Реферат: Значение белков теплового шока при вич-инфекции - текст реферата. Скачать бесплатно.
Банк рефератов, курсовых и дипломных работ. Много и бесплатно. # | Правила оформления работ | Добавить в избранное
 
 
   
Меню Меню Меню Меню Меню
   
Napishem.com Napishem.com Napishem.com

Реферат

Значение белков теплового шока при вич-инфекции

Банк рефератов / Медицина и здоровье

Рубрики  Рубрики реферат банка

закрыть
Категория: Реферат
Язык реферата: Русский
Дата добавления:   
 
Скачать
Архив Zip, 32 kb, скачать бесплатно
Обойти Антиплагиат
Повысьте уникальность файла до 80-100% здесь.
Промокод referatbank - cкидка 20%!
Заказать
Узнать стоимость написания уникального реферата

Узнайте стоимость написания уникальной работы

На правах рукописи НАЧАРОВ Петр Васильевич ПРОГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ БЕЛКОВ ТЕПЛОВОГО ШОКА ПРИ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ 14.00.10 — инфекционные болезни АВТОРЕФЕ PAT диссертации на соискание ученой степени кандидата ме дицинских наук САНКТ-ПЕТЕРБУРГ 1997 Работа выполнена в Военно-мед ицинской академии. Научный руководитель : доктор медицинс ких наук Е . И . З мушко. Научный консультант : доктор медицинских наук профессор Ю . В . Лобзин. Официальные оппоненты : доктор медицинских наук профессор В . В . Иванова , доктор медицинских наук профессор А . Г . Рахманова. Ведущее учреждение— Российский научно-мет одический центр но про филактике и борьбе со СПИДом. Защита диссертации состоится “” ............... 1997 г. в .... часов на заседании специализированног о совета Д 106.03.05 при Военно-медицинской академии (194044, г . Санкт- Петербург , ул . Лебе дева , 6). С диссертацией можно ознакомиться в фундаментальной библиотеке академии. Автореферат разослан 1997 г. Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук профессор Ю . И . Ля шенко ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность проблемы . В России в опросы стратегии и тактики борьбы с ВИЧ-инфекцией определены работами В.И.Покровского (1988: 1989; 1993). В.И.Покровский (1987) пре дсказал грядущий размах распространения ВИЧ-инфек ции в стране и внед рил в практическое здравоохранение структуру , пре д назначе нную для борьбы со СПИДом. В настоящее время ВИЧ-инфекция охватила все страны мира . К середине 1996 года общее количество инфицированных вирусом иммуно дефицит а во всем мире достигло 27,9 миллионов челов ек (Рахманова А.Г ., 1996). Несмотря на то , что выполнен бес прецедентно большой объем на учных исследований по . проблеме ВИЧ-инфекции , предложены методы ле карственной терапии , позволяющие добиваться вр еменного улучшения состояния больных СПИДом . до настоящего времени не известен ни оди н д о стоверный случай выздоровления , поэтому СПИД считают бо лезнью с летальнос тью 100%. Проблема ВИЧ-инфекции усугубляется еще и тем фактом , что с начала девяностых г одов ВИЧ все более и более завоевывает основную популяцию населения , в то время как в течение первых десяти лет р аспространение шло преимущественно среди определ енных групп насе ления , так называемых "групп риска " - наркоманы , гомосексуалисты . проститутки , больные гемофилией (Лобзин Ю.В ., Казанцев А. П .. 1996). Актуальность проблемы определяет неупр авляемое интенсивное возрастание случаев инфицир ованности , болезненности и смертности во всех странах мира (Шувалова Е.П ., 1995). Выявление ВИ Ч-инфицированных лиц не приводит к прекращени ю передачи ВИЧ от них , нес мотря на ув едомлен и е их об уголовной ответст венности за заражение (Покровский В.В . с со авт ., 1996). Не решенными остаются основные проблем ы СПИДа (Белозеров Е.С . с соавт ., 1995): - отсутствие методов ранней диагностики : - полная неуправляемость патологических проц ессов у заболев шего : - отсутствие надежных клинических и лабо раторных показателей перехода инфекционного проц есса из латентной стадии в манифестную. При СПИДе и ВИЧ-инфекции достаточно хо рошо изучены основные лабораторные диагностическ ие показатели , свидетел ьствующие об инфиц ированности (Змушко Е.И . с соавт ., 1996). Однако в опросы прог нозирования клинического течения ВИЧ- инфекции требуют дальнейшего изучения . Наибольшее клиническое значение имеет прогноз перехода от бессимптомной фазы к персистирующей г е нерализованной лимфаденопатии (ПГЛ ), а также от ПГЛ к стадии вторичных забо леваний , кото рый важен для своевременного наз начения этиотропных и патогенети ческих средств (Рахманова А.Г .. Чайка Н.А ., 1989). При поиске новых тестов , которые дава ли бы пре дставление о состоянии иммун окомпетентных клеток крови при ВИЧ-инфекции , о бра тила на себя внимание группа сравнительно недавно открытых внут риклеточных белков , пол учивших название "белки теплового шока " (БТШ ) или "стрессовые белки ". Эти белки не д остаточно изучены , но уже имеющиеся данные говорят , что они высоко консервативны в про цессе филогенеза ( Lindqulst S . , 1986), необычно полифункциональны - играют важну ю роль во многих внутриклеточных иммунобиохим ических процессах как в экстремальных , т ак и в нормальных условиях ( Polla B . S ., 1988), что позволяет предположить об участии белков теплового шока в фор мировании патобиохимических внутриклеточных связей при ВИЧ-инфекции. В ответ на воздействие неблагоприятных факторов , в том числе и вирусной инфекции , формируется неспецифическая клеточная р еак ция , которая сопровождается усилением процесс ов свободнорадикального окисления (Иванова В.