Реферат: Влияние атропина на активность карбоксипептидазы H - текст реферата. Скачать бесплатно.
Банк рефератов, курсовых и дипломных работ. Много и бесплатно. # | Правила оформления работ | Добавить в избранное
 
 
   
Меню Меню Меню Меню Меню
   
Napishem.com Napishem.com Napishem.com

Реферат

Влияние атропина на активность карбоксипептидазы H

Банк рефератов / Медицина и здоровье

Рубрики  Рубрики реферат банка

закрыть
Категория: Реферат
Язык реферата: Русский
Дата добавления:   
 
Скачать
Архив Zip, 16 kb, скачать бесплатно
Заказать
Узнать стоимость написания уникального реферата

Узнайте стоимость написания уникальной работы

Влияние атропина на а ктивность карбоксипептидазы и фенилметилсульфонилфторид-ингибируем ой карбоксипептидазы в отделах мозга и надпочечниках крыс Изучено влияние однократного воздействия атро пина на активность карбоксипептидазы Н и фенилметилсульфонилфторид-ин гибируемой карбоксипептидазы - ферментов, участвующих в конечной стади и образования биологически активных нейропептидов из предшественнико в. Наблюдалось длительное, сохраняющееся по крайней мере в течение 72 ч сн ижение активности исследуемых ферментов. Предполагается, что снижение активности исследуемых ферментов может быть одним из механизмов сниже ния уровня нейропептидов при действии высоких доз атропина. Ключевые слова: карбоксипептидаза Н, фенилметилсульфонилфторид-ингиби руемая карбоксипептидаза, атропин, нейропептиды, мозг. Холинотропные препараты оказывают свое действие практически на все ре гуляторные системы. Особый интерес представляет изучение их взаимодей ствия с пептидергической системой, поскольку нейропептиды участвуют в регуляции разнообразных нейрофизиологических процессов и соматическ их функций, в том числе тех, которые нарушаются при отравлении холинобло каторами [1, 2, 3]. Общепризнано, что первичная фармакологическая реакция цен тральных холинотропных препаратов связана с активацией или блокирован ием холинорецепторов [4]. Однако многообразие фармакологических эффекто в (в частности, транквилизирующее, анальгезирующее влияние и т.д.) препара тов этой группы трудно объяснить только с этой позиции. Исследования пок азали, что действие этих препаратов на обмен медиаторов (норадреналина, серотонина, дофамина) [5], фосфолипидов и синтез белка [6] не дает возможности в полной мере объяснить механизм их действия. Имеется большое количество литературных данных об изменении концентра ции регуляторных пептидов в мозге и сыворотке крови животных при действ ии холинолитиков [7, 8]. Однако молекулярные механизмы действия холинотроп ных препаратов на уровень биологически-активных пептидов не изучены. Активная форма регуляторных пептидов образуется в результате протеоли тического процессинга пропептидов. На конечных стадиях этого процесса, в результате которого образуются биологически активные пептиды, участ вуют основные карбоксипептидазы, в частности карбоксипептидаза Н (КПН, К Ф 3.4.17.10) и фенилметилсульфонилфторид-ингибируемая карбоксипептидаза (ФМС Ф-КП) [9, 10]. КПН локализована в секреторных везикулах и вовлекается в процес синг предшественников многих регуляторнгых пептидов [9, 10]. ФМСФ-КП - недавн о описанный фермент [10], субстратная специфичность и тканевая локализаци я которого позволяет предположить возможность его вовлечения в обмен р яда биологически активных пептидов, в особенности опиоидных [10]. Однако би ологическая роль этого фермента во многом остается не ясной. В связи с этим, целью данной работы было изучение активности КПН и ФМСФ-КП при однократном введении атропина в отделах головного мозга и надпочеч никах крыс, характеризующихся высоким уровнем регуляторных пептидов. Материалы и методы Опыты выполнены на самцах белых беспородных крыс массой 200-300 г. Атропин вв одили внутрибрюшинно в физрастворе в дозе 2,5 мг/кг. Контрольной группе жив отных вводили равное количество физраствора. Крыс декапитировали чере з 0.5, 4, 24 и 72 ч после инъекции, извлекали надпочечники, головной мозг и разделя ли его на соответствующие отделы. Навески ткани гомогенизировали в 50 мм н атрий ацетатном буфере, содержащем 50 мМ NaCl, рН 5,6, в соотношении 1: 50 (вес: объем). В полученном гомогенате определяли активность КПН и ФМСФ-КП флюорометри ческим методом L.D. Fricker and S.H. Snyder [11], содержание белка методом Лоури [12]. Активность КПН оценивали по гидролизу дансил-Phe-Ala-Arg при рН 5.6 как ингибируем ую высокоспецифичным ингибитором фермента гуанидиноэтилмеркаптоянт арной кислотой (ГЭМЯК) [11], ФМСФ-КП по гидролизу дансил-Phe-Leu-Arg при рН 5.6 как ингиби руемую ФМСФ [10]. Опытные пробы содержали 50 мкл гомогената и 150 мкл 50 мМ натрий а цетатного буфера, содержащего 50 мМ NaCl. В контрольные пробы вносили ГЭМЯК (в случае КПН) и ФМСФ (в случае ФМСФ-КП) в конечной концентрации 1 мкМ и 1 мМ соот ветственно. Пробы преинкубировали 8 мин при 37 o C, затем вносили 50 мкл предварительно нагретого до 37 o C раствора субстрата (концентрация в про бе 42 мкМ), приготовленного на том же буфере и инкубировали в течении 60 мин п ри 37 o C. Р еакцию останавливали прибавлением 50 мкл 1М раствора HCl. Для экстракции про дукта реакции (дансил-Phe-Ala в случае КПН и дансил-Phe-Leu в случае ФМСФ-КП) к пробам приливали по 1,5 мл хлороформа, интенсивно встряхивали в течение 60 с. Хлороф ормную и водную фазы разделяли центрифугированием в течение 10 минут при 1000 об/мин. Флюоресценцию хлороформной фазы измеряли на флюориметре ФМЦ_2 при ? ex =360 нм и ? em =530 нм в кювете толщиной 1 см. В качестве стандарта использовали 2 мкМ раствор данс ил-фенала в хлороформе. Активность фермента определяли как разность прироста флюоресценции в пробах, не содержащих и содержащих ингибитор, и выражали в нмоль продукт а, образовавшегося за 1 минуту инкубации в пересчете на 1 мг белка. Полученные результаты обрабатывали статистически с использованием t_к ритерия Стьюдента. Результаты и их обсуждение Введении атропина в дозе 2,5 мг/кг вызывало снижение активности КПН в гипоф изе через 0,5 и 4 ч после инъекции (рис. 1). В обонятельном мозге активность исс ледуемого фермента снижалась через 24 ч на 55% и оставалась сниженной спуст я 72 ч после введения (на 13%). В четверохолмии обнаружено снижение активност и КПН через 0,5, 24 и 72 ч, при этом максимальное снижение активности фермента (н а 55%) наблюдается через 72 ч после инъекции. В продолговатом мозге активност ь КПН была снижена через 4 и 72 ч на 45-50%, тогда как через 0,5 и 24 ч не отличалась от к онтрольной группы. Введение атропина вызывало снижение активности исс ледуемого фермента в гипоталамусе во всех исследуемых промежутках вре мени на 35-40%. В гиппокампе и стриатуме активность КПН через 0,5 ч снижалась на 30-40%, через 4 ч на 40-45% и через 72 ч примерно на 30%. В надпочечниках достоверное изме нение активности отмечено только через 72 ч после введения атропина: сниж ение на 60% по отношению к контролю. Таким образом, введение атропина в дозе 2,5 мг/кг вызывает длительное, сохр аняющееся по крайней мере 72 ч снижение активности КПН во всех отделах моз га и надпочечниках крыс. Результаты исследования влияния атропина (2,5 мг/кг) на активность фенилме тилсульфонилфторид-ингибируемой карбоксипептидазы в отделах мозга и н адпочечниках крыс представлены на рис. 2. В гипофизе наблюдалось снижени е активности ФМСФ-КП через 0,5 ч на 70%, а через 4 ч на 95% по сравнению с контрольно й группой. В надпочечниках снижение активности исследуемого фермента н аблюдалось спустя те же промежутки времени: через 0,5 ч на 35% и на 70% по прошест вии 4 ч. В обонятельном мозге активность ФМСФ-КП снижалась по сравнению с контрольными животными на 35% через 4 и 24 ч. В четверохолмии и стриатуме акти вность исследуемой карбоксипептидазы через 4 ч была на 30-35% ниже, чем у конт рольной группы. Атропин не оказывал влияния на активность ФМСФ_КП в прод олговатом мозге на протяжении всего времени исследования. В гипоталаму се активность фермента снижалась только через 72 ч после инъекции. В гиппо кампе активность ФМСФ-КП снижалась в два раза относительно контроля чер ез 0,5 и 24 ч. Таким образом, введение атропина в дозе 2,5 мг/кг вызывало снижение активно сти ФМСФ-КП во всех отделах мозга и надпочечниках крыс, кроме продолгова того мозга. Несмотря на общую тенденцию снижения активности исследуемых ферментов в мозге и надпочечниках при введении атропина, имеют место и некоторые р азличия в степени снижения активности карбоксипептидазо-В-подобных фе рментов. Так, наиболее существенное снижение активности в гипофизе при д ействии атропина наблюдалось для ФМСФ-КП - на 75% через 0,5 ч после инъекции и н а 95% через 4 ч после введения, в то время как для КПН отмечено снижение актив ности лишь на 30%. Гипофиз является отделом, синтезирующим и / или секретиру ющим большой спектр регуляторных пептидов [10, 11]. По-видимому, КПН принадлеж ит преобладающая роль в процессинге большинства пептидов - тропных горм онов, окситоцина, вазопрессина, атриального натрийуретического пептид а, вещества Р и др. [10, 11]. ФМСФ-КП, вероятно, участвует в процессинге опиоидных пептидов, синтезирующихся в гипофизе - энкефалинов и ?