Курсовая: Ассоциации иммуногенетической системы HLA с развитием туберкулеза - текст курсовой. Скачать бесплатно.
Банк рефератов, курсовых и дипломных работ. Много и бесплатно. # | Правила оформления работ | Добавить в избранное
 
 
   
Меню Меню Меню Меню Меню
   
Napishem.com Napishem.com Napishem.com

Курсовая

Ассоциации иммуногенетической системы HLA с развитием туберкулеза

Банк рефератов / Медицина и здоровье

Рубрики  Рубрики реферат банка

закрыть
Категория: Курсовая работа
Язык курсовой: Русский
Дата добавления:   
 
Скачать
Архив Zip, 46 kb, скачать бесплатно
Заказать
Узнать стоимость написания уникальной курсовой работы

Узнайте стоимость написания уникальной работы

Федеральное агентств о по образованию РФ Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Курсовая работа по иммунологии на ТЕМУ: "Ассоциации иммуногенетической системы HLA с развитием туберкулё за" Челябинск 2006 СОДЕРЖАНИЕ Введение Глава 1. Физиологическая роль главного комплекса гистосовместимости че ловека Глава 2. Ассоциация туберкулёза с различными генетическими факторами Глава 3. Персистентные бактериальные инфекции: интерфейс патогена и имму нная система хозяина 3.1 Персистентные микобактериальные инфекции 3.2 Выживание микобактерий 3.3 Выживание внутри макрофагов 3.4 Иммунный ответ на персистирующие микобактерии Глава 4. CD-1 и CD-1-рестриктированные Т-клетки при инфекциях, вызванных внутрик леточными бактериями 4.1 Атигенпрезентующие молекулы 4.2 Презентация микобактериальных липидов группой I CD1 молекул 4.3 Внутриклеточная локализация CD1 молекул 4.4 Рецептор для транспорта АГ 4.5 CD1d и NКТ-клетки при инфекциях 4.6 ?GalCer специфически активирует CD1d iNКТ-клетками Глава 5. Отличительные частоты генотипа цитокинов среди канадских абори генов и кавказских популяций Глава 6. Ассоциация туберкулёза со специфичностями гена HLA-DR-B1 в различных р егионах Тувы Глава 7. Распределение антигенов комплекса HLA у больных туберкулёзом и здо ровых лиц в татарской популяции Заключение Приложения Список литературы ВВЕДЕНИЕ Туберкулез является проблемой мирового масштаба. По данным ВОЗ, одна тре ть населения мира инфицирована Mycobacterium tuberculosis. В 1998 году было зарегистрировано 8 м лн. новых случаев клинического туберкулеза и 1,9 млн. смертей от заболевани я. Ожидается, что к 2010 году в мире будет около 1 млрд. вновь инфицированных, бо лее 200 млн. заболевших, а 70 млн. - умрет от туберкулеза. В России ежегодно инфи цируется около 9 тыс. детей (что на порядок выше, чем в других развитых стра нах), а число больных в 1997 г. по сравнению с 1991 г. возросло в 2,5 раза. Следует отметить, что не все индивиды после контакта с M. tuberculosis становятся ин фицированными. Клинические признаки туберкулеза проявляются только у 10 % инфицированных. В настоящее время стало понятно, что развитие инфекци и M. tuberculosis и клинический туберкулез обусловлено сложным взаимодействием ме жду биологическими свойствами самого инфекционного агента, средовыми факторами и физиологической индивидуальностью человека. У большинства людей сразу же после инфекции M. tuberculosis развивается эффективн ый иммунный ответ, ограничивающий распространение агента. Менее 10 % инфиц ированных, у которых развивается заболевание, имеют идентифицируемые ф акторы риска, такие как диабет, СПИД, пожилой возраст. У остальных заболев ших развитие туберкулеза, по-видимому, обусловлено комплексных взаимод ействием генетических и средовых факторов. Для каждой популяции мира были обнаружены свои особенности в частотах а нтигенов HLA и характерные для данной популяции ассоциации с восприимчив остью (или резистентностью) к туберкулёзу лёгких. Поэтому задачей моей к урсовой было исследование источников литературы по данной теме и сравн ение результатов, полученных в разных опытах. Глава 1. Физиологическая роль главного комплекса гистосовместимости ч еловека Регуляция иммунного ответа является одной из основных физиологических функций организма. Эта функция принадлежит генам главного комплекса ги стосовместимости человека. При этом следует принять во внимание, что сам о это название отражает скорее историю открытия данной генетической си стемы, чем ее основную функцию. Дело в том, что история открытия первых про дуктов генов главного комплекса гистосовместимости человека, называем ых антигенами HLA (от Human leucocyte antigens), связана именно с появлением и развитием транс плантационной иммунологии, когда возникла необходимость подбора ткане совместимых пар донор и реципиент. Сегодня же мы знаем, что роль