В . с соавт ., 1992: 1996), синтезом бел ков теплового шок а ( Kaufman S . H . E .. 1990) и является одним из ме хан измов дестабилизации генома клеток-мишеней . В этих условиях не маловажной представляется роль фермента ксантиноксидазы , которая служи т генератором свободных радикалов при ряде патологических состояний клетки и является наиболее значимой среди проокс и дан тных систем , характерных для лимфоидной клетк и (Кожемякин Л.А . с со авт .. 1992). Отсутствие в литературе данных по ком плексной оценке процес сов дестабилизации генома , сопряженных с активностью свободнорадикального окисления и системы ксантиноксида зы в иммунокомпетентных клетках крови в динамике развития ВИЧ-инфекции не позволяет опре делит ь значимость названных показателей для прогн оза клинического течения болезни. Цель исследования : дать оценку возможност и ис пользования показателей белков тепл о вого шока семейства БТШ -70 и комплекса био химических изменений в мононуклеарах периферичес кой крови в прогнозировании клинического тече ния ВИЧ-инфекции. Для достижения указанной цели необходимо было решить следуюие задачи : 1. Изучить динамику традиц ионных пока зателей иммунного стату-а у ВИЧ-инфицированных и определить их прогностическую значимость при переходе клинического течения болезни из одной стадии в дру гую. 2. Изучить изменения активности ксантиноксид азы , интенсивнос ти процессов свободнора дикаль ного окисления и показателей неста бильности генома мононуклеаров периферической крови при ВИЧ-инфек ции и оценить их прогностическую значимость. 3. Разработать методические подходы к соз данию иммунологического метода для количественно го и качест венного анализа белков се мейства БТШ -70. 4. Изучить показатели белков семейства БТ Ш -70 в мононуклеарах периферической крови на разных фазах ВИЧ-инфекции. 5. Определить взаимосвязь изменений белков семейства БТШ -70 и комплекса биохимических п оказателей де стабилизации генома . свобод норад икального окисления и системы ксантиноксидазы мононуклеаров периферической крови у больных в динамике заболевания и оценить их значимость для прогноза клинико-манифестных форм ВИЧ-инфекции. Научная новизна : 1. Впервые установлено , что нарастание накопления конститу тивной изоформы белков с емейства БТШ -70 в мононуклеарах перифери ческой крови ВИЧ-инфицированных пропорционально степени выражен ности клинических проявлений болезни. 2. Показана связь изменения показа те лей белков семейства БТШ -70 с уровнем неста бильности генома , активностью процессов сво боднор адикального окисления и системы ксантиноксидазы в мононукле арах периферической крови у больных ВИЧ-инфекцией в процессе раз вития кли нической картины заболе в ания. 3. Установлено , что изменение состояния белков семейства БТШ -70 в мононуклеарах перифер ической крови адекватно отражает ве роятность перехода ВИЧ-инфекции из бессимптомной фазы в фазу персистирующей генерализованной лимфаде нопатии и от перси стирующей генерализова нной лимфаденопатии к стадии вторичных заболе ваний. 4. Установлено , что ВИЧ-инфекция вызывает нарушение реакции белков теплового шока (БТШ -70) мононуклеаров периферической крови в ответ на повреждающие воздействия (гипертермия . уль трафиолетовое облучение ). Практическая значимость работы. Комплекс показателей , отражающих состояние системы белков теплового шока , системы кса нтиноксидазы , процессов свободнорадикального и не стабильности генома мононуклеаров периферической кро ви , в совокупности с традиционными иммунологическими показателями может быть исп ользован для прогнозирования перехода клиническо го течения ВИЧ-инфекции из бессимптомной фазы в фазу ПГЛ и от ПГЛ к стадии вторичных заболеваний. Изучение показателей белков теплового шока мононуклеаров пе риферической крови чел овека как защитного механизма неспецифичес кого действия может может быть применено для оценки эффективности лекарственных средств с иммуномодулирующими свойствами , а также для разработки новых ди а гностических подходов к прогнозированию иммунодефицитных с остояний различной этиологии. Основные положения , выносимые на защиту : 1. Переход клинического течения заболевания от бессимптомной фазы к персистирующей генерализованной лимфаденопатии (ПГЛ ) и от ПГЛ к стадии вторичных заболеваний характе ризуется увеличением со держания конститутивной и зоформы семейства БТШ -70 в мононуклеарах перифе рической крови. 