Реферат: Избирательное повреждение интерстициальных клеток Кэйждела - текст реферата. Скачать бесплатно.
Банк рефератов, курсовых и дипломных работ. Много и бесплатно. # | Правила оформления работ | Добавить в избранное
 
 
   
Меню Меню Меню Меню Меню
   
Napishem.com Napishem.com Napishem.com

Реферат

Избирательное повреждение интерстициальных клеток Кэйждела

Банк рефератов / Медицина и здоровье

Рубрики  Рубрики реферат банка

закрыть
Категория: Реферат
Язык реферата: Русский
Дата добавления:   
 
Скачать
Архив Zip, 31 kb, скачать бесплатно
Заказать
Узнать стоимость написания уникального реферата

Узнайте стоимость написания уникальной работы

Избирательное повреждение интерстициальных к леток Кэйждела (ИКК ) ме тиленовым синим и светом ведёт к потере медленных волн . Инкубация в 50 ммоль метиленового синего (МС ) и последующая интенсивная илл юминация приводит к исчезновению активности м едленных волн в ИКК подмышечного слоя цир кулярных мышц в препаратах т олстого к ишечника собак . Это часто сопровождается сниж ением потенциала покоя мембран . Реполяризация клетки к исходным – 70мВ не восстанавлива ет активность медленных волн , что указывает на то , что МС непосредственно прерывает образование медленных волн . Пос л е инкубации МС , 2-х минутная иллюминация измен яет конформацию митохондрий в ИКК от очен ь конденсированной до ортодоксальной , без инд уцирования каких-либо других видимых изменений в гладкомышечных клетках . После 4-10 минутной иллюминации , ИКК начинают про г редиент но разрушаться увеличенными и разорванными ми тохондриями , теряют цитоплазматическую контрастность и детальность , появляются разрывы плазматиче ских мембран . В то же время не выявляю тся повреждения в гладкомышечных и нервных клетках . Ультраструктура с оединительных щелей сохраняется . Интенсивная иллюминация без преинкубации МС приводит к утрате медлен ных волн , при этом не нарушается ультрастр уктура в препаратах ИКК . В препаратах глад ких мышц , без подмышечного слоя ИКК , МС и свет не изменяют электричес к ой активности . Авторы считают , что корреляция между избирательным повреждением подмышечных ИКК и избирательной утратой активности мед ленных волн указывает на то , что ИКК и грают незаменимую роль в генерации медленных волн. Концепц ия регуляторной роли ин терстициальных клеток Кэйджела в функционировани и желудочнокишечного тракта (ЖКТ ) впервые была выдвинута Stach в 1972 (30), Duchon et al . В 1974 (6), и Faussone - Pellegrini в 1977 (9). И только в 1982 году была выдвинута гипо теза – ИКК играют роль в генерации ауторитмичности ЖКТ ( Thunberg ) . Очевидность того , что ИКК способствуют генерации акт ивности синусового узла и последующей генера ции медленных волн было установлено на ря де тканей , включая тонкий кишечник и толст ый кишечник . В ажно и то , что ИКК обнаруживаются в тех областях (подмышечные сплетения толстого кишечника ), где образуются медленные волны. В толстом кишечнике собак , очевиднос ть роли ИКК в генерации активности синусо вого узла вытекает из следующего : 1. К огда сети ИК К удаляются , слой циркулярных мышц (ЦМ ) не может генерировать активность медленных волн 2. В очень тонких пр епаратах , состоящих из сети ИКК и связанны х с ними гладкомышечных клеток , постоянно записываются спонтанные медленные волны. Авторы пок азали , что электрич еская активность записанная на поверхности по дмышечного слоя – следствие электрического в заимодействия между телом ЦМ и подмышечной сетью ИКК вместе с гладкомышечными клеткам и (ГМК ). В результате излишних пар ИКК к ГМК с помощью соед и нительных щелей , роль каждого типа клеток в генер ации медленных волн не может быть определ ена точно в электрофизиологических исследованиях с применением изолированных мышечных лоскуто в . До появления электронной микроскопии , большинство се лективных методов для ра спознования ИКК основывались на способности п оследних аккумулировать краситель МС вне физи ологических условий . Взависимости от условий МС может первично связываться ИКК или нер вной тканью . В пршлом идентификация ИКК с использовани е м прижизненного окрашив ания МС применялась только на тонком кише чнике мышей , гвинейских свиней и кроликов . В свежих публикациях , авторы демонстрируют сп особность аккумуляции ИКК толстого кишечника собак . В том же исследовании , авторы показ али , что в пода в ленном свете М С не вызывает изменений ультраструктур в окрашенных ИКК и знчительно не изменяет м едленных волн. В предварительном исследовании , авторы выяснили , что активность медленных волн тон кого кишечника мышей исчезает , когда селектив но ок рашенные ИКК освещаются . Более т ого , иллюминация МС-окрашенных ИКК в культурир уемых кусочках тонкого кишечника мышей привод ила к потере спонтанной ритмичной контрактиль ной активности , это эффект был обратимым н а короткий период при иллюминации низкой инт е нсивности , но необратимым в др угих случаях. Задачей авторов было обнаружить мет од специфического повреждения ИКК толстого ки шечника собак . Фототоксические свойства МС ис пользовались для изучения вероятных эффектов на активность медленных волн и изменени я ультраструктуры различных типов клеток связ анных с подмышечной сетью ИКК. МЕТОДЫ. Ткани и препараты. Собаки обо их полов были убиты передозировкой калиевой соли фенобарбитала (100 мг / кг ). Примерно 5 см проксимального отдела толстой к ишки было взято от каждой собаки , отступя 5 см дистальнее о т илеоцекального сочленения . Затем толстый ки шечник вскрывался продольным разрезом . Затем очищенный сегмент прикреплялся ко дну диссекц ионной чаши Сильгарда наполненной постоянно о ксигенированным ( 95% кислорода и 5% СО 2) раствором Кребса . Чтобы изучить специфичность действия МС и света , авторы исследовали действия М С и света и на препаратах ИКК-ЦМ (подмы шечная сеть ИКК и ЦК ) и на препаратах ЦМ (ЦМ , отделённые от подмышечного слоя ИКК и глад комышечных клеток. Примерно 2 кв . мм . Ткани , с подмышечн ой поверхностью , обращённой вверх прикреплялся ко дну переносного держатель . Затем ткан была разрезана вдоль прикреплённых краёв , и сключая один край , где была вырезана полос а длиной 10 мм , ширин ой 3 мм вдоль дли нной оси ЦМ клеток . Свободный конец полосы был взят на хирургический шёлк (0,5 мм в диам ). Держатель перемещали в разделённую камеру причём прикреплённую ткань – в записывающую камеру , свободный конец в стимул ирующую камеру . Свободный ко н ец та кже соединяли с сильным преобразователем. Лекарства и растворы. Все растворы вводимы в раздельную камеру были нагреты до 37 гр и оксигенированы кислородом 95% - СО 205%. Состав раствора Кребса был такой : 120,3 NaCl , 5,9 KCl , 2,5 CaCl 2 , 1,2 MgCl 2 , 20,2 NaHCO 3 , 1,2 NaH 2 PO 4 и 11,5 глюкозы . МС (сигма ) был расстворён в растворе Кребса . Внутриклеточные записи. Внутриклеточные записи были сделаны микроэлектродами имевшими пиковое сопротивление 30-50 ом . Микроэлектроды бы ли заполнены 3 М KCl . Заполненны е микроэлектроды по дключались к держателю соединённому с электро метром . Данные электрометра отражались на осц илоскопе и записывались на принтер . Электриче ские импульсы подавались на мышечный лоскут . Сила электрического поля отражалась на о сцилоскопе и зап и сывалась на прин тере . Мышечные лоскуты подлежащие воздействию импульсами продолжительно оксигенировались раствором Кребса с частотой 500 мл / час в разделительной камере как минимум 2 часа при температуре 37 град перед началом эксперимента. Во вре мя инкубации МС (50 ммоль ) интенсивность света была низкой . Затем п репараты мылись раствором Кребса примерно 5 ми нут . Препараты иллюминировались оптическими волок онными лампами (максимальная интенсивность состав ила 50 мВ /кв. см . поверхности ткани удалённой от источ ника света на 3,5 см ). интенсивность света из мерялась цифровым фотометром . После эксперимента лоскуты немедленно помещали в формалин. Световая и электронная микроскопия. После экс периментальной процедуры Сильгард отделяли отдер жа теля с тканью , фиксированной формалином . Лоскуты хранились при температуре 4 град . Каждый лоскут делили на 4-6 кусочков ткани . П еред дальнейшей процедурой степень связывания МС определялась стереомикроскопией . Затем ткань мылась 0,1 м фосфатным буфером , ф и ксировалась 2% осмической кислотой в 0,1 М фосфатном буфере в течении 1 часа . Ультратон кие образцы фиксировались спиртовым ацетатом мочевой кислоты и исследовались в электронном микроскопе. Статистический анализ. Статистическая значим ость данных внезависимости от различных условий была установлена Student ’ s тестом. Результаты. Электрофизиологические исследования. Эффекты света на МС окрашенные ИКК-ЦМ препараты . Инкубация ИКК-ЦМ п репаратов в 50 ммоль МС + 45 мин деполяризация кле ток повышают продолжительность медленных волн . Чтобы уменьшить неспецифические экстра целлюларные эффекты МС вовремя иллюминации , т кань мылась раствором Кребса . Во время это го устранялись эффекты МС на активность м едленных волн . Эта часть эксперимента вып о лнялась в подавленном свете. После