связанной аскорбиновой кислоты из тканей. Поэтому если хотят определить отдельно свободную форму аскорби новой кислоты, то экстракцию материала производят одной только 2-процент ной метафосфорной кислотой. По разности же между результатами титрован ия экстрактов, полученных путем использования для экстракции смеси сол яной и метафосфорной кислот и одной метафосфорной килоты, узнается коли чество связанной аскорбиновой кислоты. Определение аскорбиновой кислоты в окрашенных вытяжках (по И.К. Мурри). Многие растительные материалы дают окрашенные экстракты, что з атрудняет определение аскорбиновой кислоты путем прямого титрования к раской (2,6-дихлорфенолиндофенолом). При анализе таких объектов аскорбино вую кислоту в экстракте окисляют краской, прибавляя значительный избыт ок ее. Избыток краски извлекают из экстракта таким растворителем, которы й сам не растворим в воде, растворяет краску и не растворяет пигментов эк стракта. По разности между количеством прибавленной к экстракту краски и ее остатком после реакции (определенном колориметрически) узнают како е количество краски идет на окисление аскорбиновой кислоты. Ход определения 10 г исследуемого материала экстрагируют 2-процентной метафосфорной кисл отой и доводят объем экстракта кислотой до 100 мл. После фильтрования берут градуированный пипеткой определенный объем окрашенного экстракта и н аливают в мерный цилиндр. Туда же наливают 2 мл 0.001 н. раствора краски и хорош о перемешивают. Через 2 минуты приливают пипеткой 10 мл. смеси толуола и изо бутилового спирта, закрывают цилиндр пробкой и осторожно взбалтывают о прокидыванием его в руках 8-10 раз. Оставляют в покое до полного разделения слоев. Избыток краски переходит в верхний слой и окрашивает его в красны й цвет (в темном месте интенсивной краски не изменяется в течение нескол ьких часов). Часть раствора наливают в колориметрическую пробирку и коло риметрируют. Для удобства наливания лучше удалить шариковой пипетко из цилиндра водный, нижний, слой. Раствором сравнения, наливаемым в другую к олориметрическую пробирку, служит раствор краски, который приготовляе тся так же, как опытный раствор, с той лишь разницей, что вместо растительн ого экстракта берут равный объем щавелевой или метафосфорной кислоты, к оторой пользовались при экстрагировании исследуемого материала. Определение дегидроаскорбиновой кислоты. Дегидроаскорбиновая кислота в небольшом количестве обнаружена во мног их растениях, ее наличие связано с физиологической ролью витамина С в ра стительных тканях. При обычной оценке растительного сырья по содержани ю витамина С можно ограничиваться определением восстановленой формы а скорбиновой кислоты ввиду незначительного содержания дегидроаскорби новой кислоты. Дегидроаскорбиновая кислота может образовываться в дов ольно значительных количествах во время слишком длительнго растирания и измельчения растительной ткани переда анализом благодаря соприкосн овению с атмосферным кислородом и активности окислительных ферментов. Так как дегидроаскорбиновая кислота не титруется 2,6-дихлорфенолиндофен олом, то она может быть определена только после восстановления ее в аско рбиновую кислоту. Принцип метода Сначала определяют в растительном экстракте описанным выше методоа со держание восстановленой аскорбиновой кислоты. Затем в том же экстракте дегидроаскорбиновую кислоту восстанавливают в аскорбиновую кислоту с ероводородом и снова определяют общее содержание восстановленой аскор биновой кислоты. По разности между вторым и первым определениями узнает ся количество дегидроаскорбиновой кислоты в экстракте. При определении всех формы аскорбиновой кислоты (свободной, связанной и дегидро-формы) количество фильтрата 100 мл может оказаться недостаточным, в таком случае следует увеличить величину навески и объем экстракта, сох раняя их изначальное соотношение. Ход определения. Наливают в стакан 50 мл. профильтрованного растительного экстракта. Чере з экстракт пропускают сероводорода в течение 20 минут (работа ведется в вы тяжном шкафу). Сероводород должен проходить через экстракт непрерывно. З атем для удаления сероводорода через экстракт пропускают углекислоту. Полноту удаления сероводорода через экстракт контролируют уксусно сви нцовой бумажкой, почернение