Реферат: Значение белков теплового шока при вич-инфекции - текст реферата. Скачать бесплатно.
Банк рефератов, курсовых и дипломных работ. Много и бесплатно. # | Правила оформления работ | Добавить в избранное
 
 
   
Меню Меню Меню Меню Меню
   
Napishem.com Napishem.com Napishem.com

Реферат

Значение белков теплового шока при вич-инфекции

Банк рефератов / Медицина и здоровье

Рубрики  Рубрики реферат банка

закрыть
Категория: Реферат
Язык реферата: Русский
Дата добавления:   
 
Скачать
Архив Zip, 32 kb, скачать бесплатно
Заказать
Узнать стоимость написания уникального реферата

Узнайте стоимость написания уникальной работы

На правах рукописи НАЧАРОВ Петр Васильевич ПРОГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ БЕЛКОВ ТЕПЛОВОГО ШОКА ПРИ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ 14.00.10 — инфекционные болезни АВТОРЕФЕ PAT диссертации на соискание ученой степени кандидата ме дицинских наук САНКТ-ПЕТЕРБУРГ 1997 Работа выполнена в Военно-мед ицинской академии. Научный руководитель : доктор медицинс ких наук Е . И . З мушко. Научный консультант : доктор медицинских наук профессор Ю . В . Лобзин. Официальные оппоненты : доктор медицинских наук профессор В . В . Иванова , доктор медицинских наук профессор А . Г . Рахманова. Ведущее учреждение— Российский научно-мет одический центр но про филактике и борьбе со СПИДом. Защита диссертации состоится “” ............... 1997 г. в .... часов на заседании специализированног о совета Д 106.03.05 при Военно-медицинской академии (194044, г . Санкт- Петербург , ул . Лебе дева , 6). С диссертацией можно ознакомиться в фундаментальной библиотеке академии. Автореферат разослан 1997 г. Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук профессор Ю . И . Ля шенко ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность проблемы . В России в опросы стратегии и тактики борьбы с ВИЧ-инфекцией определены работами В.И.Покровского (1988: 1989; 1993). В.И.Покровский (1987) пре дсказал грядущий размах распространения ВИЧ-инфек ции в стране и внед рил в практическое здравоохранение структуру , пре д назначе нную для борьбы со СПИДом. В настоящее время ВИЧ-инфекция охватила все страны мира . К середине 1996 года общее количество инфицированных вирусом иммуно дефицит а во всем мире достигло 27,9 миллионов челов ек (Рахманова А.Г ., 1996). Несмотря на то , что выполнен бес прецедентно большой объем на учных исследований по . проблеме ВИЧ-инфекции , предложены методы ле карственной терапии , позволяющие добиваться вр еменного улучшения состояния больных СПИДом . до настоящего времени не известен ни оди н д о стоверный случай выздоровления , поэтому СПИД считают бо лезнью с летальнос тью 100%. Проблема ВИЧ-инфекции усугубляется еще и тем фактом , что с начала девяностых г одов ВИЧ все более и более завоевывает основную популяцию населения , в то время как в течение первых десяти лет р аспространение шло преимущественно среди определ енных групп насе ления , так называемых "групп риска " - наркоманы , гомосексуалисты . проститутки , больные гемофилией (Лобзин Ю.В ., Казанцев А. П .. 1996). Актуальность проблемы определяет неупр авляемое интенсивное возрастание случаев инфицир ованности , болезненности и смертности во всех странах мира (Шувалова Е.П ., 1995). Выявление ВИ Ч-инфицированных лиц не приводит к прекращени ю передачи ВИЧ от них , нес мотря на ув едомлен и е их об уголовной ответст венности за заражение (Покровский В.В . с со авт ., 1996). Не решенными остаются основные проблем ы СПИДа (Белозеров Е.С . с соавт ., 1995): - отсутствие методов ранней диагностики : - полная неуправляемость патологических проц ессов у заболев шего : - отсутствие надежных клинических и лабо раторных показателей перехода инфекционного проц есса из латентной стадии в манифестную. При СПИДе и ВИЧ-инфекции достаточно хо рошо изучены основные лабораторные диагностическ ие показатели , свидетел ьствующие об инфиц ированности (Змушко Е.И . с соавт ., 1996). Однако в опросы прог нозирования клинического течения ВИЧ- инфекции требуют дальнейшего изучения . Наибольшее клиническое значение имеет прогноз перехода от бессимптомной фазы к персистирующей г е нерализованной лимфаденопатии (ПГЛ ), а также от ПГЛ к стадии вторичных забо леваний , кото рый важен для своевременного наз начения этиотропных и патогенети ческих средств (Рахманова А.Г .. Чайка Н.А ., 1989). При поиске новых тестов , которые дава ли бы пре дставление о состоянии иммун окомпетентных клеток крови при ВИЧ-инфекции , о бра тила на себя внимание группа сравнительно недавно открытых внут риклеточных белков , пол учивших название "белки теплового шока " (БТШ ) или "стрессовые белки ". Эти белки не д остаточно изучены , но уже имеющиеся данные говорят , что они высоко консервативны в про цессе филогенеза ( Lindqulst S . , 1986), необычно полифункциональны - играют важну ю роль во многих внутриклеточных иммунобиохим ических процессах как в экстремальных , т ак и в нормальных условиях ( Polla B . S ., 1988), что позволяет предположить об участии белков теплового шока в фор мировании патобиохимических внутриклеточных связей при ВИЧ-инфекции. В ответ на воздействие неблагоприятных факторов , в том числе и вирусной инфекции , формируется неспецифическая клеточная р еак ция , которая сопровождается усилением процесс ов свободнорадикального окисления (Иванова В.