инкубации в ИМС и мытья интенсивная иллюминация упраздняла активность в ИКК-ЦМ препаратах . Упразднение меделнных вол н сопровождалась деполяризацией клеток к мемб ранному потенциалу – 47 мВ (колебания от – 64 мВ д о – 42мВ ). Совместно этому исчезли фазовые сокращения и тонус лоскута повысился . Активность медленных волн не п оражалась , когда ИКК-ЦМ препараты иллюминировались с максимальной интенсивностью в течениии 10 минут без предварительной инкубации в МС. Упразднение медленных волн не было прямым эффектом деполяризации с того мом ента , как реполяризация не восстанавливала ак тивность медленных волн , даже когда реполяриз ация применялась до того , как амплитуда ме дленных волн полностью уменьшала с ь . Эти наблюдения указывают на то , что эфф екты МС и света на механизм генерации активности медленных волн не зависят от мембранного потенциала . В противоположность это му изменения активности медленных волн , вызва нные повышением внеклеточной концентрации к а лия зависят исключительно от деп оляризации , как только реполяризация мышечных лоскутов полностью обратит эффекты . Кроме это го , упразднение активности медленных волн мож ет быть обнаружено при деполяризации лишь потенциалом 8-12 мВ (медленные волны упраздн я ются при величинах мембранных по тенциалов – 60,4 мВ ) . Скорость , с которой упразднялись мед ленные волны варьировала непосредственно с ин тенсивностью света . При иллюминации с максима льной интенсивностью , медленные волны исчезают в пределах 0,8-3 минут . Уменьшение интенсив ности света повышает продолжительность промежутк а исчезновения медленных волн до 3-12 минут. Время необходимое для исчезновения медленных волн также зависит от длительности инкубации в МС . Когда препараты ИКК-ЦМ инкуб ировались в МС в течении 7 мину т с последующим периодом прмывки 5 минут , и ллюминация с максимальной интенсивностью устраня ла медленные волны через 4-8 минут ( n =5). Эффекты МС и света были необратимы. Эффекты МС и свет а на ЦМ препараты : Специфи чность действия МС изучалась с исполь зованием ЦМ препаратов , которые не содержат подмышечной сети ИКК . Инкубация в МС в течении 45 минут не вызывала эффектов на электрических параметрах препаратов ЦМ , находя щихся в покое (мембранный потенциал покоя =-62,8 мВ ), так же не было эффектов при иллюминации с максимальной интенсивностью в течении 6 минут ( n =4), что было вдвое больше м аксимального количества времени , требуемого для упразднения медленных волн в ИКК-ЦМ препара тах в тех же условиях. Принимая во внимание тот факт , что способность препаратов ИКК-ЦМ к генерации медленных волн была избирательно устранена МС и светом , подобная активность ЦМ препаратов не был а устранена . После обработки МС и светом и промывки раствором Кребса , добавление BaCl 2 (0,5 м М ) и BAY K 8644 (0,1 мМ ) снижает мембранный потенциал покоя до – 46,1 мВ и вызывает появление шипоп одобых потенциалов с частотой , амплитудой и длительностью соответственно :18,7 циклов / мин ; 16,5 мВ ; 1,6 с . Ч астота потенциалов действия была снижена , ког да кл етки были реполяризованы потенциалом величиной 8-12 мВ и полностью упразднялась реполяризацией клеток к той же величине п отенциала покоя каким он был в растворе Кребса . Эти наблюдения были типичны для ЦМ препаратов в присутствии BaCl 2 и BAY K 8644. Структурная кор реляция. Световая м икроскопия. Инкубация в 50 ммоль МС в течении 7 минут не вызывала видимог о впитывания красителя лоскутами ( n =12) , в то же время 45 минутная инкубация приводила к отчётливому окрашиванию всех лоскутов ( n = 1-). Эти образ цы бы ли отчётливы особенно в участках , где рез идуальный подслизистый слой был очень тонким . В первых экспериментах авторы установили полную утрату окрашиваемых ИКК , когда внутр ення поверхность ЦМ слоя была извлечена и з препарата вместе с подслизистой сое д инительной тканью . Вот почему во всех экспериментах , субмукоза была отделена как можно полнее ножницами , с минимальным механ ическим растяжением. После 45 минутной инкубации МС окрашива ние было также обнаружено кроме ИКК и небольшого количества аксо нов , в эритро цитах внутри капилляров и венул , в тучных клетках в субмукозе и в интерстиции ЦМ . Гладкомышечные клетки не окрашивались . В 1мм срезах ЦМ были контрастны во всех МС окрашенных лоскутов , что определялось не достаточным количеством клеток . Ткани х орошо сохранялись . ХотяИКК-ЦМ препараты , ко торые были преинкубированы МС в течении 7 минут не показали видимого окрашивания , контр астность подмышечного ИКК слоя