2. Изменения содержания белков семейства БТШ -70 в процессе ВИЧ-инфекции происходят на фоне ув еличения показателей нестабиль но сти генома , интенсификации процессов свободноради кального окис ления и повышения активности кс антиноксидазы в мононуклеарах пери ферической кро ви. 3. Показатели белков семейства БТШ -70 монон уклеаров перифери ческой крови в совокупнос ти с традиционными иммунологическими по казателям и возможно использовать для прогнозирования п ерехода кли нического течения ВИЧ-инфекции из бессимптомной фазы в фазу пер систирующей ген ерализованной лимфаденопатии (ПГЛ ) и от ПГЛ к ста дии в торичных заболеваний. Апробация работы. Результаты исследований до ложены на XI-й и XII-й научных конференциях молодых ученых акаде мии (ВМедА , Ленинград , 1990; ВМедА , Санкт-Петерб ург , 1992), на VI-м Всесоюзном биохимическом съезде (Сан кт-Петербург, 1992), на Первой международной реги ональной конференции по ВИЧ-инфекции "Со циальные и медицинские проблемы СПИДа " (Санкт-Петербург , 1994). на заседании Санкт-Петербургского отделения Российского научного об щества инфекционистов ( Санкт-Петербург , 199 6 ), на IV международной ко нференции "СПИД , рак и родственные проблемы " (Санкт-Петербург . 1996), на III Всероссийском съезде ге матологов и трансфузиологов (Санкт-Петербург . 1996). Мат ериалы диссертации использованы в от четах по теме НИР N 50-93-В 12 " Б иохимические мех анизмы формирова ния иммунодефицитов под влиянием ВИЧ и иммунодиагностика иммуноде фицитных со стояний больных СПИДом " и по теме НИР N 60-95-П 4 "Исс ледование роли системы белков теплов ого шока в патогенезе ВИЧ-ин фекции ". Реализация рез ультатов работы. По теме диссертации опубликовано 7 научных работ . Результаты работы используются в практике учебного процесса и научно-исследователь ской работе кафедры инфекционных болезней , ка федры клинической би охимии и лабораторной ди агностики , в работе НИЛ СПИДа и инфе кцион ных заболеваний в ВС РФ Военно-медицинск ой академии , кафедры ин фекционных болезней Се мипалатинского государственного медицинского институ та , кафедры ЛОР-болезней с курсом аллергологии и иммуноло гии Чимкентского государс т венного медицинского института , кафедры и нфекционных болезней Волгоградского государственного медицинского университета. Объем и структура диссертации . Диссертация изложена на 171 страницах машино писного текста , состоит из введения , обзора литерату ры , пяти глав собственных иссле дова ний . обсуждения полученных результатов , вывод ов , практических ре комендаций и списка литера туры , включающего 61 отечественный и 140 зарубежных источников . Диссертация иллюстрирована 24 рисунками и 17 таблицами. СОДЕР ЖАНИЕ РАБОТЫ 1. Общая характеристи ка больных и методов исследования В процессе работы были обследованы 34 и нфицированных и больных ВИЧ-инфекцией , среди к оторых преобладали лица мужского пола в в озрастной категории от 20 до 39 лет . Клиническое наблюден ие и обследование больных п роводили в больнице N 30 имени С.П . Боткина г.С анкт-Петербурга , Республиканской клинической инфекцион ной боль нице г . Усть-Ижоры Ленинградской обла сти , в Центре по борьбе и профилактике СПИДа г.Санкт-Петербурга. Больные был и распределены по груп пам в соответствии с клинической классификаци ей В.И.Покровского (1989). Вич-инфицированных в стадии инкубации и больных в терминальной стадии не обследовали . Контрольную группу составили 25 практически здоровых мужчин (доно ров кр о ви ) в возрасте от 20 до 39 лет - военнослужащие. Иммунологические и биохимические исследовани я проводили в Во енно-медицинской академии , оп ределение белков теплового шока - на базе института цитологии Академии наук. Диагноз ВИЧ-инфекции верифицировали се рологически - по нали чию в крови специ фических антител к ВИЧ с помощью тест-сист ем для гетерогенного иммуноферментного анализа методом двойных антител (производства фирм СП "ДиаПЛЮС ". Россия-Швейцария , СП "Авиценна ", Р оссия-Сирия ). Результаты иммуно ф ерментного анализа подтверждали с помощью иммуноблотинг а (" Du Pont ", США ). Для оценки иммунного статуса у обслед ованных пациентов изуча ли следующие показатели : количество лейкоцитов , лимфоцитов ; субпо пуляции Т-лимфоцитов с помощью проточного цит офлюориметра " EPICS - C " ( Coulter elektronics . США-Франция ) с применением моноклональных антител фирмы " Ortho Diagnostic Systems "(США ): РТМЛ с КонА определяли по методу M . George . J . H . Vaughan (1962); количество В-лимфоцитов , несущих Ig M , G , А , определя ли методом иммунофлюорес ценции с использованием моноспецифических сыворо ток к иммуноглобулинам человека ; концентрации Ig M . G , А , определяли методом радиальной иммунодиффузии в геле ( Mancini С. et al .. 1963); содер жание циркулирующих иммунных компл е ксов по методу Ю.А.Гриневича . А.Н.