В . с соавт ., 1992: 1996), синтезом бел ков теплового шок а ( Kaufman S . H . E .. 1990) и является одним из ме хан измов дестабилизации генома клеток-мишеней . В этих условиях не маловажной представляется роль фермента ксантиноксидазы , которая служи т генератором свободных радикалов при ряде патологических состояний клетки и является наиболее значимой среди проокс и дан тных систем , характерных для лимфоидной клетк и (Кожемякин Л.А . с со авт .. 1992). Отсутствие в литературе данных по ком плексной оценке процес сов дестабилизации генома , сопряженных с активностью свободнорадикального окисления и системы ксантиноксида зы в иммунокомпетентных клетках крови в динамике развития ВИЧ-инфекции не позволяет опре делит ь значимость названных показателей для прогн оза клинического течения болезни. Цель исследования : дать оценку возможност и ис пользования показателей белков тепл о вого шока семейства БТШ -70 и комплекса био химических изменений в мононуклеарах периферичес кой крови в прогнозировании клинического тече ния ВИЧ-инфекции. Для достижения указанной цели необходимо было решить следуюие задачи : 1. Изучить динамику традиц ионных пока зателей иммунного стату-а у ВИЧ-инфицированных и определить их прогностическую значимость при переходе клинического течения болезни из одной стадии в дру гую. 2. Изучить изменения активности ксантиноксид азы , интенсивнос ти процессов свободнора дикаль ного окисления и показателей неста бильности генома мононуклеаров периферической крови при ВИЧ-инфек ции и оценить их прогностическую значимость. 3. Разработать методические подходы к соз данию иммунологического метода для количественно го и качест венного анализа белков се мейства БТШ -70. 4. Изучить показатели белков семейства БТ Ш -70 в мононуклеарах периферической крови на разных фазах ВИЧ-инфекции. 5. Определить взаимосвязь изменений белков семейства БТШ -70 и комплекса биохимических п оказателей де стабилизации генома . свобод норад икального окисления и системы ксантиноксидазы мононуклеаров периферической крови у больных в динамике заболевания и оценить их значимость для прогноза клинико-манифестных форм ВИЧ-инфекции. Научная новизна : 1. Впервые установлено , что нарастание накопления конститу тивной изоформы белков с емейства БТШ -70 в мононуклеарах перифери ческой крови ВИЧ-инфицированных пропорционально степени выражен ности клинических проявлений болезни. 2. Показана связь изменения показа те лей белков семейства БТШ -70 с уровнем неста бильности генома , активностью процессов сво боднор адикального окисления и системы ксантиноксидазы в мононукле арах периферической крови у больных ВИЧ-инфекцией в процессе раз вития кли нической картины заболе в ания. 3. Установлено , что изменение состояния белков семейства БТШ -70 в мононуклеарах перифер ической крови адекватно отражает ве роятность перехода ВИЧ-инфекции из бессимптомной фазы в фазу персистирующей генерализованной лимфаде нопатии и от перси стирующей генерализова нной лимфаденопатии к стадии вторичных заболе ваний. 4. Установлено , что ВИЧ-инфекция вызывает нарушение реакции белков теплового шока (БТШ -70) мононуклеаров периферической крови в ответ на повреждающие воздействия (гипертермия . уль трафиолетовое облучение ). Практическая значимость работы. Комплекс показателей , отражающих состояние системы белков теплового шока , системы кса нтиноксидазы , процессов свободнорадикального и не стабильности генома мононуклеаров периферической кро ви , в совокупности с традиционными иммунологическими показателями может быть исп ользован для прогнозирования перехода клиническо го течения ВИЧ-инфекции из бессимптомной фазы в фазу ПГЛ и от ПГЛ к стадии вторичных заболеваний. Изучение показателей белков теплового шока мононуклеаров пе риферической крови чел овека как защитного механизма неспецифичес кого действия может может быть применено для оценки эффективности лекарственных средств с иммуномодулирующими свойствами , а также для разработки новых ди а гностических подходов к прогнозированию иммунодефицитных с остояний различной этиологии. Основные положения , выносимые на защиту : 1. Переход клинического течения заболевания от бессимптомной фазы к персистирующей генерализованной лимфаденопатии (ПГЛ ) и от ПГЛ к стадии вторичных заболеваний характе ризуется увеличением со держания конститутивной и зоформы семейства БТШ -70 в мононуклеарах перифе рической крови. 