уменьшалась по сле иллюминации с максимальныой интенсивностью в течении 4010 минут как было уст а новлено в случае окрашивания толуидином синим . Эти наблюдения коррелировали с уль траструктурными изменениями. Электронная микроскопия : Контрольные данные – иллюми нация без МС никаких ультраструктурных измене ний не было обнаружено в ИКК-ЦМ препарата х ( n =11 , 2-10 мин иллюминация ), котор ые освещались в течении 10 минут с максимал ьной интенсивностью без инкубации в МС . Тр и типа клеток , интимно связанных щелевыми соединениями и промежеуточными контактами присут ствовали вдоль всего внутреннего края препар атов . ИКК соединяются с тонкими ветвис тыми гладкомышечными клетками (ВКМК ), которые в свою очередь формируют щелевые контакты и межуточные соединения с глубоко лежащими крупными клетками ЦМ. Взаимодействие между этими типами к леток было важн ым , так как авторы обнаружили , что окрашивание МС и заметное повреждение после инкубации в МС и иллюми нации были ограничены для ИКК , более чем для ВГМК и типичных гладкомышечных клето к . Хотя индивидуальный профиль клеточных отро стков часто было невозможно классифиц ировать , то три типа клеток могут быть классифицированы сравнением ядерных частиц кле ток : 1. ИКК были высоко разветвлёнными клетками с 2 или 5 первичными отростками , профили клеток , которые включали я дро , в соновном также содержали начало 1 ил и 2 первичных отростков . Перинуклеарная цитоп лазма между началом отростков была очень тонкой . В начале отростков перинуклеарная цит оплазма доминировала большой аккумуляцией митохо ндрий . Часть цитоплазмы была занята узлами филамент с малыми тельцами ассоци и рованными с цитоплазмой и мембраной . К огда последние сравнивались с расположением п лотных телец в гладкомышечных клетках (ЦМ и ВГМК ), оказалось , что в цитоплазме ИКК их мало . Разбросанные микротубулы всегда пр исутствовали в перинуклеарной цитоплазме . Обши р ный эндоплазматический ретикулум сос тоял из системы переплетающихся соединённых м ежду собой цистерн , организованных частично м ежду и вокруг митохондрий , частично соединённ ых с тонкими цистернами . Цистерны были пре имущественно тонкого типа , с грубой частью, характеризуемой широко разбросанными рибос омами. 2. Выше перечисленные ч ерты были типичны для ИКК , но не для ВГМК или ЦМ . В ВГМК и ЦМ митохондри й было меньше и они были беспорядочно разбросаны . Профили подобные тем , что изобра жены на фотографиях 5а и 6а были типичны в случае , если плотность митохондрий в ВГМК меньше соответствующей величины в ИКК . Перинуклеарная цитоплазма была заполнен а плотно расположенными филаментами (тонкого , толстого и промежуточного типов ) со схожей структурой плотных телец (ассоц и иро ванные с цитоплазмой и мембраной ) в ВГМК и ЦМ . ВГМК может быть отличена от ЦМ размером (более тонкие области перинукле рных филамент и более тонкие отростки у ВГМК ) и нерегулярным появлением ветвистости в ВГМК . Ядерная морфология была схожей в ИКК , ВГМК и ЦМ. Хотя могут обнаруживаться некоторые вариации ультраструкту р при осмотре полусерийных срезов , профили больших отростков трёх типов клеток в общем могут быть классифицированы по критерия м перечисленным выше. Ультраструктура после инкубации в М С. Целостная с труктура клеток и субклеточные детали не поражались МС как указывалось прежде . После 7 минутной инкубации в МС , во всех 3 типах клеток не обнаруживалось каких-либо изменени й . Единственным постоянным изменением , наблюдавшим ся во всех препаратах был переход м итохондрий от конденсированной (расширенные внутр икристовые пространства и плотный матрикс ) к ортодоксальной конформации (узкие кристы и разреженный матрикс ) в ИКК . В противоположн ость этому , у гладкомышечных клеток митохон д рии находились в различной конфо рмации до и после обработки МС и свет ом . Никаких доказательств в пользу конформаци и митохондрий в гладкомышечных клетках (ГКМ ) получено не было. После инкубации в МС иллюминация в течении 4 и 10 минут вызывала серьёзны е повреждения в ИКК и малом количестве ГКМ разбросанных по краю подмышечного слоя . После 4 минутной иллюминации самыми выдающими ся изменениями в ИКК были увеличение мито хондрий и увеличение вакуолизации цитоплазмы ( n = 3). После 10 минут иллюминац ии ( n =3 , фотографии 6в ) ИКК были увеличе нными имели низкую контрастность цитоплазмы , отлично различимые митохондрии , несколько кавеол и отверстия в плзматических мембранах , чт о вероятно говорило о её разрыве . Идентифи кация ИКК была возможной благодаря с