Алферова (1981). Для исследования системы белков тепловог о шока в мононуклеарах периферической крови ВИЧ-инфицированных была получена панель поли клональных антител . При иммунизации животных и аффинной очист ки антител п рименяли препарат белков БТШ -70. Для получения препа рата БТШ -70 использовали белковый экстракт , полученн ый из мышечной ткани крупного рогатого ск ота и клеток культуры HeLa . Выделяли препарат методами ионообменной (с DEAE-сефарозой ; и аффинной (с А ТФ-агар озой ) хроматографии . Чистоту полученных белков БТШ -70 про веряли при помощи электрофореза в полиакриламидном геле с додецилсульфатом нат рия . Препарат БТШ -70 имел чистоту около 98% и содер жал смесь конститутивной ( hsc -70) и индуцибельной ( hsp -70) и зоформ семейства БТШ -70. Из иммунной сыворотки кроликов выделяли антитела к БТШ -70 ме тодами высаливания и аффинной хроматографии на колонках со см есью белков hsc -70 и hsp -70. Каждая серия антител подвергалась проверке на специфичность двумя методами - и м муноферментного анализа и иммуноблоттинга . Для определения эпитопов БТШ -70, с которыми реаги ровали полученные антитела , использовали "сэндвич "-метод иммуно ферментного анализа и реакция иммунопреципитации с предварительным м ечением белков [ 35 S]-метион ином . Иммунопреципитаты были подверг нуты одно - и двумерному электрофорезу ( Laemli U . K ., 1970; O ' Farrel P . H .. 1978). Поликлональные антитела использовали в конструкции иммуноблотинга с последующей де нситометрией проявленных зон бел ков , что позв олял о полуколичественно оценивать содержание изоформ семейства БТШ -70 в мононуклеарах п ериферической крови больных. Для проверки функционального состояния си стемы БТШ -70 мононуклеаров периферической крови служили нагрузочные тесты In vitro - тепловой шок (п рогрев клет ок при 43± 0.3° С в водяном термостате ) и ультрафиолетовое облучение с использование м прибора МД -73 "Изольда ". Определение активности ксантиноксидазы и ее формы в мононуклеарной фракции крови п роводили по методу У.Прайор (1979). Уровень п роцессов свободнорадикального окисления тота льно в мононуклеарах периферической крови и отдельно в их ядрах оценивали по сод ержанию продуктов , связывающих тиобарбитуровую ки слоту , которые определяли по методу M . Uchlyama , M . Michara (1978). В к ачестве ин тегральных биохимических показател ей нестабильности генома клеток были избра ны относительная доля продуктов деградации хром атина - полидезоксинуклеопротеидов , которые являются фрагментами ДНК, ( Parks D . A ., Granger D . N ., 1986) и интенсивность образования однонит евых разры вов ДНК ( Birnboim H . C .. Jewcac J . J . . 1981). Статистическая обработка цифровых данных осуществляли методом вариационной статистики с использованием параметрического критерия ( t ) Стьюдента . В случае малых выборок использовали непараметриче с кие статистические критерии . Расчеты про изводили с использованием программы STATGRAF ( Statistical Graphics System ), версия 2.1. 2. Результаты собственных исследований Гумор альный и клеточный иммунитет на разных ст адиях болезни Исследование изменений в иммунной системе при развитии ВИЧ-инфекции имело целью выявить показатели , достоверно изменяющи еся при переходе от одной клинической стадии ( фазы ) к другой. Анализ изменений иммунологических параметров больных позволя ет заключить , что в динам ике ВИЧ-инфекции , в первую очередь , про ис ходит прогрессирующее снижение функциональной со стоятельности иммунной системы по мере развит ия клинической картины заболевания . Выявленная дефектность иммунного статуса касается , прежде всего . Т-системы иммуните т а . Однак о далеко не все исследованные традици онные иммунодиагностические параметры в своей динами ке достоверно отражают начало перехода от бессимптомной фазы заболевания к манифестным стадиям . Достоверное различие между группами больных ВИЧ-инфек ц ией наблюдалось у следующих показателей : - при переходе от бессимптомной фазы (IIБ ) к ПГЛ ( IIB ) - уве личение относительного содержания лимфоцитов от 39,00± 2,13 до 45,92± 1.96% (р <0,05), уменьшен ие содержания С D8+-лимфоцитов (супрессоров ) ОТ 36,90± 2.90 до 27,83± 1,80% ( p <0,01); - при переходе от ПГЛ (IIB) к стадии вторичных заболеваний ( IIIA ) - увеличение содержания В ( IgA +) -лимфоцитов от 0,06± 0,01 до 0,10± 0,01 xlO 9 /л ( p <0,01), увеличение концентрации IgG от 11,74± 0.89 до 13.77± 0.66 г /л (р <0.05) , увел ичение содержания цир кулирующих иммунных комплек сов - уменьшение пропускания светового потока от 92,1± 1,2 до 84.3± 1.6% (р <0,01). Как показал анализ , процентные (относитель ные ) показатели во многих случаях нельзя и спользовать без оценки абсолютных значений . абсолютное содержание В (IgA+)-лимфоцитов , остает ся неизменным на стадии IIIA по сравнению с бессимптомной фазой , изменение концент рации иммуноглобулинов IgG происходят в диапазоне нормаль ных зна чений (9-15 г /л ), что снижает прогности ческую информативность ука занных показате лей . Важен и тот факт , что нет единого иммунологического показателя , который бы дос товерно характеризовал оба пере хода ВИЧ-инфекции - от бессимптомной фазы к генерализованной лимфаденопатии и от генерализованной лимф а денопатии к стадии вторич ных за болеваний. Содержание продуктов , связывающих тиобарбитур овую кислоту , в мононуклеарах периферической крови Уже в бессимптомной фазе у ВИЧ-инфицир ованных отмечается уве личение средних значений содержания ТБК-связывающих со единений в мононуклеарах периферической крови на 56%, а в их ядрах - на 90%. По мере развития за болевания уровень названных продуктов свободно-ра дикального окисления возрастает , достигая максиму ма у больных в стадии IIIB . При