системы HLA в отторжении трансплантата является лишь одной из частных физиологиче ских функций этой системы, а основная же ее функция -- это регуляция иммунн ого ответа. В 80-x голах даже дискутировался вопрос о переименовании систем ы HLА в главный комплекс генов иммунного ответа человека, но учитывая, что старое историческое название давно укоренилось среди иcследователей, р ешено было не менять его. По современным представлениям система HLA. обеспечивая регуляцию иммунно го ответа, осуществляет такие важнейшие физиологические функций, как вз аимодействие всех иммунокомпетентных клеток организма, распознавание своих и чужеродных, в том числе измененных собственных, клеток, запуск и р еализацию иммунного ответа и в целом обеспечивает выживание человека к ак вида в условиях экзогенной и эндогенной агрессии [19]. Все многообразие указанных функций обеспечивается строением главного комплекса гистосовместимости. Система HLA, открытая более 40 лет назад, по-прежнему остается одной из самых сложных, наиболее хорошо изученных и вместе с тем загадочных генетическ их структур в геноме человека. Представления о строении системы HLA развивались и развиваются в течение всего периода ее изучения, однако, за последние годы произошел качествен ный скачок в развитии этой проблемы. Раньше, когда основным объектом исс ледовании могли служить только белки -- антигены HLA, представления о компл ексе генов HLA могли формироваться в основном на анализе косвенных данных, включающих изучение антигенов HLA в популяциях, в семейном анализе, реакци ях, субстратом которых были антигены HLA, и т. д. Теперь благодаря развитию мо лекулярной генетики и иммунохимии появилась возможность не только про водить тонкий анализ антигенов HLA, но и изучить сами гены HLА. Прежде чем перейти к непосредственному описанию строении генов HLA, следу ет отметить, что внедрение в исследования системы HLA молекулярно-генетич еских методов не только позволило конкретизировать представления о си стеме HLA, но и значительно расширило представления о ее полиморфизме, при этом были открыты многие новые аллели классов I, II и III, и общее количество то лько известных специфичностей HLA классов I и II увеличилось более чем в 6 раз. Аллельные варианты HLA классов I и II входят в несколько генетических локусо в, Так, в классе I имеется 3 локуса HLA: А, В и С. Также к антигенам HLA класса относят ся гены локуса MIC - МНС class I chain-related genes (MIC-A и MIC-B). Антигены MIC обладают способностью связ ывать пептиды и другие короткие лиганды. В настоящее время неясно, являю тся ли MIС-антигены более древними либо, напротив, происходят от типичных а нтигенов класса I. В последнее время обнаружено, что антигены MIC-A участвуют в активации взаи модействия ТсR-молекулы МНС в развитии T-клеточно-опосредованной цитоток сичиости и активности НК-клеток, тем самым, в частности, играя роль в обесп ечении противоракового иммунитета. В классе II основными локусами HLА являются DR, DQ и DP, а также открытые в более по зднее время DM, LMP и ТАР. Три последних локуса обеспечивают такие важнейшие ф ункции, как процессииг и экспрессия антигенов HLA на поверхности клеток. Кл асс III включает в себя гены, кодирующие факторы комплемента, фактор некроз а опухолей и некоторые другие. Физиологическая функция аллелей и кодируемых ими антигенов HLA, относящи хся к различным классам HLA, в значительной степени различается. Так, антиг ены HLA классов I и II принимают участие во взаимодействии между иммунокомпе тентными клетками в процессе иммунного ответа. Но антигенам класса I при надлежит также и физиологическая функция обеспечения взаимодействия м ежду всеми другими ядросодержащими клетками организма, вплоть до взаим одействия нейрон-синапс. Тем самым с помощью системы HLA обеспечивается це лостное функционирование не только иммунной системы человека, но и орга низма в целом [19]. Что касается обеспечения развития самого иммунного ответа, то роль анти генов системы HLA здесь первостепенна. Дело в том, что именно молекулы анти генов HLA обеспечивают презентацию, т. е. представление иммунодоминантных пептидов, являющихся продуктом внутриклеточного протеолиза чужеродны х антигенов, против которых и будет индуцирован, а затем и разовьётся имм унный ответ. Этой функции антигенов системы НLA способствует само строен ие ее молекул, которое, несмотря на выраженное различие в структуре моле кулы антигенов HLA классов I и II, позволяет образовать на внешнем ее конце та к называемую пептидсвязывающую бороздку, в которой и удерживается