-эндорфина - уровень которых по данным других авторов [5, 7] значительно снижается при введении атропина. Снижение активности ФМСФ-КП в наших опытах при введении атропи на может свидетельствовать о вовлечении данного фермента преимуществе нно в обмен энкефалинов. Обращает на себя внимание тот факт, что в надпочечниках наиболее существ енное снижение активности отмечено для ФМСФ-КП, в то время как для гипота ламуса и стриатума наиболее выраженные изменения активности наблюдали сь для КПН. Вероятно, снижение активности ферментов процессинга регулят орных пептидов может быть одним из механизмов снижения уровня энкефали нов и ?-эндорфина при введении атропина [5, 7, 13, 14]. Учитывая преимущественную л окализацию ФМСФ-КП в надпочечниках можно предположить, что именно здесь данный фермент участвует в генезе регуляторных пептидов, в то время как в стриатуме эта роль принадлежит КПН. В гипоталамусе синтез и секреция б иологически активных пептидов этого отдела (аргинин-вазопрессин, оксит оцин и др.) также подвержена влиянию холинергической системы [13, 14]. Значите льное снижение активности КПН, участвующей в образовании активных форм этих пептидов из предшественников [9, 10], по всей видимости, обеспечивает сн ижение уровня аргинин-вазопрессина и окситоцина атропином [7]. Таким образом, ФМСФ-КП, как и КПН, вероятно, принадлежит важная роль в регу ляции уровня активных форм нейропептидов при введении атропина. При это м КПН и ФМСФ-КП, по-видимому, участвуют в процессинге не только разных биол огических пептидов, но и вовлекаются в процессинг одних и тех же нейропе птидов в разных отделах нервной системы. Список литературы 1. Судаков С.К. // Успехи совр. биол. 1988. 105 ., №1. С . 100 - 106. 2. Laubie M., Schmitt H. // J. Pharmacol. 1985. 16 ., №2. P. 69 - 94. 3. Charpali S. at al. // Brain Res. 1988. 450 ., №1 - 2. P. 124 - 130. 4. Caulfield M. P, Nigel J.M. // Pharm. Reviews. - 1998. - 50. №2. - P. 279-290. 5. Громов Л.А., Лохвицкая К.Н. // Фармакология и токсикология. - К.: Здоров'я, 1971. Т. 6. - С. 24-26. 6. Елаев Н.Р., Иванова А.И., Крылов С.С. // Докл. АН СССР. - 1973. - 213, №5. - С. 1201-1202. 7. Крылов С.С., Ливанов Г.А., Петров А.Н., Семенов Е.В., Спринц А.М., Бучко В.М. Клини ческая токсикология лекарственных средств. Холинотроп-ные препараты. С анкт-Петербург.: Лань, 1999. 160 с. 8. Громов Л.А., Жила В.А. // Укр. биохим. журн. 1986. 58 ., №6. С . 61 - 63. 9. Beinfeld M.C. // Endocrine. 1998. 8 ., №1. P. 1 - 5. 10. Вернигора А.Н., Генгин М.Т. // Укр. биохим. журн. 1998. 70 ., №2. С . 3 - 4. 11. Fricker L.D., Snyder S.H. // J. Biol. Chem. - 1983. - 258, №18. - P. 10950-10955. 12. Lowry O.H., Rosebrought N.J., Farr A.G., Randall R.J. // J. Biol. Chem. - 1951. - V. 193, №1. - P. 265-275. 13. Andersson K., Eneroth P., Fuxe K., Harfstrand A. // Naunyn Schmiedebergs Arch. Pharmacol. - 1998. - 337, №2. - P. 131-139. 14. Pitk д nen A., Beal M.F., Sirvi ц J., Swartz K.J., M д nnist ц P.T., Riekkinen P.J. // Neuropeptides. - 1989. - 14. - P. 197-207. Effect of single atropine administration on the carboxypeptidase h and phenylmethylsulphonilfluoride-inhibited carboxypeptidase activities in rat brain departments and sdrenal The effect of a single atropine administration on the activities of carboxypeptidase H and phenylmethylsulphonilfluoride-inhibited ca rboxypeptidase part in the final stage of formation of biologically active neuropeptides from precursors was studied. Changes in the enzymes' activities after administration were evident during at least 72 h. The results suggest that one of possible mecha nisms of reduction of neuropeptide levels by atropine is suppression of activity of enzymes taking part in there metabolism - carboxypeptidase H and phenylmethylsulphonilfluoride-inhibited carboxypeptidase.
1Архитектура и строительство
2Астрономия, авиация, космонавтика
 