которой указывае на наличие сероводорода. П осле полного удаления сероводорода экстрак, если он мутный, фильтруют, а при наличии центрифуги – центрифугируют. Затем берут две параллельные порции экстракта по 10 мл и титруют краской как обычно. Если необходимо определить количество титруемых краской посторонних п римесей, то к другим 2 параллельным порциям по 10 мл прибавляют 0.1 мл 10-процент ного раствора сернокислой меди, нагревают 10 минут при 110 градусах, охлажда ют и титруют краской. Полученную поправку вычитают из результата первог о титрования и узнают сумму восстановленной и дегидроаскорбиновой кис лоты в мг%. По разности между этой величиной и количеством мг% восстановле ной формы аскорбиновой кислоты (определенно до обработки сероводородо м) узнается количество дегидроаскорбиновой кислоты. Определение активной кислотности Биологическое значение активной кислотности. Биологическое значение концентрации водородных ионов в растительных т канях очень велико. Многие ферментативные процессы в растениях регулир уются реакцией среды, которая создается в результате поступления и обра зования различных веществ (минеральных солей, органических кислот). Скор ость различных биохимических процессов управляется активной кислотно стью среды. Культурные растения и их сорта в процессе своего формирования (как биоло гических особей) приспособились к определенной активности кислотности почвы. Например, местные сорта, сложившиеся в результате длительного во зделывания на кислых почвах слабо реагируют на известкование почв, тогд а как сорта, сформировавшиеся (в условиях разделывания) на нейтральных п очвах, сильно реагируют на известкование кислых почв. Точный метод определения концентрации водородных ионов может быть исп ользован не только для характеристики культур и соротов, но и в качестве биохимического метода контроля над происходящими изменениями в растит ельных материалах в процессе их переработки. Например, в соке свежеполуч енной мезги корнеплода свеклы был получен рН 6.00, по истечении же четырех ч асов хранения мезги в отжатом из нее соке был найден рН 6.30. В измельченных л истьях шпината и подсолнечника также наблюдаются сдвиги в нейтральную и щелочную сторону. В неизмельченных листьях происходят другие изменен ия в концетрации водородных ионов, чем в измельченных. По характеру и быс троте сдвигов в концентрациях водородных ионов можно судить о сортовых различиях. Поскольку эти различия связаны с характером окислительно-восстановите льных и других процессов, то определение рН дает возможность быстро уста новить происходящие изменения. Таким образом, определение рН может служ ить для контроля. Следует также подчеркнуть большое значение определении рН для различн ых биохимических процессов, например, при определении ферментов, витами нов и в других анализах. Необходимо отметить, что рН вытяжек или суспензий зерна изменяется в от носительно узких пределах вследствие большой буферной способности бел ковых веществ и фосфатов. Понятие об активной кислотности. Вода и водные растворы диссоциирующих веществ в той или иной степени ион изированы. В воде непрерывно протекает процесс диссоциации воды на водо родный и гидроксильный ионы и рекомбинация этих ионов в недиссоциирова нные молекулы воды. Скорость распада воды на ионы пропорциональна дейст вующей массе реагирующих молекул воды, а скорость рекомбинации воды про порциональна произведению действующих масс реагирующих ионов. Это сос тояние выражается формулой , где К – константа диссоциации, а символы в квадратных скобках – концен трации соответствующих ионов и молекул. Кислоты в водных растворах диссоциируют на водородный ион и отрицатель но заряжнный остаток кислоты. Сильные кислоты почти нацело диссоцииров аны на ионы, а слабый – диссоциированы в слабой степени. Наприме, 0.1 н. раст вора HCl диссоциирован на 91 %, а такой же раствор уксусной кислоты только на 1.36%. Следовательно, сила кисло т зависит не от общего количества находящегося в них водорода, а только о т ионов водорода. От концентрации водородных ионов зависит истинная кис лотность или щелочность среды. В настоящее время принято обозначать концентрацию водородных ионов си мволом рН для растворов не крепче нормального. Численное выражение