охранению базальной пластинки и совместно с чертами цитоплазмы (такими как число мито хондрий ) и сохранению взаимосвязей с глубокол ежащими клетками . ОБСУЖДЕНИЕ. Избирательное повреждение толсто кишечных ИКК метиленовым синим и светом. Авторы установили строгую очевидность того , что подмышечные ИКК незаменимы в генерации п отенциалов действия медленных волн в ЦМ т олстого кишечника собак непосредственно показав связь между избирательным повреждением ИКК и исчезновением медленных волн при этом . В свежих исследованиях авторы показали , что ИКК в подмышечном сплетении избирательно аккумулируют МС и что МС не вызывает каких-либо микроскопически заметных изменений в любых типах клеток , кроме он не имеет значительного эффекта на активн ость медленных в о лн . В настоящем исследовании авторы показали , что интенсивна я иллюминация после инкубации в МС привод ит к специфическому повреждению ИКК подтверж даемому элетронной микроскопией . Более того , к огда ЦМ препараты , у которых были удалены подмышечные ИКК-ГМ с е ти , были инкубированы в МС с последующей иллюминацией , спонтанная и индуцируема электрическая акти вность не затрагивалась . Эти наблюдения указы вают на то,что эффекты МС и света на ИКК-ЦМ препараты были специфичны только для ИКК , не связанных с ГМК. Хотя устранение активности медл енных волн МС и светом сопровождалось деп оляризацией , последняя не была ответственна з а ингибирование активности медленных волн , с того момента , как реполяризация клеток к их прежнему потенциалу покоя не восстана влив а ла медленные волны . Кроме тог о , было замечено , что медленные волныустраняют ся в большом диапозоне величин мембранных потенциалов , включая мембранный потенциал поко я , свойственный циркулярным мышцам , что указыв ает на , что изменения активности медленных в олн не вызваны изменениями велич ин мембранных потенциалов . В противоположность этому , строфантин также деполяризует мембраны и при этом устраняет активность медленны х волн (1). Тем не менее , реполяризация мембр ан к изначальному потенциалу покоя полностью в осстанавливает активность медленных волн . Это указывает на то , что в при сутствии строфантина , ингибирование активностимедленн ых волн - непосредственный эффект деполяризации. Локализация аккумуляции МС внутри И КК очень специфична . Когда пр еципитация МС была проведена так , что удалось избе жать перемещения и образования грубых преципи татов было обнаружено , что электронно-плотные депозиты присутствуют только в эндоплазматическо м ретикулуме (ЭР ) и его нет в других цитоплазматичексих компонента х (35). Это может указывать на то , что МС входит в ЭР непосредственно путём проникновения чере з пгладкие цистерны . Тем не менее , остаётс я неясным почему МС накапливается в ЭР ИКК , но при тех же обстоятельствах не входит в ЭР ГМК . В опытных условиях нас т оящего исследования , изменения в конформации митохондрий так же как акти вности медленных волн были обнаружены при минимальной инкубации МС в течении 7 минут и минимальной иллюминации в течении 2 мин ут , что наводит на мысль о том , что первичной причиной у странения медлен ных волн является повреждение митохондрий. Фотодинамическое цитотоксическое действие МС было известно многие годы (2). Недавно изучалась цитотоксическая эффективность фотоинактива ции МС-чувствительных клеток рака желчного пу зыр я (10), включая и сопровождающие её ул ьтраструктурные изменения (39). После короткого перио да иллюминации (5 минут ), докладывалось , что ульт раструктурные изменения были идентичны данным авторов (дизинтеграция митохондрий и ранние признаки повреждения пл а зматических мембран ) , а высокая продолжительность иллюминац ии вела к разрыву мембран клеточной фраг ментации . В исследования фотодинамического действ ия МС на ДНК (23) было показано , что обра тимые предповреждения ДНК , вызванные МС в темноте становятся необратимыми когда к инкубации в МС присоединяется иллюминаци я . Вот и в этом исследовании электрофизиол огические эжффекты и ультраструктурные эффекты МС и света также были необратимыми. Роль ИКК в генерации медленных волн. Настоящее ис следование п одкрепляет гипотезу о том , что ИКК незаменимы для генерации активност и водителя ритма в кишечнике . В подобных исследованиях , использующих тонкий кишечние мышей иллюминация светом красного лазера уст раняла внутриклеточно записанную активность медл енных волн после инкубации в МС (36). Было показано , что активность медленных в олн поражается в препаратах где ИКК окраш ивались МС и не