этом средние значения в гр уппе больных в стадии IIIB превышали ко нтрольные в 3.2 раза в мононуклеарах и в 4,6 раза в ядрах мононуклеаров . Однако достове рный рост показателей свободнорадикального окисл ения между группами больных ВИЧ-инфекцией от м ечается в мононуклеарах . но не в яд рах , и только в одном из инте ресу ющих нас переходах клинического течения - из бессимптомной фа зы (ПБ ) к ПГЛ (IIB) от 2,82± 0,30 до 3,61± 0.37 нмоль /10 6 клеток (р <0,01). Активность форм ксантиноксидазы в мононук леарах периферической крови Отмечается про грессивное возрастание общей ксантиноксидазной активности в мононуклеар ах периферической крови пациентов по мере развития заболевания . Однако динамика состояни я D - и 0-форм фер мен та , оказалась разнонаправленной : по мере прогр ессирования забо левания п роисходит постепенн ое снижение средних значений активнос ти D-фор мы ксантиноксидазы (на 12,5% в стадии IIB и на 75,5% в стадии III В ) и нарастание активности 0- формы фермента (на 13,4% в стадии ПБ и в 6,5 раз в стадии IIIB). При этом достоверног о уменьшения активности D-формы ксант иноксидазы в переходах клини ческого течения IIБ -IIB и IIB - IIIA не отмечается , а активность 0-формы достоверно возрастает только при пер еходе от бессимптомной фазы (ПБ ) к ПГЛ (IIB) (р <0,05). Интегральные метаболиче ские показатели дестабилизации генома мононуклеаров периферической крови У ВИЧ-инфицированных уже в бессимптомной фазе отмечается уве личение средних значений содержания полидезоксинуклеопротеидов (ПДН ) в 1,3 раза , а выраженности однонитевых разрыво в ДНК в 2.3 раза . Выявленные изменения прогрессируют по мере развития ВИЧ-инфекции , однако достоверных различий показателей нестаб ильности ге-нома между группами больных не отмечается , что не позволяет расс матривать их в качестве прогностических крите р иев перехода клини ческого течения болезн и из одной стадии в другую. Характеристика поликлональных антител к белкам семейства БТШ -70 Каждый из полученных нами препаратов антител распознавал спе цифический профиль изофор м семейства БТШ -70, денатурированны х до-деци лсульфатом натрия . Антитела из сыворотки крол ика N5 (ант итела N5) различают две зоны молекулярной массы 68-72 к Да , которые представляют собой две изоформы семейства БТШ -70. Тепловое воз действие (43°С - 30 минут ) на клетки HeLa, белковый экстракт кото рых и спользовали для приготовления иммуноблота . отража лась на ре зультате иммуноблота усилением инт енсивности зоны , соответствующей hsp70. Антитела N7 распознавали и hsp70. и р 75, тогда как антитела N10 главным обра зом связывались только с р 75. a Nil - с hsp70. Та кие же примеры распознавания белков семейства БТШ -70 на иммуноблотах наблюдались , когда вме сто клеток HeLa для анализа использовали мононук леары периферической крови человека. Для того , чтобы определить компоненты семейства БТШ -70, кото рые реагируют в неде натурированном состоянии с представленной па нель ю антител , выполнено исследование иммунопреципита ции . И одно -, и двумерные электрофоретические анализы иммунных комплексов не по казывали различий между антигенами , преципитир о ванными с тестируе мыми антителами : иммунн ые комплексы содержали только одну зону . соответствующую индуцибельной форме hsp70. Иммобилизован ные на твердой фазе антитела N5 и N7 также избирательно реагировали с ан тигеном hsp70 из белкового экстракта клеток HeLa. В итоге , по причине особых свойств полученных антител к БТШ -70. которые , как оказало-сь , распознают только один или нес к олько смежных сайтов на нативных молекулах БТШ -70. а также по причине свойств белко в семейства БТШ -70 легко о бразовывать п рочные соединения е другими белками клетки в обычных условиях , не предс тавилось возмо жным использовать полученные поликлональные анти тела для создания иммуноферментной тест-системы , предназначенной для количественного определения БТШ -70 в белковых экстрактах мононуклеар ов периферической крови . Поэтому пришлось исп ользовать указан ные антитела в конструкции д ругого метода для определения БТШ -70 в белк овых экстрактах - метода иммуноблотинга с -посл едующей денситометрией проявленных зон бел к ов. Изменения состояния семейства БТШ -70 монону клеаров периферической крови на различных ста диях ВИЧ-инфекции Семейство БТШ -70 в мононуклеарах периферич еской крови всех групп обследованных представ лено полностью тремя изоформами : инду цибельной (hsp-70 ), конститутивной (hsc-70) и белком р 75. Не обна ружено до стоверных различий в соотношении изоформ БТШ -70 между до норами и пациентами в бессимпто мной фазе ВИЧ-инфекции . Напротив , у больных в более поздних стадиях заболевания выявле но достоверное изменен ие анализируемых п араметров по сравнению с контрольной группой . Наблюдается прогрессивное уменьшение средних значений со держания изоформ hsp-70 и р 75, увеличе ние hsc-70 по мере развития клинической картины заболевания . Однако достоверное различие и зо форм семейства БТШ -70 в мононуклеарах периферической крови между группами больных ВИЧ-инфекцией наблюдали только по отношению к конститутивной изоформе (hsc-70). содержание которо й увеличивается при переходе заболевания из бессимптомной фазы (ПБ ) к фаз е ПГЛ (IIB) от 59,3± 2,5 до 66.2± 2,7 у.