рН пр едставляет собой десятичный логарифм числа, показывающего количество граммов водородных ионов в 1л. При этом отрицательный знак опущен. Понятие о буферности Измерение рН растворов сильных кислот в присутствии слабых концентрац ий солей этих кислот показывает, что концентрация водородных ионов изме няется мало (при разбавлении растворов). Совсем иначе обстоит дело для ра створов слабых кислот и их солей. Величина рН слабых кислот в значительн ой степени зависит от присутствия в растворе щелочных солей этих кислот . Прибавление щелочных солей в растворы слабых кислот может изменить рН на несколько единиц от рН первоначального раствора. Величина концентра ции протонов, соответствующая сильнокислой реакции, может быть достигн ута прибавление кислот, более сильная щелочная область устанавливаетс я прибавлением более сильных оснований и их солей. Все эти смеси называю т буферными растворами, или смесями. Примерное вычисление рН смесей солей и кислот может быть произведено по простейшей формуле , где К – константа диссоциации. Необходимая концентрация водородных ионов может быть произведена по н ашему желанию, что имеет большое практическое значение и чем постоянно п риходится пользоваться. Смеси кислот с их солями (буферные смеси) обладают важным свойством, сост оящимх в устойчивом сохранении [ H ] при сильных разведениях. Это свойство представляет большую практическую ценность. Однако буферное действие этих разбавленных растворов понижается. Всякий буферный раствор может нейтрализовать только известное предельное количество кислоты или щел очи т.е. обладает определенной буферной емкостью. Емкость буфера тем бол ьше, чем больше молей буферного вещества будет содержаться в данном раст воре. Вытяжки из некоторых растительных объектов обладают значительно й буферностью. Определение концентрации водородных ионов Для определения рН существует много методов, основывающихся на электро метрических и колориметрических принципах. Хорошие результаты могут б ыть получены при определении рН по колориметрическому метода Михаэльс а с набором индикаторов и цветной шкалы в пробирках. Для более точных опр еделений рН необходимо пользоваться электрометрическим методом. Сущес твующие в настоящее время приборы, потенциометры, позволяют производит ь определение рН достаточно быстро и точно. Их колориметрических методов удобны для пользования методы с индикато рными бумажками, пропитанными индикаторами (колориметр Вульфа), или с на бором индикаторных карандашей (колориметр, предложенный Е. Хорошей). Эти методы отличаются широкой возможностью применения в тех случаях, когда точность определения рН достаточна от 0.1-0.2, так как ошибка в определении рН возможна в этих пределах. В ряде случаев такая точность является удовле творительной. При изучении биохимических процессов необходима большая точность. Определение рН при помощи карандашного колориметра. Весь прибор заключен в коробку размером 9х17х5 см и состоит из набора 6 индик аторных карандашей и 6 цветных шкал, для сравнения объединенных попарно, предметного стеклышка, стеклянной палочки и фильтровальной бумаги. Метод основан на измерении окраски индикатора, нанесенного карандашом тонким слоем на смоченную опытным раствором фильтровальную бумагу, под влиянием рН этого раствора. Каждый карандаш чувствителен только в опред еленном пределе шкалы рН и каждому карандашу соотвествует своя шкала, о бозначенная одним и тем же номером Предельные значения чувствительности каждого карандаша: №1………………….1.2-2.4 №4………………………………6.6-8.6 №2………………….2.6-5.0 №5………………………………8.6-10.4 №3………………….5.2-6.6 №6………………………………10.6-12.6 Этот метод применим для приготовления растворов с определенными грани цами рН, для быстрых ориентировочных определений в полевых условиях и эк спедициях, для быстрых но приближенных определений рН в соках и мезге, ос обенно при наличии небольших проб материала. Точность метода не превыша ет 0.1. Для изучения биохимических процессов необходимо применять более т очные методы. Ход определения. На предметное стекло кладут полоску беззольной фильтровальной бумаги и смачивают ее испытуемой жикдостью до ровного увлажнения. Как только ка пля растеклась по всей бумажке, на ней делают карандашом несколько легк их равномерных по нажиму