поражается , где ИКК не окрашивается . В другом исследовании (37), спонтан ная сократительная активность медленных волн была со х ранена , когда в культуриру емых кусочках мускулатуры тонкого кишечника м ышей окрашенные МС ИКК были просмотрены п од микроскопом в очень тусклом свете , но эти кусочки быстро становились неподвижными при сильном освещении. Настоящее исследованиеспе цифически устанавливает решающую роль ИКК в генерации медленных волн в толстом кишечнике собак как показывалось прежде (12,18,19,21,29). Авторы выдвигаю т гипотезу о том , что циклическая внутрик леточная активность периодически активирует токи водителя ри т ма . В этом случае ИКК могут являться или биохимическими ча сами или одновременно биохимическими часами и ионными каналами , отвечающими за генерацию тока водителя ритма . Хотя спонтанные осциля ции , записанные в изолированных ГМК (25) и кл етках близких по оп и санию к И КК (17,26), и устранялись блокаторами кальциевых ка налов L - типа и следовательно не отражают медленные волны , как компонент водителя ритма , которые в принципе этими блокаторами не устраняются (14). Таким образом , спонтанно п роисходящие осциляции н е имеют характерис тик медленных волн. Следующий вопрос касается роли ГМК в генерации медленных волн , как компонента водителя ритма . Ветвистые ГМК , которые ин тимно соединяютс с ИКК соединительными щелями представляют особый интерес . Если ИКК ед инс твенные клетки ответственные за генера цию токо водителя ритма , то величина тока , которую каждая ИКК должна генерировать , чтобы деполяризировать все соседствующие с не й клетки с высоким сопротивлением поверхности , должна быть огромной . Возможно и другое : ИКК – это биохимические часы и ИКК посылают внутриклеточные метаболиты через соединительные щели в интимно соедин ённые с ними ГМК . Благодаря такой метаболи ческой связи (8) ассоциированные ГМК могут наход иться в синхронии с ИКК , когда каналы водителя ритма и в ИКК и в ассоциированных с ними ГМК – активированы . Обоснование этой части гипотезы требует идентификации каналов водителя ритма и доказа тельства существования таких каналов в ИКК и ГМК . Интересен тот факт , что в при сутствии тетраэтил аммония , BaCl 2 и карбохола , изолированный слой ЦМ без подмышечной рабочей сети И КК-ГМК генерирует потенциалы действия , которые идентичны по частоте с медленными волнами , но устраняются блокаторами кальциевых канал ов L -типа ( D -600) (18). Это и последующее исследование (20) показали , что ЦМ без подмышечной рабочей сети ИКК-ГМК может генерировать потенциалы с характеристи ками подобными активности медленных волн. Активность медленных волн также исче зает после обработки тканей Родалином 123 в полнослойных препаратах м ышц (38). Родалин 123 – специфический маркёр митохондрий , и таким образом он не специфичен для ИКК , хот я ИКК особенно богаты митохондриями . После проникновения в митохондрии , Родалин 123 становитс я цитотоксичным благодаря разрушению АТФ (24). Сл едовательн о , эффект Родолина 123 наводит на мысль о том , что активность медленны х волн находится в строгой зависимости от внутриклеточного метаболизма . Это согласуется с наблюдениями о том , что активность ме дленных волн чувствительна к высоким температ урам (1), бло к ируется ингибиторами метаб олизма , такими как динитрофенол и карбонил цианид ( H . Preiksaitis и J . D . Huizing , неопубликованные данные ) и поражается при изменении конформации митохондрий (насто ящее исследование ). Это поддерживает гипотезу авторов о том , что компонент медленных волн водителя ритма образуется благодаря в нутриклеточному метаболизму. Таблицы , графи ки и изображения. Таблица 1. Эффекты инкубации в 50 мМ метиленового синего (45 минут ) на электрическую активность препаратов ИКК-ЦМ с или без и ллюминации Параметры В растворе Кребса +Метиленовый синий +Свет Мембранный поте нциал покоя , мВ -72,8+-0,8 -70,6+-0,9 -47,3+-1,9 -69,7+-1,6 Частота , циклов / минуту 5,3+-0,2 5,0+-0,2 Продолжительность , с Амплитуда действия , мВ 3,8+-0,3 38,6+-1,4 4,9+-0,7 37,4+-1,5 Амплитуда плато , мВ 34,1+-1,3 33,2+-1,6 Частота колебан ий , мВ /c 192,3+-23,8 169,4+-18,7 График 1. Электрофизиологические эффекты иллюминации на ок рашенные МС препараты ИКК-ЦМ. А : МС (45 м инутная инкубация ) немного сн ижает мембра нный потенциал покоя и увеличивает продолжите льность медленных волн . Эти эффекты исчезают после промывки препаратов от МС в ра створе Кребса в течении 5 минут . Препарты з атем освещались с максимальной интенсивностью . В последующем , амплитуда ме д ленных волн снижалась при этом мембранный потен циал покоя уменьшался до – 44мВ . Реполяриз ация мембран не востанавливала активность мед ленных волн , что указывает на то , что устранение медленных волн является следствием ингибирования механизма генерирова н ия медленных волн и не вызвана деполяризац ией. В : Уменьшение интесивности света на 1 / 3 от тог о , что было в опыте А значительно удли няет период иллюминации , требуемый для устран ения медленных волн . В этом эксперименте н аблюдались медленные волны больше й продол жительности во время периода деполяризации . М едленные волны устранялись при величине мембр анного потенциала покоя – 42 мВ. График 2. Эффекты мембранного поте нциала на активность медленных волн. А : после 45 минутной инкубации в МС и промывки в растворе Кребса , препа раты освещались с 1 / 3 максимума интенсивности до тех пор пока амплитуда медленных волн не с танет равна половине таковой в растворе К ребса . Препараты были реполяризованы к такому же мембранному потенциалу покоя как и в растворе Кребса . В данном случае восстановления амплитуды медленных волн не наблюдалось. В : в противоположность этому , в сл учае когда деполяризация была вызвана повыше нием внеклеточной концентрации К + до 15 мМ в растворе глюкамин-нитрендипин -Кребса , реполяр изация препаратов ИКК-ЦМ с использованием мет ода анологичному в опыте А полностью восс танавливала амплитуду медленных волн . Кроме т ого , амплитуда медленных волн также восстанав ливалась после промывки. Таблица 3. Устранение ак тивности медленных волн МС +свет без заметной деполяризации . Медленные волны устранялись в МС окрашенных препаратах ИКК- ЦМ с освещением 1 / 3 максимума интесивности света на протяжении 8,5 минут . Медленные волны Медленные волны устранялись при величине пот енциала – 64 мВ , что равно истинной величине м ембранного потенциала покоя препаратов циркулярн ых мышц в растворе Кребса . (см . График 4) Таблица 4. Электрофизиологические эффекты МС +свет на препараты ЦМ . Препараты ЦМ , лишённые подмышечной с ети ИКК и нескольких пр илежащих слоёв ГМК были спонтанно помежены в раствор Кребса . Инкубация в 50 мМ МС не вызвала изменений мембранного потенциала , чего не сделала и 3 минутная иллюминация с максимумом интенсивности . Было показано , ч то препараты ЦМ жиз н еспособны при стимуляции 0,5 мМ BaCl 2 + 0,1 BAY K 8644. Изображение 5. А : электронная микрофотография подслизистог о края в контрольной ткани . Иллюминация с максимальной интенсивностью в течении 10 минут без преинкубации в МС не имеет эффек тов н а ультраструктуру ИКК ( митохондрии не конденсированы ), тонкие нерегулярные ветвист ые гладкомышечные клетки (ВГМК ), нервы (Н ) и собственно циркулярные мышцы (ЦМ ). SUB: подслизистая В и С : обратите внимание , ИКК по сле инкубации в МС в течении 45 минут , без последующей иллюминации (В ) или с 2 минутной иллюминацией с максимумом интенси вности (С ) претерпели изменение конформации ми тохондрий от конденсированной в ортодоксальную . В отличие от этого , ультраструктура сохране на , включая щелевые контакты (ЩК ). Изображение 6. Ткань инкубированная в МС в течении 7 минут с последующей иллюм инацией максимумом интенсивности в течении 2 (А ) и 10 минут (В ). А : после 2 минутной иллюминации единстве нные ультраструктурные изменения - это появление митохо ндрий с ортодоксальной конформацие й ( сравните с изображением 5С : 45 мин в М С , 2 мин в свете ). IC – интерстициальные клетки Кэй джела , bSM - тонкие нерегулярные гладкомышечные клетки , CM - со бственно циркулярные мышцы , N – нерв подмышечного сплетения. В : после 10 минутной иллюминации , ИКК серьёзно повреждены – дизинтеграция цитоплазмат ических органелл и разрывы плазматической мем браны . Базальная пластинка ещё интактна . Отро стки ВГМ и ЦМ клеток повреждены значитель но меньше. Изображение 7. А : Слабосильная электронная микрофотограф ия ткани освещённой в течении 10 минут с максимумом интенсивности после 7 минутной преин кубации в МС . Нет никакого указания на структурые повреждения собственно ЦМ , внутримы шечных капилляров (К ) и фи бробластов (Ф ), в то время как слой клеток , граничащ их с субмукозой (СУБ ) значительно поражён. В : при высоком увеличении ( те же условия ) большие повреждения ограничены ИКК богатыми митохондриями , в то время как тонкие нерегулярные ВГМК , ЦМ и нерв ы не повреждены . Сохранены щелевые контакты между глубоко лежащими ЦМ клетками и м ежду ИКК.
1Архитектура и строительство
2Астрономия, авиация, космонавтика
 