д.е . (р <0,05) и от фазы ПГЛ (IIB) к стадии вторичных заболеваний (IIIA) от 66,2± 2.7 до 7l,l± 3,0 у.д.е . (р <0,05). Исследование влияния теплового воздействия на мононуклеары периферической крови обследо ванных лиц позволило выявить прогрес сивн ое достоверное уменьшение содержания индуцибельн ой изоформы hsp-70 при переходах ПБ к IIB от 38,9± 4,3 до 30.4± 3.1 у.д.е .' и IIB к IIIA от 30,4± 3,1 до 22.1± 3.7 у.д.е . (р <0,05). Нами предложен индекс hsp-70 Tlll/ hsp-70 N. представляющий со бой отношение содержания индуцибельной изоф ормы семейства БТШ -70 в клетке , подвергнутой тепловому шоку in vitro, к содержанию этого белка в к летке , находящейся при t=37 0 С . Индекс hsp-70 TШ /hsp-70 N характеризует реакцию клет ки на экстремальное воздействие синтезом и накоплением индуцибельной изоформы . по которому косвенно можно судить об адаптивной состоятельности исследованных клеток . Досто верн ое уменьшение индекса hsp-70 TlB/hsp-70 N наблюдается в обоих п ереходах клин ических стадий : ПБ - IIB от 4,23 до 3.42 (р <0,05) и IIB - IIIA от 3,42 до 2.99 (р <0.05). что свидетельствует о про г рессивном ослаблении адаптивной функции мононук леаров периферичес кой крови . Воздействие ультрафи олетового облучения на нононуклеары периф ерической крови вызывало аналогичные сдвиги в системе белков теплового шока во всех группах больных. Представленный анализ полученных результатов выявляет значи мость динамики показателей се мейства белков теплового шока БТШ -70 мононуклеа ров периферическ ой крови для прогноза перехода клиничес кого развития ВИЧ-инфекции от бессимптомной фазы к генерализованной лимфа денопатии и от ПГЛ к стадии вторичных заболеваний. Патогенетическая связь исследованных биохими ческих показателей и белков теплового шока БТШ- 70 в мононуклеарах периферической крови при ВИЧ-инфекции Выявленная динамика показателей нестабильнос ти генома моно нуклеаров периферической крови у больных ВИЧ-инфекцией сопровожда лась существ енным увеличением концентрации соединений , связыв ающих тиоба рбитуровую кислоту , (продуктов свободнорадикального окисле ния ) в клетках и и х ядрах , что свидетельствует о повреждении ДНК мононуклеаров свободными радикалами . Ведущ им генератором активных форм кислорода при этом . судя по полученным результатам , с лужит 0-форма ксантиноксидазы , образу ющаяся из D-формы фермента в ре зультате ее ограниченного протеолиза . В свою очередь , протеолитическая трансформация D-формы ксантиноксидаз ы в 0-форму может быть прооксидантно-индуцирова нной. Таким образом можно п редположить , что повреждение ДНК моно нуклеаров вызвано с вободными радикалами , генерируемыми ксантинок-сидазой . В результате атаки ДНК свободными радик алами наблюдается образование.апуриновых /апиримидинов ых сайтов и однонитевых разры вов ДНК мон онукле а ров периферической крови . Прич ем степень указан ных процессов находится в зависимости от клинического течения ВИЧ-инфекц ии . В свою очередь , образование однонитевых разрывов яв ляется стимулирующим фактором повы шения активности ксантиноксидазы в монон у клеарах , а образующиеся олигонуклеотиды м огут служить факторами активации экспрессии п ровирусного генома ВИЧ . интегрирован ного в ДН К мононуклеаров периферической крови . В резул ьтате форми руется патологический круг . способству ющий репликации ВИЧ (рис .1, в конце ). Описанные процессы , среди которых наиболе е значимым является свободнорадикальное окислени е , сопровождаются характерными измене ниями систем ы белков теплового шока в мононуклеарах п ериферической крови , происходящими в тесной с вязи с клиническим те чением ВИЧ-инфекции . Указанные изменения БТШ -70 в неинфицированных клетках мо гут быть опосредованы влиянием вирусного белка gplZO. взаимодейс твие которого с рецепторо м CD4 не только вызывает стрессовую реак цию . проявляющу юся рядом функциональных изме нений , в том числе и усилением транскрипции с гено в БТШ -70 (G.Furlini at al.. 1994).. но и приводит к программированной клеточной гибели - апоптозу зрелых С D4+-лимфоц итов или С D34+-гематопоэтических клеток-предшественн и ков (Hofman В о , 1991; Montagnier L. et al. , 1992). В инфицирован ных клетках экспресс ия генов ВИЧ и генов , кодирующих синтез БТШ -70. осуществляется по общим механизмам с участием ядерного фактора NF-kB (Krumm A. et al.. 1993). Таким образом , и в неинфицированных , и в инфицир ованных ВИЧ иммунокомпетентных клетках крови больных показатели семейства БТШ -70 могут обоснованно рассматриваться в качестве индикатора ак тивности репликативного процесса вируса , формирования вторичного иммунод ефицита (вследствие дисфункции и гиб е ли СБ 4+-клеток ) и раз вития клинического течения болезни. ВЫВОДЫ 1. Традиционные для оценки иммунного стат уса лабораторные по казатели (количество CD3+. CD4+. С 08+-лимфоц итов . В-лимфоцитов . несущих Ig М, G. А ; РТМЛ с КонА ; концентрация Ig M, G. А ; содер жа ние циркулирующих иммунных комплексо в ) недостаточно полно отражают динамику перех ода ВИЧ-инфекции из бессимптомной фазы к п ерсистирующей генерализованной лимфаденопатии (ПГЛ ) и от ПГЛ к стадии вто ричных заболеван ий. 2. Повышение активности 0-формы кса нти ноксидазы и интенсив ности процессов свободнорад икального окисления в мононуклеарах пе риферическ ой крови прогрессируют в динамике заболевания , при этом достоверные различия (р <0,05 и р <0.01 соответственно ) наблюдаются только при пер еходе от бессим п томной фазы к персистирувщей генерализованной лимфаденопатии. 