штрихов. Ожидают некоторое время, чтобы нанесен ные на бумагу штрихи приняли постоянную окраску. После этого полученные оттенок отыскивают на соответствующей взятому карандашу шкале. Если рН жидкости приблизительно известен, то сразу выбирают карандаш, со ответствующий предпологаемому рН. В случае, если рН неизвестен, определе ние начинают с карандаша №3 (рН 5.2 – 6.6). Если при сравнении со шкалой находят, что оттенок штриха совпадается с окраской, соответствующей рН 6.6 (или 5.2), то гда берут соседний карандаш №4 (или №2) и также наносят штрихи. В случае совп адения оттенка, соответствующего рН 6.6 (или 5.2) по другой шкале (4 и 2, с которой надлежит сравнивать оттенки), тогда истинное значение рН лежит между кра йними значениями рН двух шкал. Этим методом можно определять рН взвеси, о крашенных вытяжек, соков и мезги. В случае определения рН в мезге берут по лоску фильтровально бумаги шириной в 1 см и погружают ее одним концом в ме згу. Увлажнение бумаги будет быстро распространяться к противоположно му концу. На эту увлажненную, но не окрашенную мезгой часть бумаги нанося т штрихи индикаторным карандашом. В случае окрашенных соков или вытяжек на бумагу наносят несколько больших капель и штрихи наносят также на увл ажненные, но не окрашенные части бумаги. Электрометрическое определение рН. Метод основан на том, что между электродом, насыщенным водородом и жидко стью, имеющией водородные ионы, возникает скачок потенциала, зависящий о т концентрации последних. Потенциал электрода можно определеить с помо щью другого электрода, имеющего постоянный потенциал. Последний называ ется стандартным полуэлементом. Если соединить два электрода, то получи тся элемент, ЭДС которого можно измерить. Обычно неизвестную разность по тенциалов уравновешивают противоположно направленной известной. Прин цип этот иллюстрируется схемой, изображенной на рис. Здес С – свинцовый аккумулятор и х – неизвестная ЭДС, которую надо опре делить. СА и СБ – толстые провода с небольшим сопротивлением, которым мо жно пренебречь. АБ – проволока, имеющая одинаковое поперечное сечение по всей длине. По тенциал между АБ равномерно падает вдоль проволоки. Контакт В, скользящи й по проволоке, так соединен с неизвестным элементом х, что положительны й полюс аккумулятора соответствует положительному полюсу элемента, а о трицательный полюс соединен с отрицательным полюсом аккумулятора. Таким образом, в цепи Ах (через гальванометр) имеются две ЭДС: Е между А и В и между А, х и В, направленные одна против другой. Скользящий контакт двигаю т вдоль проволоки АБ до тех пор, пока гальванометр не укажет на отсутстви е тока. Это будет тем состоянием, когда разность потенциалов уравновешен а. Так как проволока АБ на всем протяжении имеет одинаковое поперечное с ечение, то разность потенциалов между А и В будет (АВ:АБ)Е, где Е - ЭДС аккуму лятора, а АВ:АБ – отношение сопротивления, равное отношению длин отрезк ов. Если вся длина проволоки равна 1000 мм, то ЭДС неизвестного элемента буде т равна (АВ:1000)Е. АВ представляет отсчет по линейке, а Е может быть легко определено перек лючением на место х элемента с известной электродвижущей силой (наприме р при включении элемента Вессона). Аппаратура – электрометрическая устновка, включающая: 1) Аккумулятор в качеств е источника тока; 2) Нормальные элементы; 3) Гальванометр; 4) Каломелевые электрод ы; 5) Хингидронный электро д; 6) Реостаты, ключ для кра тковременного включения тока, переключатели, агар-агаровые дугообразн ые ключи (рис. ) Аккумулятор должн иметь напряжение 2.0 В; если напряжение упало ни же 1.9 В, его необходимо зарядить вновь. ЭДС недавно заряженного аккумулято ра изменяется немного при разряде в течение первых минут, поэтому рекоме ндуется дать разрядиться аккумулятору в течение 10 – 15 минут, включая его в систему перед измерением. В качестве нормального элемента применяется элемент Вес сона, который содержит раствор сульфата кадмия, насыщенный при всех темп ературах. Положительным полюсом элемента служит чистая ртуть, покрытая слоем пасты из сернокислой закиси ртути, тщательно смешанной с ртутью. О трицательный полюс – амальгама, содержащая 12.5% кадмия (по весу). Электродв ижущая сила стандартного элемента между 15 о и 25 о равна 1.0183 + 