2. Изменения содержания белков семейства БТШ -70 в процессе ВИЧ-инфекции происходят на фоне ув еличения показателей нестабиль но сти генома , интенсификации процессов свободноради кального окис ления и повышения активности кс антиноксидазы в мононуклеарах пери ферической кро ви. 3. Показатели белков семейства БТШ -70 монон уклеаров перифери ческой крови в совокупнос ти с традиционными иммунологическими по казателям и возможно использовать для прогнозирования п ерехода кли нического течения ВИЧ-инфекции из бессимптомной фазы в фазу пер систирующей ген ерализованной лимфаденопатии (ПГЛ ) и от ПГЛ к ста дии в торичных заболеваний. Апробация работы. Результаты исследований до ложены на XI-й и XII-й научных конференциях молодых ученых акаде мии (ВМедА , Ленинград , 1990; ВМедА , Санкт-Петерб ург , 1992), на VI-м Всесоюзном биохимическом съезде (Сан кт-Петербург, 1992), на Первой международной реги ональной конференции по ВИЧ-инфекции "Со циальные и медицинские проблемы СПИДа " (Санкт-Петербург , 1994). на заседании Санкт-Петербургского отделения Российского научного об щества инфекционистов ( Санкт-Петербург , 199 6 ), на IV международной ко нференции "СПИД , рак и родственные проблемы " (Санкт-Петербург . 1996), на III Всероссийском съезде ге матологов и трансфузиологов (Санкт-Петербург . 1996). Мат ериалы диссертации использованы в от четах по теме НИР N 50-93-В 12 " Б иохимические мех анизмы формирова ния иммунодефицитов под влиянием ВИЧ и иммунодиагностика иммуноде фицитных со стояний больных СПИДом " и по теме НИР N 60-95-П 4 "Исс ледование роли системы белков теплов ого шока в патогенезе ВИЧ-ин фекции ". Реализация рез ультатов работы. По теме диссертации опубликовано 7 научных работ . Результаты работы используются в практике учебного процесса и научно-исследователь ской работе кафедры инфекционных болезней , ка федры клинической би охимии и лабораторной ди агностики , в работе НИЛ СПИДа и инфе кцион ных заболеваний в ВС РФ Военно-медицинск ой академии , кафедры ин фекционных болезней Се мипалатинского государственного медицинского институ та , кафедры ЛОР-болезней с курсом аллергологии и иммуноло гии Чимкентского государс т венного медицинского института , кафедры и нфекционных болезней Волгоградского государственного медицинского университета. Объем и структура диссертации . Диссертация изложена на 171 страницах машино писного текста , состоит из введения , обзора литерату ры , пяти глав собственных иссле дова ний . обсуждения полученных результатов , вывод ов , практических ре комендаций и списка литера туры , включающего 61 отечественный и 140 зарубежных источников . Диссертация иллюстрирована 24 рисунками и 17 таблицами. СОДЕР ЖАНИЕ РАБОТЫ 1. Общая характеристи ка больных и методов исследования В процессе работы были обследованы 34 и нфицированных и больных ВИЧ-инфекцией , среди к оторых преобладали лица мужского пола в в озрастной категории от 20 до 39 лет . Клиническое наблюден ие и обследование больных п роводили в больнице N 30 имени С.П . Боткина г.С анкт-Петербурга , Республиканской клинической инфекцион ной боль нице г . Усть-Ижоры Ленинградской обла сти , в Центре по борьбе и профилактике СПИДа г.Санкт-Петербурга. Больные был и распределены по груп пам в соответствии с клинической классификаци ей В.И.Покровского (1989). Вич-инфицированных в стадии инкубации и больных в терминальной стадии не обследовали . Контрольную группу составили 25 практически здоровых мужчин (доно ров кр о ви ) в возрасте от 20 до 39 лет - военнослужащие. Иммунологические и биохимические исследовани я проводили в Во енно-медицинской академии , оп ределение белков теплового шока - на базе института цитологии Академии наук. Диагноз ВИЧ-инфекции верифицировали се рологически - по нали чию в крови специ фических антител к ВИЧ с помощью тест-сист ем для гетерогенного иммуноферментного анализа методом двойных антител (производства фирм СП "ДиаПЛЮС ". Россия-Швейцария , СП "Авиценна ", Р оссия-Сирия ). Результаты иммуно ф ерментного анализа подтверждали с помощью иммуноблотинг а (" Du Pont ", США ). Для оценки иммунного статуса у обслед ованных пациентов изуча ли следующие показатели : количество лейкоцитов , лимфоцитов ; субпо пуляции Т-лимфоцитов с помощью проточного цит офлюориметра " EPICS - C " ( Coulter elektronics . США-Франция ) с применением моноклональных антител фирмы " Ortho Diagnostic Systems "(США ): РТМЛ с КонА определяли по методу M . George . J . H . Vaughan (1962); количество В-лимфоцитов , несущих Ig M , G , А , определя ли методом иммунофлюорес ценции с использованием моноспецифических сыворо ток к иммуноглобулинам человека ; концентрации Ig M . G , А , определяли методом радиальной иммунодиффузии в геле ( Mancini С. et al .. 1963); содер жание циркулирующих иммунных компл е ксов по методу Ю.А.Гриневича . А.Н.