3Безопасность жизнедеятельности
4Биология
 
5Военная кафедра, гражданская оборона
 
6География, экономическая география
7Геология и геодезия
8Государственное регулирование и налоги
 
9Естествознание
 
10Журналистика
 
11Законодательство и право
12Адвокатура
13Административное право
14Арбитражное процессуальное право
15Банковское право
16Государство и право
17Гражданское право и процесс
18Жилищное право
19Законодательство зарубежных стран
20Земельное право
21Конституционное право
22Конституционное право зарубежных стран
23Международное право
24Муниципальное право
25Налоговое право
26Римское право
27Семейное право
28Таможенное право
29Трудовое право
30Уголовное право и процесс
31Финансовое право
32Хозяйственное право
33Экологическое право
34Юриспруденция
 
35Иностранные языки
36Информатика, информационные технологии
37Базы данных
38Компьютерные сети
39Программирование
40Искусство и культура
41Краеведение
42Культурология
43Музыка
44История
45Биографии
46Историческая личность
47Литература
 
48Маркетинг и реклама
49Математика
50Медицина и здоровье
51Менеджмент
52Антикризисное управление
53Делопроизводство и документооборот
54Логистика
 
55Педагогика
56Политология
57Правоохранительные органы
58Криминалистика и криминология
59Прочее
60Психология
61Юридическая психология
 
62Радиоэлектроника
63Религия
 
64Сельское хозяйство и землепользование
65Социология
66Страхование
 
67Технологии
68Материаловедение
69Машиностроение
70Металлургия
71Транспорт
72Туризм
 
73Физика
74Физкультура и спорт
75Философия
 
76Химия
 
77Экология, охрана природы
78Экономика и финансы
79Анализ хозяйственной деятельности
80Банковское дело и кредитование
81Биржевое дело
82Бухгалтерский учет и аудит
83История экономических учений
84Международные отношения
85Предпринимательство, бизнес, микроэкономика
86Финансы
87Ценные бумаги и фондовый рынок
88Экономика предприятия
89Экономико-математическое моделирование
90Экономическая теория

 Анекдоты - это почти как рефераты, только короткие и смешные Следующий
Девушкам на заметку. Начинать что-то клянчить лучше всего со слова "любимый".
Anekdot.ru

Узнайте стоимость курсовой, диплома, реферата на заказ.

Обратите внимание, реферат по медицине и здоровью "Избирательное повреждение интерстициальных клеток Кэйждела", также как и все другие рефераты, курсовые, дипломные и другие работы вы можете скачать бесплатно.

Смотрите также:


Банк рефератов - РефератБанк.ру
© РефератБанк, 2002 - 2016
Рейтинг@Mail.ru