0.000004 (20 – t o ). Для определения рН применяются чувствительные стрел очные гальванометры. Вр время измерения ток не должен непрерывно проход ить через прибор. Гальванометр может быть заменен капиллярным электрод ом. Каломелевые электроды употребляются в качестве стандартных полуэлеме нтов. Они состоят из ртути и каломели, над которыми находится раствор хло ристого калия. Слой чистой ртути помещают на дно электродного сосуда. На ртуть помещают слой, состоящий из ртутно-каломелевой пасты. Эта смесь по лучается при совместном растирании ртути и каломели так, чтобы ртуть при шла в мелко раздробленное состояние. Черную или серочерную смесь промыв ают несколько раз раствором хлористого калия, которым намерены наполни ть сосуд. Удобной формой каломелевого электрода является сосуд, изображ енный на рис. В зависимости от того, какой концентрации взят раствор для наполнения со суда каломелевого электрода, их обозначают 0.1 н., 1.0 н., 3.5 н., или насыщенный кал омелевый электрод. Разность потенциалов всех стандартных электродов отнесена к нормально му оригинальному водородному электроду. Он равняется: для 0.1 н. каломелевого электрода . . . . . . . . . . 0.3380 + 0.00006 ( t o – 18) для 1. 0 н. калом елевого электрода . . . . . . . . . .0.2864 для 3.5 н. калом елевого электрода . . . . . . . . . . 0.2549 для насыщенного каломелевого электрода . . . 0.2503 Снаряжение каломелевого электрода. Изготовленный сосуд наполняют до краев хромовой смесью и оставляют на 24 часа. Стеклянную трубку с вплавленной в нее платиновой проволокой также выдерживают 24 часа в этой смеси. Затем сосуд и стеклянную трубку с платино вой проволокой промывают сначала в водопроводной воде, а затем в дистили рованной. Кран на боковой трубке не смазывают вазелином, чтобы замыкание происходило через смоченный шлиф даже при закрытом кране. Вода перегоня ется дважды; каломель, хлористый калий и металлическая ртуть должны быть специально очищены. В сосуд наливают ртути столько, чтобы ею была вполне покрыта платиновая проволока трубки, затем смазывают штиф и плотно вставляют стеклянную тр убку, ее больше не вынимают. Сосуд укрепляют в горизонтальном положении. После этого в фарфоровой ступке растирают несколько граммов каломели с приготовленным раствором хлористого калия (0.1 н. и нормального или насыще нного); после некоторого времени стояния раствор сливают, приливают его вновь; растирание и сливание повторяют несколько раз. Затем кашицу из ка ломели наносят тонким слоем на ртуть, всасывая через боковую трубку (для этого пользуются верхним краном) вместе с небольшим количеством раство ра хлористого калия. После того как каломель осядет, сосуд на 2 /3 также путем всасывания наполняют соотве тствующим раствором хлористого калия (при наполнении насыщенным раств ором хлористого калия необходимо, чтобы на каломели были кристаллы этой соли). Во всех случаях заботятся о том, чтобы в боковой трубку не было пузы рька. Иногда в изгибе трубку делают небольшое раздутие для улавливания п узырька воздуха. Хингидронный электрод может заменить собой водородный электрод. Хинги дрон представляет собой растворимый в воде (в незначительных количеств ах) порошок, состоящий из соединения хинона и и гидрохинона в эквимолеку лярных количествах. При растворении хингидрон распадается на свои составные части, причем м ежду ними устанавливается динамическое равновесие С 6 Н 4 О 2 + Н 2 С 6 Н 4 О 2 Н 2 хинон гидрохинон Следовательно, хингидронный электрод можно рассматривать как электрод , обладающий весьма малым давлением водорода. Потенциал хингидронного э лектрода меняется с изменением концентрации водородных ионов, так же, ка к и потенциал водородного электрода. Разность потенциалов между хингид ронным и насыщенным каломелевым электродами составляеит 0.4541 В. Электрод представляет собой кусок проволоки или пластинки из платины (г ладкой). Для измерения электрод погружают в раствор (5 – 10 мл), взболтанный в течение 30 секунд с 10 – 50 мг хингидрона. Электрод перед употреблением пре дварительно очищаю нагреванием с хромовой смесью и до определения сохр аняют в ней. Приготовление хингидрона. 