Алферова (1981). Для исследования системы белков тепловог о шока в мононуклеарах периферической крови ВИЧ-инфицированных была получена панель поли клональных антител . При иммунизации животных и аффинной очист ки антител п рименяли препарат белков БТШ -70. Для получения препа рата БТШ -70 использовали белковый экстракт , полученн ый из мышечной ткани крупного рогатого ск ота и клеток культуры HeLa . Выделяли препарат методами ионообменной (с DEAE-сефарозой ; и аффинной (с А ТФ-агар озой ) хроматографии . Чистоту полученных белков БТШ -70 про веряли при помощи электрофореза в полиакриламидном геле с додецилсульфатом нат рия . Препарат БТШ -70 имел чистоту около 98% и содер жал смесь конститутивной ( hsc -70) и индуцибельной ( hsp -70) и зоформ семейства БТШ -70. Из иммунной сыворотки кроликов выделяли антитела к БТШ -70 ме тодами высаливания и аффинной хроматографии на колонках со см есью белков hsc -70 и hsp -70. Каждая серия антител подвергалась проверке на специфичность двумя методами - и м муноферментного анализа и иммуноблоттинга . Для определения эпитопов БТШ -70, с которыми реаги ровали полученные антитела , использовали "сэндвич "-метод иммуно ферментного анализа и реакция иммунопреципитации с предварительным м ечением белков [ 35 S]-метион ином . Иммунопреципитаты были подверг нуты одно - и двумерному электрофорезу ( Laemli U . K ., 1970; O ' Farrel P . H .. 1978). Поликлональные антитела использовали в конструкции иммуноблотинга с последующей де нситометрией проявленных зон бел ков , что позв олял о полуколичественно оценивать содержание изоформ семейства БТШ -70 в мононуклеарах п ериферической крови больных. Для проверки функционального состояния си стемы БТШ -70 мононуклеаров периферической крови служили нагрузочные тесты In vitro - тепловой шок (п рогрев клет ок при 43± 0.3° С в водяном термостате ) и ультрафиолетовое облучение с использование м прибора МД -73 "Изольда ". Определение активности ксантиноксидазы и ее формы в мононуклеарной фракции крови п роводили по методу У.Прайор (1979). Уровень п роцессов свободнорадикального окисления тота льно в мононуклеарах периферической крови и отдельно в их ядрах оценивали по сод ержанию продуктов , связывающих тиобарбитуровую ки слоту , которые определяли по методу M . Uchlyama , M . Michara (1978). В к ачестве ин тегральных биохимических показател ей нестабильности генома клеток были избра ны относительная доля продуктов деградации хром атина - полидезоксинуклеопротеидов , которые являются фрагментами ДНК, ( Parks D . A ., Granger D . N ., 1986) и интенсивность образования однонит евых разры вов ДНК ( Birnboim H . C .. Jewcac J . J . . 1981). Статистическая обработка цифровых данных осуществляли методом вариационной статистики с использованием параметрического критерия ( t ) Стьюдента . В случае малых выборок использовали непараметриче с кие статистические критерии . Расчеты про изводили с использованием программы STATGRAF ( Statistical Graphics System ), версия 2.1. 2. Результаты собственных исследований Гумор альный и клеточный иммунитет на разных ст адиях болезни Исследование изменений в иммунной системе при развитии ВИЧ-инфекции имело целью выявить показатели , достоверно изменяющи еся при переходе от одной клинической стадии ( фазы ) к другой. Анализ изменений иммунологических параметров больных позволя ет заключить , что в динам ике ВИЧ-инфекции , в первую очередь , про ис ходит прогрессирующее снижение функциональной со стоятельности иммунной системы по мере развит ия клинической картины заболевания . Выявленная дефектность иммунного статуса касается , прежде всего . Т-системы иммуните т а . Однак о далеко не все исследованные традици онные иммунодиагностические параметры в своей динами ке достоверно отражают начало перехода от бессимптомной фазы заболевания к манифестным стадиям . Достоверное различие между группами больных ВИЧ-инфек ц ией наблюдалось у следующих показателей : - при переходе от бессимптомной фазы (IIБ ) к ПГЛ ( IIB ) - уве личение относительного содержания лимфоцитов от 39,00± 2,13 до 45,92± 1.96% (р <0,05), уменьшен ие содержания С D8+-лимфоцитов (супрессоров ) ОТ 36,90± 2.90 до 27,83± 1,80% ( p <0,01); - при переходе от ПГЛ (IIB) к стадии вторичных заболеваний ( IIIA ) - увеличение содержания В ( IgA +) -лимфоцитов от 0,06± 0,01 до 0,10± 0,01 xlO 9 /л ( p <0,01), увеличение концентрации IgG от 11,74± 0.89 до 13.77± 0.66 г /л (р <0.05) , увел ичение содержания цир кулирующих иммунных комплек сов - уменьшение пропускания светового потока от 92,1± 1,2 до 84.3± 1.6% (р <0,01). Как показал анализ , процентные (относитель ные ) показатели во многих случаях нельзя и спользовать без оценки абсолютных значений . абсолютное содержание В (IgA+)-лимфоцитов , остает ся неизменным на стадии IIIA по сравнению с бессимптомной фазой , изменение концент рации иммуноглобулинов IgG происходят в диапазоне нормаль ных зна чений (9-15 г /л ), что снижает прогности ческую информативность ука занных показате лей . Важен и тот факт , что нет единого иммунологического показателя , который бы дос товерно характеризовал оба пере хода ВИЧ-инфекции - от бессимптомной фазы к генерализованной лимфаденопатии и от генерализованной лимф а денопатии к стадии вторич ных за болеваний. Содержание продуктов , связывающих тиобарбитур овую кислоту , в мононуклеарах периферической крови Уже в бессимптомной фазе у ВИЧ-инфицир ованных отмечается уве личение средних значений содержания ТБК-связывающих со единений в мононуклеарах периферической крови на 56%, а в их ядрах - на 90%. По мере развития за болевания уровень названных продуктов свободно-ра дикального окисления возрастает , достигая максиму ма у больных в стадии IIIB . При этом средние значения в гр уппе больных в