3. При развитии ВИЧ-инфекции наблюдается увеличение относи тельной доли продуктов деграда ции хроматина (уровня полидезоксинуклеопротеидов ) и интенсивности образования однонитевых разрывов Д НК в мононуклеарах периферической к рови без достоверных различий в динамике болезни (р >0,05). 4. Белки теплового шока семейства БТШ -70 индуцируют образова ние поликлональных антител высокой специфичности и аффинности , распознающ их один или несколько с межных сайтов на нативных молеку лах белков , что исключ ает возможность использования полученных иммуног лобулинов в конструкции иммуноферментных тест-сис тем для ко личественного определения БТШ -70. но допускает их применение в ме тоде иммуно блотинга. 5. Пр и переходе клинического течения заболевания от бессимп томной фазы к пер систирующей генерализованной лимфаденопатии (ПГЛ ) и от ПГЛ к стадии вторичных заболеваний происходит достоверное увеличение содержания конститутивной изоформы семейства БТШ -70 в мононуклеарах периферической крови , характе ризующее пребывание им мунокомпетентных клеток в состоянии хронического стресса (р <0.05). 6. Функциональное истощение системы БТШ -70 мононуклеаров пе риферической крови ВИЧ-инфицированны х проявляется снижением и нтен сивности от вета (синтез индуцибельной изоформы БТШ -70) на стрессорные воздействия в виде гипертермии и ультрафиолетового облуче ния. 7. Динамика изменений белков теплового ш ока семейства БТШ -70 в совокупности с показ ателями свободнорадикального окисления и системы ксантиноксидазы мононуклеаров периферичес кой крови соот ветствует клиническому развитию ВИЧ-инфекции , что позволяет ис пользовать их для прогнозирования перехода клинического теч ения заболевания из бессимптомной фазы в фазу п е рсистирующей генерали зованной лимфаденопатии (ПГЛ ) и от ПГЛ к стадии вторичных заболе ваний. ПРАКТИЧЕСКИЕ Р ЕКОМЕНДАЦИИ Предложенный с пособ оценки функционального состояния системы белков теплового шока мононуклеаров перифериче ской крови с приме нением стрессорных в оздействий - гипертермии и ультрафиолетового излуч ения - целесообразно использовать в эксперименталь ных исследованиях , направленных на изучение п атогенеза вторичных иммунодефицитных состояниях при ВИЧ-инфекции и других инфекционных заболе в аниях. Комплекс показателей , отражающих состояние семейства белков теплового шока БТШ -70 (повыш ение содержания конститутивной изофор-мы hsc-70 более 68,9 у.д.е .) и системы ксантиноксидазы (повышение активно сти 0-формы более 1,03 мкмоль /мг белка-мин ) м ононуклеаров периферической крови , в сово купности с традиционными показателями иммунного статуса может быть использован для прогн озирования пере хода клинического течения ВИЧ-инф екции бессимптомной фазы в фазу персистирующе й генерализованной лимфаденоп а тии . Дл я перехода ПГЛ в стадию вторичных заболев аний характерно повышение содержания конс титутив ной изоформы hsc-70 более 74,1 у.д.е . Включение указанн ых методов в комплексное лабораторно-диагностичес кое обследование больных ВИЧ-инфекцией позволяет прогнозировать клиническое течение з аболевания. Список работ , опубликованных по теме д иссертации 1. Приготовление специфических поликлональных антител к бел кам теплового шока // Мат . XI науч . конф . молодых ученых и специа листов академии .- Л .:ВМедА , 1990 .- С .18-19. 2. The characterization and use of different antibodies aga inst the hsp70 major heat shock protein family for the development of an Immunoassay // Electrophoresls. - 1991.-N12.-P.670- 673 (co авт . Б . А . Маргулис и др .). 3. The state of HSP-70 in lymphocytes In transition of HIV Infection to the clinical manifestation stage // Social and medi cal problem of AIDS.- St.-Petersburg. 1994.- P. 14 ( соавт . Л . А . Ко жемякин и др .). 4. HSP-70 state significance In the diagnosis and prognosis HIV-Infection // AIDS. cancer and related problems.- St.-Peters burg, 1996.- P. 130-131 ( соавт . Е . И . Змушко ). 5. Лабораторный контроль донорско й крови в целях безопасности по ВИЧ-инфекц ии // Актуальные вопросы гематологии и трансфуз иологии .- СПб . 1996.- С . 67 (соавт . Е.И.Змушко и др .). 6. Диагностическое значение белков теплового шока при ВИЧ-ин фекции // Новые информационные технологии в медицине и экологии . -Гурзуф . Ялта , 1996.- С . 56 (соавт . Е.И.Змушко ). 7. Прогностическое значение бел ков те плового шока при ВИЧ-ин фекции // Инфектология . Д остижения и перспективы . -СПб : ВМедА , 1996.-С .99 (с оавт . Е.И.Змушко и др .).
1Архитектура и строительство
2Астрономия, авиация, космонавтика
 