пред ставляемый для распознавания пептид. Общим для антигенов классов I и II является следующее. Антиген представляю щая клетка осуществляет свое специфическое взаимодействие, представля я пептид в контексте собственной HLA-молекулы, идентичной таковой на клетк е, воспринимающей информацию. Именно за открытие этого феномена, названн ого феноменом двойного распознавания, Цинкернагель и Догерти получили Нобелевскую премию. Действительно, этот феномен явился ключевым момент ом и понимании основ физиологической регуляции иммунного ответа. Антиг ены HLA класса II обеспечивают взаимодействие антигенпрезентирующей клет ки с Т-хелпером, а антигены HLА класса I - с Т-эффектором/киллером. Помогают им в этом различные молекулы корецепторы -- CD4 для Т-хелперов и CD8 для Т-киллеров . Естественно, что различным явится и эффект этого взаимодействия. Так, ра спознавание пептидов в контексте молекулы HLA класса II ведет к формировани ю популяции Тх 1 и Тх 2 -клеток, одни из которых индуцируют развитие гумо рального иммунного ответа, а другие, явятся необходимым компонентом в ин дукции Т-киллеров. Что же касается антигенов гистосовместимости класса I, то Т-киллер, индуцированный против иммунодоминантного пептида, экспре ссированного на поверхности клеток-мишеней в контексте антигенов HLA кла сса I, идентичного таковым, экспрессированным на Т-киллере, уничтожит их. Молекулы МНС класса I синтезируются в цитозоле клетки, где до появления с оответствующего пептида находятся в связи с так называемым тирозин-кал ретикулиновым комплексом (рис. 1). После связывания с пептидом происходят высвобождение и транспорт молекул HLA на поверхность клеток с участием ко дируемых МНС "пептидных насосов" ТАР (от транспортеров, ассоциированных с антигенным процессингом). В 1993 г было показано, что гетеродимеры TAPI и ТАР2 участвуют в окончательной сб орке молекул антигенов класса I и презентации ими эндогенных пептидов. М олекулы, кодируемые геном TAP2, находятся в неравновесном сцеплении с антиг енами HLA-DR и между генами ТАР1 и ТАР2 имеется высокая частота рекомбинаций. У становлено, что некоторые мутации в районе генов HLA-TAP ведут к потере презен тирующей функции антигенов гистосовместимости класса I. Вполне возможн о, что с нарушением антигенпрезентирующей функции TАР может быть связан высокий уровень ассоциации между аллелями гена ТАР1 и предрасположенно стью к развитию такого аутоиммунного заболевания, как инсулинзависимы й сахарный диабет. В го же время имеется исследование о том, что один из ал лелей ТАР 1-локуса, а именно R659Q, для которого характерен дефект транскрипци и РНК, выявляется на клетках мелкоклеточного рака легких. Наконец, имеют ся данные о том, что при синдроме Луи-Бар, характеризующемся наличием "гол ых Т-лимфоцитов", нарушение экспрессии антигенов НLA класса I связано именн о с гомозиготным состоянием аллелей гена ТАР2. В отличие от молекулы класса I обе цепи молекулы МНС класса II синтезируютс я в эндоплазматическом ретикулуме, откуда после их временного соединен ия с третьей инвариантной цепью они транспортируются в эндоцитарный ко мпартмент, где они или встречаются и затем связываются с пептидом, или же ( если этого не произошло) деградируют в лизосомах (рис. 1). После связи с пепт идом, заменяющим инвариантную цепь, молекулы МНС класса II переходят на кл еточную мембрану. Вытеснение пептидом инвариантной цепи молекул HLA клас са II обеспечивают белки, кодируемые также системой HLA и названные HLA-DM. Эти бе лки катализируют замену "временного" пептида инвариантной цепи на специ фический пептид. Как указывалось выше, в целом связь между молекулами HLA и пептидами имеет много общего для антигенов HLA классов I и II. Однако и здесь имеются серьёзны е отличия. Так пептид удерживается в связывающей складке молекулы HLA класса I как за счет связи его N- и С-концов с определенным мотивом "аллель-специфического " участка МНС, так и за счет связи боковых цепей пептида с боковыми кармана ми молекулы МНС. Длины пептидов, связывающихся с молекулой HLA класса I, -- 8--10 ам инокислот. Пептиды, связывающиеся с молекулой HLA класса II, более гетерогенны - 9--25 амино кислот. Списывающая бороздка молекул HLА класса II в отличие от класса I "откр ыта" для связывания с двух сторон, что создает возможность большего поли морфизма в связях HLA + пептид. Более того, в молекуле класса II зоны связывани я могут выходить даже за связывающую складку. Все это дает возможность "а ккомодации" более широкого спектра пептидов к молекулам HLA класса II по сра внению с таковыми