стадии IIIB превышали ко нтрольные в 3.2 раза в мононуклеарах и в 4,6 раза в ядрах мононуклеаров . Однако достове рный рост показателей свободнорадикального окисл ения между группами больных ВИЧ-инфекцией от м ечается в мононуклеарах . но не в яд рах , и только в одном из инте ресу ющих нас переходах клинического течения - из бессимптомной фа зы (ПБ ) к ПГЛ (IIB) от 2,82± 0,30 до 3,61± 0.37 нмоль /10 6 клеток (р <0,01). Активность форм ксантиноксидазы в мононук леарах периферической крови Отмечается про грессивное возрастание общей ксантиноксидазной активности в мононуклеар ах периферической крови пациентов по мере развития заболевания . Однако динамика состояни я D - и 0-форм фер мен та , оказалась разнонаправленной : по мере прогр ессирования забо левания п роисходит постепенн ое снижение средних значений активнос ти D-фор мы ксантиноксидазы (на 12,5% в стадии IIB и на 75,5% в стадии III В ) и нарастание активности 0- формы фермента (на 13,4% в стадии ПБ и в 6,5 раз в стадии IIIB). При этом достоверног о уменьшения активности D-формы ксант иноксидазы в переходах клини ческого течения IIБ -IIB и IIB - IIIA не отмечается , а активность 0-формы достоверно возрастает только при пер еходе от бессимптомной фазы (ПБ ) к ПГЛ (IIB) (р <0,05). Интегральные метаболиче ские показатели дестабилизации генома мононуклеаров периферической крови У ВИЧ-инфицированных уже в бессимптомной фазе отмечается уве личение средних значений содержания полидезоксинуклеопротеидов (ПДН ) в 1,3 раза , а выраженности однонитевых разрыво в ДНК в 2.3 раза . Выявленные изменения прогрессируют по мере развития ВИЧ-инфекции , однако достоверных различий показателей нестаб ильности ге-нома между группами больных не отмечается , что не позволяет расс матривать их в качестве прогностических крите р иев перехода клини ческого течения болезн и из одной стадии в другую. Характеристика поликлональных антител к белкам семейства БТШ -70 Каждый из полученных нами препаратов антител распознавал спе цифический профиль изофор м семейства БТШ -70, денатурированны х до-деци лсульфатом натрия . Антитела из сыворотки крол ика N5 (ант итела N5) различают две зоны молекулярной массы 68-72 к Да , которые представляют собой две изоформы семейства БТШ -70. Тепловое воз действие (43°С - 30 минут ) на клетки HeLa, белковый экстракт кото рых и спользовали для приготовления иммуноблота . отража лась на ре зультате иммуноблота усилением инт енсивности зоны , соответствующей hsp70. Антитела N7 распознавали и hsp70. и р 75, тогда как антитела N10 главным обра зом связывались только с р 75. a Nil - с hsp70. Та кие же примеры распознавания белков семейства БТШ -70 на иммуноблотах наблюдались , когда вме сто клеток HeLa для анализа использовали мононук леары периферической крови человека. Для того , чтобы определить компоненты семейства БТШ -70, кото рые реагируют в неде натурированном состоянии с представленной па нель ю антител , выполнено исследование иммунопреципита ции . И одно -, и двумерные электрофоретические анализы иммунных комплексов не по казывали различий между антигенами , преципитир о ванными с тестируе мыми антителами : иммунн ые комплексы содержали только одну зону . соответствующую индуцибельной форме hsp70. Иммобилизован ные на твердой фазе антитела N5 и N7 также избирательно реагировали с ан тигеном hsp70 из белкового экстракта клеток HeLa. В итоге , по причине особых свойств полученных антител к БТШ -70. которые , как оказало-сь , распознают только один или нес к олько смежных сайтов на нативных молекулах БТШ -70. а также по причине свойств белко в семейства БТШ -70 легко о бразовывать п рочные соединения е другими белками клетки в обычных условиях , не предс тавилось возмо жным использовать полученные поликлональные анти тела для создания иммуноферментной тест-системы , предназначенной для количественного определения БТШ -70 в белковых экстрактах мононуклеар ов периферической крови . Поэтому пришлось исп ользовать указан ные антитела в конструкции д ругого метода для определения БТШ -70 в белк овых экстрактах - метода иммуноблотинга с -посл едующей денситометрией проявленных зон бел к ов. Изменения состояния семейства БТШ -70 монону клеаров периферической крови на различных ста диях ВИЧ-инфекции Семейство БТШ -70 в мононуклеарах периферич еской крови всех групп обследованных представ лено полностью тремя изоформами : инду цибельной (hsp-70 ), конститутивной (hsc-70) и белком р 75. Не обна ружено до стоверных различий в соотношении изоформ БТШ -70 между до норами и пациентами в бессимпто мной фазе ВИЧ-инфекции . Напротив , у больных в более поздних стадиях заболевания выявле но достоверное изменен ие анализируемых п араметров по сравнению с контрольной группой . Наблюдается прогрессивное уменьшение средних значений со держания изоформ hsp-70 и р 75, увеличе ние hsc-70 по мере развития клинической картины заболевания . Однако достоверное различие и зо форм семейства БТШ -70 в мононуклеарах периферической крови между группами больных ВИЧ-инфекцией наблюдали только по отношению к конститутивной изоформе (hsc-70). содержание которо й увеличивается при переходе заболевания из бессимптомной фазы (ПБ ) к фаз е ПГЛ (IIB) от 59,3± 2,5 до 66.2± 2,7 у.