100 г железных квасцов растворяют в 300 мл воды при 65 о этот раствор выливают в раствор 25 г гидрохинона в 300 мл воды. Кристаллы хингидрона осаждаются в виде тонких игл. После охлаждения льд ом их отсасывают. Выход 15 г. После перекристаллизации из воды этот хингидр он содержит только следы железа. Ход определения. Для приготовления вытяжек берут навеску муки семян 10 г и смешивают с 100 мл х орошо прокипяченной дистилированной воды. После часа стояния хорошо вз балтывают, дают отстояться и набирают пипеткой с обрезанным или оплавле нным кончиком, в который вставлен плотный тампон (для фильтрования), неск олько миллилитров экстракта. Листья, плоды, клубни измельчают на мясоруб ку (иногда два раза) и указанной выше пипеткой отбирают 20 – 30 мл сока. Удобн о бывает предварительно отжать мезгу. Раствор или сок наливают в химичес кий стакан на 50 – 100 мл (удобнее пользоваться пробиркой с конусовидным дно м), насыпают в него щепотку хингидрона (чтобы после взбалтывания оставал ся осадок), опускают в него вычищенный платиновый электрод, который соед инен с подвижным контактомю Измеряемый элемент состоит из двух электро дов стандартного полуэлемента, соединенного с исследуемым электродом ( раствором, соком), в который прибавлено немного кристаллов хингидрона (х ингидронный электрод). В этот же стакан вставляют дугообразную трубку, н аполненную раствором хлористого калия и агар-агара в воде. Другой конец ее опущен в промежуточный сосуд с насыщенным раствором хлористого кали я; в этот сосуд опущен каломелевый электрод (малая цепь). После этого включ ают цепь и при помощи подвижного контакта находят нулевое положение кон такта на линейке. Затем включают в малую цепь нормальный элемент Вестона и находят нулевое положение, передвигая для этого скользящий контакт. Так как электродвижущая сила элемента Вестона известна, то ЭДС испытуем ого хингидронно-каломелевого элемента находят по формуле при 18 градусах Цельсия, где l – отсчет длины отрезка по линейке при включении в цепь испытуемого элемента (сок, вытяжка), l 1 – отсчет при вкл ючении элемента Вестона. Повторив определение с новой порцией раствора, берут среднее и вычисляю т рН по формуле: ,где 0.00068( t -18) и 0.0002( t -18) являются тем пературными поправками. Сильнокислая среда – рН 0 – 3, слабокисла – рН 4 – 6, слабощелочная – рН 8 – 10, сильнощелочная – рН 11 – 14, нейтральная – рН 7. Принципы измерения с двумя реостатами (магазинами сопротивлений). Вмест о измерительной линейки удобной пользоваться установками с магазинами сопротивлений. В большой круг (рис. ) включены реостаты 1 и 2 на 1000 или 1100 Ом кажд ый, в малый круг – реостат 2. В реостате 1 все ключи сняты, следовательно вкл ючено 1000 Ом, а в реостате 2 все ключи в своих гнездах, и ток через реостат прох одит без сопротивления. Если же из реостата 2 мы переставим ключи в соотве тствующие места реостата 1, то этим введем сопротивление в малом круге це пи, не изменив общего сопротивления в большом круге цепи. Ход определения сводится к тому, чтобы довести сопротивление в малой цеп и до компенсации тока в большой цепи. Для этого в малой цепи при включенно м стандартном элементе увеличивают сопротивление путем перестановки к лючей из реостата 2 в такие же гнезда реостата 1 (включая на мгновение галь ванометр). Ключи подбирают до тех пор, пока гальванометр не покажет отсут ствие тока. Тогда подсчитывают введенные сопротивления, суммируя сопро тивления (в омах) в магазине 2, и записывают. Затем включают испытуемый кал омельно-хингидронный электрод и точно таким же образом достигают полно й компенсации тока перестановкой ключей. Подсчитав, записывают новое со противление в магазине 2. По формуле узнают ЭДС испытуемого элемента: , где а – сопротивление в омах при включении испытуемого раствора, б – со противление при включении нормального элемента, Е – электродвижущая с ила в вольтах. Упрощенная формула: , где 0.4541 – разность потенциалов хингидронного и насыщенного каломелевог о электрода. В цепи, где разность потенциалов между раствором и металлом определяетс я водородными ионами, одной единице рН соответствует потенциал около 58 м В (0.058 В). 2.5н NaOH – 0.05 н 5 мл NaOH – 245 мл H 2 O Vhcl (0.1000) = 5 мл ( v naoh = 10.6, 10.7) Навеска ябл. зел – 2г. титровалось 2.6, 2.6 кр – 2г титровалось 3.6, 3.7
1Архитектура и строительство
2Астрономия, авиация, космонавтика
 