3Безопасность жизнедеятельности
4Биология
 
5Военная кафедра, гражданская оборона
 
6География, экономическая география
7Геология и геодезия
8Государственное регулирование и налоги
 
9Естествознание
 
10Журналистика
 
11Законодательство и право
12Адвокатура
13Административное право
14Арбитражное процессуальное право
15Банковское право
16Государство и право
17Гражданское право и процесс
18Жилищное право
19Законодательство зарубежных стран
20Земельное право
21Конституционное право
22Конституционное право зарубежных стран
23Международное право
24Муниципальное право
25Налоговое право
26Римское право
27Семейное право
28Таможенное право
29Трудовое право
30Уголовное право и процесс
31Финансовое право
32Хозяйственное право
33Экологическое право
34Юриспруденция
 
35Иностранные языки
36Информатика, информационные технологии
37Базы данных
38Компьютерные сети
39Программирование
40Искусство и культура
41Краеведение
42Культурология
43Музыка
44История
45Биографии
46Историческая личность
47Литература
 
48Маркетинг и реклама
49Математика
50Медицина и здоровье
51Менеджмент
52Антикризисное управление
53Делопроизводство и документооборот
54Логистика
 
55Педагогика
56Политология
57Правоохранительные органы
58Криминалистика и криминология
59Прочее
60Психология
61Юридическая психология
 
62Радиоэлектроника
63Религия
 
64Сельское хозяйство и землепользование
65Социология
66Страхование
 
67Технологии
68Материаловедение
69Машиностроение
70Металлургия
71Транспорт
72Туризм
 
73Физика
74Физкультура и спорт
75Философия
 
76Химия
 
77Экология, охрана природы
78Экономика и финансы
79Анализ хозяйственной деятельности
80Банковское дело и кредитование
81Биржевое дело
82Бухгалтерский учет и аудит
83История экономических учений
84Международные отношения
85Предпринимательство, бизнес, микроэкономика
86Финансы
87Ценные бумаги и фондовый рынок
88Экономика предприятия
89Экономико-математическое моделирование
90Экономическая теория

 Анекдоты - это почти как рефераты, только короткие и смешные Следующий
У всех женщин только одно на уме: будто у всех мужчин только одно на уме.
Anekdot.ru

Узнайте стоимость курсовой, диплома, реферата на заказ.

Обратите внимание, реферат по медицине и здоровью "Влияние атропина на активность карбоксипептидазы H", также как и все другие рефераты, курсовые, дипломные и другие работы вы можете скачать бесплатно.

Смотрите также:


Банк рефератов - РефератБанк.ру
© РефератБанк, 2002 - 2016
Рейтинг@Mail.ru