д.е . (р <0,05) и от фазы ПГЛ (IIB) к стадии вторичных заболеваний (IIIA) от 66,2± 2.7 до 7l,l± 3,0 у.д.е . (р <0,05). Исследование влияния теплового воздействия на мононуклеары периферической крови обследо ванных лиц позволило выявить прогрес сивн ое достоверное уменьшение содержания индуцибельн ой изоформы hsp-70 при переходах ПБ к IIB от 38,9± 4,3 до 30.4± 3.1 у.д.е .' и IIB к IIIA от 30,4± 3,1 до 22.1± 3.7 у.д.е . (р <0,05). Нами предложен индекс hsp-70 Tlll/ hsp-70 N. представляющий со бой отношение содержания индуцибельной изоф ормы семейства БТШ -70 в клетке , подвергнутой тепловому шоку in vitro, к содержанию этого белка в к летке , находящейся при t=37 0 С . Индекс hsp-70 TШ /hsp-70 N характеризует реакцию клет ки на экстремальное воздействие синтезом и накоплением индуцибельной изоформы . по которому косвенно можно судить об адаптивной состоятельности исследованных клеток . Досто верн ое уменьшение индекса hsp-70 TlB/hsp-70 N наблюдается в обоих п ереходах клин ических стадий : ПБ - IIB от 4,23 до 3.42 (р <0,05) и IIB - IIIA от 3,42 до 2.99 (р <0.05). что свидетельствует о про г рессивном ослаблении адаптивной функции мононук леаров периферичес кой крови . Воздействие ультрафи олетового облучения на нононуклеары периф ерической крови вызывало аналогичные сдвиги в системе белков теплового шока во всех группах больных. Представленный анализ полученных результатов выявляет значи мость динамики показателей се мейства белков теплового шока БТШ -70 мононуклеа ров периферическ ой крови для прогноза перехода клиничес кого развития ВИЧ-инфекции от бессимптомной фазы к генерализованной лимфа денопатии и от ПГЛ к стадии вторичных заболеваний. Патогенетическая связь исследованных биохими ческих показателей и белков теплового шока БТШ- 70 в мононуклеарах периферической крови при ВИЧ-инфекции Выявленная динамика показателей нестабильнос ти генома моно нуклеаров периферической крови у больных ВИЧ-инфекцией сопровожда лась существ енным увеличением концентрации соединений , связыв ающих тиоба рбитуровую кислоту , (продуктов свободнорадикального окисле ния ) в клетках и и х ядрах , что свидетельствует о повреждении ДНК мононуклеаров свободными радикалами . Ведущ им генератором активных форм кислорода при этом . судя по полученным результатам , с лужит 0-форма ксантиноксидазы , образу ющаяся из D-формы фермента в ре зультате ее ограниченного протеолиза . В свою очередь , протеолитическая трансформация D-формы ксантиноксидаз ы в 0-форму может быть прооксидантно-индуцирова нной. Таким образом можно п редположить , что повреждение ДНК моно нуклеаров вызвано с вободными радикалами , генерируемыми ксантинок-сидазой . В результате атаки ДНК свободными радик алами наблюдается образование.апуриновых /апиримидинов ых сайтов и однонитевых разры вов ДНК мон онукле а ров периферической крови . Прич ем степень указан ных процессов находится в зависимости от клинического течения ВИЧ-инфекц ии . В свою очередь , образование однонитевых разрывов яв ляется стимулирующим фактором повы шения активности ксантиноксидазы в монон у клеарах , а образующиеся олигонуклеотиды м огут служить факторами активации экспрессии п ровирусного генома ВИЧ . интегрирован ного в ДН К мононуклеаров периферической крови . В резул ьтате форми руется патологический круг . способству ющий репликации ВИЧ (рис .1, в конце ). Описанные процессы , среди которых наиболе е значимым является свободнорадикальное окислени е , сопровождаются характерными измене ниями систем ы белков теплового шока в мононуклеарах п ериферической крови , происходящими в тесной с вязи с клиническим те чением ВИЧ-инфекции . Указанные изменения БТШ -70 в неинфицированных клетках мо гут быть опосредованы влиянием вирусного белка gplZO. взаимодейс твие которого с рецепторо м CD4 не только вызывает стрессовую реак цию . проявляющу юся рядом функциональных изме нений , в том числе и усилением транскрипции с гено в БТШ -70 (G.Furlini at al.. 1994).. но и приводит к программированной клеточной гибели - апоптозу зрелых С D4+-лимфоц итов или С D34+-гематопоэтических клеток-предшественн и ков (Hofman В о , 1991; Montagnier L. et al. , 1992). В инфицирован ных клетках экспресс ия генов ВИЧ и генов , кодирующих синтез БТШ -70. осуществляется по общим механизмам с участием ядерного фактора NF-kB (Krumm A. et al.. 1993). Таким образом , и в неинфицированных , и в инфицир ованных ВИЧ иммунокомпетентных клетках крови больных показатели семейства БТШ -70 могут обоснованно рассматриваться в качестве индикатора ак тивности репликативного процесса вируса , формирования вторичного иммунод ефицита (вследствие дисфункции и гиб е ли СБ 4+-клеток ) и раз вития клинического течения болезни. ВЫВОДЫ 1. Традиционные для оценки иммунного стат уса лабораторные по казатели (количество CD3+. CD4+. С 08+-лимфоц итов . В-лимфоцитов . несущих Ig М, G. А ; РТМЛ с КонА ; концентрация Ig M, G. А ; содер жа ние циркулирующих иммунных комплексо в ) недостаточно полно отражают динамику перех ода ВИЧ-инфекции из бессимптомной фазы к п ерсистирующей генерализованной лимфаденопатии (ПГЛ ) и от ПГЛ к стадии вто ричных заболеван ий. 2. Повышение активности 0-формы кса нти ноксидазы и интенсив ности процессов свободнорад икального окисления в мононуклеарах пе риферическ ой крови прогрессируют в динамике заболевания , при этом достоверные различия (р <0,05 и р <0.01 соответственно ) наблюдаются только при пер еходе от бессим п томной фазы к персистирувщей генерализованной лимфаденопатии. 