3Безопасность жизнедеятельности
4Биология
 
5Военная кафедра, гражданская оборона
 
6География, экономическая география
7Геология и геодезия
8Государственное регулирование и налоги
 
9Естествознание
 
10Журналистика
 
11Законодательство и право
12Адвокатура
13Административное право
14Арбитражное процессуальное право
15Банковское право
16Государство и право
17Гражданское право и процесс
18Жилищное право
19Законодательство зарубежных стран
20Земельное право
21Конституционное право
22Конституционное право зарубежных стран
23Международное право
24Муниципальное право
25Налоговое право
26Римское право
27Семейное право
28Таможенное право
29Трудовое право
30Уголовное право и процесс
31Финансовое право
32Хозяйственное право
33Экологическое право
34Юриспруденция
 
35Иностранные языки
36Информатика, информационные технологии
37Базы данных
38Компьютерные сети
39Программирование
40Искусство и культура
41Краеведение
42Культурология
43Музыка
44История
45Биографии
46Историческая личность
47Литература
 
48Маркетинг и реклама
49Математика
50Медицина и здоровье
51Менеджмент
52Антикризисное управление
53Делопроизводство и документооборот
54Логистика
 
55Педагогика
56Политология
57Правоохранительные органы
58Криминалистика и криминология
59Прочее
60Психология
61Юридическая психология
 
62Радиоэлектроника
63Религия
 
64Сельское хозяйство и землепользование
65Социология
66Страхование
 
67Технологии
68Материаловедение
69Машиностроение
70Металлургия
71Транспорт
72Туризм
 
73Физика
74Физкультура и спорт
75Философия
 
76Химия
 
77Экология, охрана природы
78Экономика и финансы
79Анализ хозяйственной деятельности
80Банковское дело и кредитование
81Биржевое дело
82Бухгалтерский учет и аудит
83История экономических учений
84Международные отношения
85Предпринимательство, бизнес, микроэкономика
86Финансы
87Ценные бумаги и фондовый рынок
88Экономика предприятия
89Экономико-математическое моделирование
90Экономическая теория

 Анекдоты - это почти как рефераты, только короткие и смешные Следующий
Очень часто на асфальте можно встретить надписи: "Я тебя люблю!", "Ты моё счастье!", "Спасибо, что ты есть!".
Потому что в наши ровный асфальт - это редкость, и его нельзя не любить.
Anekdot.ru

Узнайте стоимость курсовой, диплома, реферата на заказ.

Обратите внимание, реферат по химии "Определение содержания аскорбиновой кислоты в яблоках различных сортов", также как и все другие рефераты, курсовые, дипломные и другие работы вы можете скачать бесплатно.

Смотрите также:


Банк рефератов - РефератБанк.ру
© РефератБанк, 2002 - 2016
Рейтинг@Mail.ru