3Безопасность жизнедеятельности
4Биология
 
5Военная кафедра, гражданская оборона
 
6География, экономическая география
7Геология и геодезия
8Государственное регулирование и налоги
 
9Естествознание
 
10Журналистика
 
11Законодательство и право
12Адвокатура
13Административное право
14Арбитражное процессуальное право
15Банковское право
16Государство и право
17Гражданское право и процесс
18Жилищное право
19Законодательство зарубежных стран
20Земельное право
21Конституционное право
22Конституционное право зарубежных стран
23Международное право
24Муниципальное право
25Налоговое право
26Римское право
27Семейное право
28Таможенное право
29Трудовое право
30Уголовное право и процесс
31Финансовое право
32Хозяйственное право
33Экологическое право
34Юриспруденция
 
35Иностранные языки
36Информатика, информационные технологии
37Базы данных
38Компьютерные сети
39Программирование
40Искусство и культура
41Краеведение
42Культурология
43Музыка
44История
45Биографии
46Историческая личность
47Литература
 
48Маркетинг и реклама
49Математика
50Медицина и здоровье
51Менеджмент
52Антикризисное управление
53Делопроизводство и документооборот
54Логистика
 
55Педагогика
56Политология
57Правоохранительные органы
58Криминалистика и криминология
59Прочее
60Психология
61Юридическая психология
 
62Радиоэлектроника
63Религия
 
64Сельское хозяйство и землепользование
65Социология
66Страхование
 
67Технологии
68Материаловедение
69Машиностроение
70Металлургия
71Транспорт
72Туризм
 
73Физика
74Физкультура и спорт
75Философия
 
76Химия
 
77Экология, охрана природы
78Экономика и финансы
79Анализ хозяйственной деятельности
80Банковское дело и кредитование
81Биржевое дело
82Бухгалтерский учет и аудит
83История экономических учений
84Международные отношения
85Предпринимательство, бизнес, микроэкономика
86Финансы
87Ценные бумаги и фондовый рынок
88Экономика предприятия
89Экономико-математическое моделирование
90Экономическая теория

 Анекдоты - это почти как рефераты, только короткие и смешные Следующий
— Официант, в моем супе сапог, кусок покрышки, бензиновый бульон и презерватив!
— Это суп с морепродуктами, что выловили, то и положили.
Anekdot.ru

Узнайте стоимость курсовой, диплома, реферата на заказ.

Обратите внимание, реферат по медицине и здоровью "Значение белков теплового шока при вич-инфекции", также как и все другие рефераты, курсовые, дипломные и другие работы вы можете скачать бесплатно.

Смотрите также:


Банк рефератов - РефератБанк.ру
© РефератБанк, 2002 - 2017
Рейтинг@Mail.ru