3. При развитии ВИЧ-инфекции наблюдается увеличение относи тельной доли продуктов деграда ции хроматина (уровня полидезоксинуклеопротеидов ) и интенсивности образования однонитевых разрывов Д НК в мононуклеарах периферической к рови без достоверных различий в динамике болезни (р >0,05). 4. Белки теплового шока семейства БТШ -70 индуцируют образова ние поликлональных антител высокой специфичности и аффинности , распознающ их один или несколько с межных сайтов на нативных молеку лах белков , что исключ ает возможность использования полученных иммуног лобулинов в конструкции иммуноферментных тест-сис тем для ко личественного определения БТШ -70. но допускает их применение в ме тоде иммуно блотинга. 5. Пр и переходе клинического течения заболевания от бессимп томной фазы к пер систирующей генерализованной лимфаденопатии (ПГЛ ) и от ПГЛ к стадии вторичных заболеваний происходит достоверное увеличение содержания конститутивной изоформы семейства БТШ -70 в мононуклеарах периферической крови , характе ризующее пребывание им мунокомпетентных клеток в состоянии хронического стресса (р <0.05). 6. Функциональное истощение системы БТШ -70 мононуклеаров пе риферической крови ВИЧ-инфицированны х проявляется снижением и нтен сивности от вета (синтез индуцибельной изоформы БТШ -70) на стрессорные воздействия в виде гипертермии и ультрафиолетового облуче ния. 7. Динамика изменений белков теплового ш ока семейства БТШ -70 в совокупности с показ ателями свободнорадикального окисления и системы ксантиноксидазы мононуклеаров периферичес кой крови соот ветствует клиническому развитию ВИЧ-инфекции , что позволяет ис пользовать их для прогнозирования перехода клинического теч ения заболевания из бессимптомной фазы в фазу п е рсистирующей генерали зованной лимфаденопатии (ПГЛ ) и от ПГЛ к стадии вторичных заболе ваний. ПРАКТИЧЕСКИЕ Р ЕКОМЕНДАЦИИ Предложенный с пособ оценки функционального состояния системы белков теплового шока мононуклеаров перифериче ской крови с приме нением стрессорных в оздействий - гипертермии и ультрафиолетового излуч ения - целесообразно использовать в эксперименталь ных исследованиях , направленных на изучение п атогенеза вторичных иммунодефицитных состояниях при ВИЧ-инфекции и других инфекционных заболе в аниях. Комплекс показателей , отражающих состояние семейства белков теплового шока БТШ -70 (повыш ение содержания конститутивной изофор-мы hsc-70 более 68,9 у.д.е .) и системы ксантиноксидазы (повышение активно сти 0-формы более 1,03 мкмоль /мг белка-мин ) м ононуклеаров периферической крови , в сово купности с традиционными показателями иммунного статуса может быть использован для прогн озирования пере хода клинического течения ВИЧ-инф екции бессимптомной фазы в фазу персистирующе й генерализованной лимфаденоп а тии . Дл я перехода ПГЛ в стадию вторичных заболев аний характерно повышение содержания конс титутив ной изоформы hsc-70 более 74,1 у.д.е . Включение указанн ых методов в комплексное лабораторно-диагностичес кое обследование больных ВИЧ-инфекцией позволяет прогнозировать клиническое течение з аболевания. Список работ , опубликованных по теме д иссертации 1. Приготовление специфических поликлональных антител к бел кам теплового шока // Мат . XI науч . конф . молодых ученых и специа листов академии .- Л .:ВМедА , 1990 .- С .18-19. 2. The characterization and use of different antibodies aga inst the hsp70 major heat shock protein family for the development of an Immunoassay // Electrophoresls. - 1991.-N12.-P.670- 673 (co авт . Б . А . Маргулис и др .). 3. The state of HSP-70 in lymphocytes In transition of HIV Infection to the clinical manifestation stage // Social and medi cal problem of AIDS.- St.-Petersburg. 1994.- P. 14 ( соавт . Л . А . Ко жемякин и др .). 4. HSP-70 state significance In the diagnosis and prognosis HIV-Infection // AIDS. cancer and related problems.- St.-Peters burg, 1996.- P. 130-131 ( соавт . Е . И . Змушко ). 5. Лабораторный контроль донорско й крови в целях безопасности по ВИЧ-инфекц ии // Актуальные вопросы гематологии и трансфуз иологии .- СПб . 1996.- С . 67 (соавт . Е.И.Змушко и др .). 6. Диагностическое значение белков теплового шока при ВИЧ-ин фекции // Новые информационные технологии в медицине и экологии . -Гурзуф . Ялта , 1996.- С . 56 (соавт . Е.И.Змушко ). 7. Прогностическое значение бел ков те плового шока при ВИЧ-ин фекции // Инфектология . Д остижения и перспективы . -СПб : ВМедА , 1996.-С .99 (с оавт . Е.И.Змушко и др .).
1Архитектура и строительство
2Астрономия, авиация, космонавтика
 
3Безопасность жизнедеятельности
4Биология
 
5Военная кафедра, гражданская оборона
 
6География, экономическая география
7Геология и геодезия
8Государственное регулирование и налоги
 
9Естествознание
 
10Журналистика
 
11Законодательство и право
12Адвокатура
13Административное право
14Арбитражное процессуальное право
15Банковское право
16Государство и право
17Гражданское право и процесс
18Жилищное право
19Законодательство зарубежных стран
20Земельное право
21Конституционное право
22Конституционное право зарубежных стран
23Международное право
24Муниципальное право
25Налоговое право
26Римское право
27Семейное право
28Таможенное право
29Трудовое право
30Уголовное право и процесс
31Финансовое право
32Хозяйственное право
33Экологическое право
34Юриспруденция
 
35Иностранные языки
36Информатика, информационные технологии
37Базы данных
38Компьютерные сети
39Программирование
40Искусство и культура
41Краеведение
42Культурология
43Музыка
44История
45Биографии
46Историческая личность
47Литература
 
48Маркетинг и реклама
49Математика
50Медицина и здоровье
51Менеджмент
52Антикризисное управление
53Делопроизводство и документооборот
54Логистика
 
55Педагогика
56Политология
57Правоохранительные органы
58Криминалистика и криминология
59Прочее
60Психология
61Юридическая психология
 
62Радиоэлектроника
63Религия
 
64Сельское хозяйство и землепользование
65Социология
66Страхование
 
67Технологии
68Материаловедение
69Машиностроение
70Металлургия
71Транспорт
72Туризм
 
73Физика
74Физкультура и спорт
75Философия
 
76Химия
 
77Экология, охрана природы
78Экономика и финансы
79Анализ хозяйственной деятельности
80Банковское дело и кредитование
81Биржевое дело
82Бухгалтерский учет и аудит
83История экономических учений
84Международные отношения
85Предпринимательство, бизнес, микроэкономика
86Финансы
87Ценные бумаги и фондовый рынок
88Экономика предприятия
89Экономико-математическое моделирование
90Экономическая теория

 Анекдоты - это почти как рефераты, только короткие и смешные Следующий
– А что самое романтичное делал для вас мужчина?
– Взял напрокат автомобиль той же марки, что и у меня, и поменял у машин покрышки, чтобы у меня был абсолютно новый комплект.
Anekdot.ru

Узнайте стоимость курсовой, диплома, реферата на заказ.

Обратите внимание, реферат по медицине и здоровью "Значение белков теплового шока при вич-инфекции", также как и все другие рефераты, курсовые, дипломные и другие работы вы можете скачать бесплатно.

Смотрите также:


Банк рефератов - РефератБанк.ру
© РефератБанк, 2002 - 2016
Рейтинг@Mail.ru