класса I. Переход исследований HLA на молекулярно-генетический уровень позволил по -новому взглянуть на физиологическую функцию системы HLA. Так, молекулы МНС приобретают стабильную форму и соответствующую трехмерную конфигурац ию только после того, как в связывающий сайт ее складки встраивается пеп тид. Только после этого молекула МНС способна мигрировать на поверхност ь клетки, где она готова выполнить свои функции. Удаление пептида из пепт идсвязывающей структуры МНС, экспрессированной на клеточной мембране, нарушает ее трехмерную конфигурацию, лишая возможности функционироват ь, и ведет к распаду. Комплекс МНС + пептид является чрезвычайно стабильны м, очищается и кристаллизируется в единой структуре. Этот комплекс остае тся на поверхности клетки в течение нескольких недель, что позволяет мно гим "проходящим" Т-клеткам сканировать представляемый собственной моле кулой МНС пептид. Наконец, каждый пептид связывается (и удерживается в ск ладке) с инвариантным участком, характерным для каждого из аллелей молек улы МНС и имеющим определенный мотив аминокислотных остатков, участвую щий и таком связывании. Таким образом, в связь с конкретным пептидом вовл екаются конкретные же участки антигенов -- аллельные варианты молекул МН С, что по сути и является основой генетического контроля иммунного ответ а. Имеющаяся в настоящее время возможность анализировать аминокислотные последовательности всех аллельных вариантов антигенов HLA, включая участ ки, определяющие их специфичность, а также структуру пептидов, определяю щих специфичность различных чужеродных агентов, включая болезнетворны е, позволяет заранее предсказать соответствие тех или иных иммунодомин антных пептидов тем или иным участкам молекулы МНС. Таким образом, можно заранее предсказать генетический ответ или его отсутствие на тот или ин ой агент. В свою очередь это даст возможность не только заранее решить вопрос о то м, ответит ли данный индивидуум на вакцинацию против того или иного боле знетворного агента, но и предсказать, насколько этот ответ будет физиоло гичен, а, следовательно, позволит прогнозировать возможность развития р яда заболеваний аутоиммунного генеза (например, ревматоидный артрит и и нсулинзависимый сахарный диабет), в генезе которых, возможно, лежит такж е комплементарность иммунодоминантных пептидов инфекционных агентов конкретным эпитопам аллелей НLА. Экстремальный аллельный полиморфизм системы HLA является "мощным механиз мом вариабельности и естественного отбора" человека как вида и позволяе т ему противостоять постоянно эволюционирующему множеству патогенов. Доказательством этому в историческом плане может служить почти полное вымирание целых народов (в частности, американских индейцев в период отк рытия Америки), обладающих - как мы точно теперь знаем - весьма низким по ср авнению с другими этническими группами полиморфизмом системы HLA. В последние годы стадо известно, что полиморфизм системы HLA. помимо ранее установленного межрасового и межэтнического различия, имеет также и вн утриэтнические различия. Следует отметить, что молекулярно-генетическ ий уровень генотипирования позволяет сегодня вплотную приблизиться к пониманию генетически обусловленной физиологической резистентности человека к определенным заболеваниям на популяционном уровне. Генам главного комплекса гистосовместимости, помимо вышеописанной физ иологической функции генетического контроля специфического иммунног о ответа, принадлежит ещё ряд важнейших физиологических функций. Описан ию одной из них (генетическому контролю качества иммунного ответа) была посвящена работа, недавно опубликованная в Российском физиологическом журнале им. И. М Сеченова. Речь идет об ассоциированном с системой HLA контро ле активности различных субпопуляций иммунокомпетентных клеток, что и свою очередь существенным образом сказывается на конечном уровне, т е. н а качестве иммунного ответа человека. При этом, естественно, следует пом нить, что эта функция является "вторичной" и реализуется только в случае, е сли организм человека генетически способен отвечать на данный агент. Пр едпосылкой развития данного направления можно считать предположение, выдвинутое W. Bodmer и J. Bodmer еще в 1978 г. о том, что на формирование HLA-профиля европеоид ной популяции в значительной степени оказали влияние имевшие место в ср едние века эпидемии таких заболеваний, как чума, оспа, холера и т д. В резул ьтате этого среди выживших оказался значительный процент людей с опред еленными HLA-генотипами, в первую очередь с генотипом HLA-A1 В8 DR3 [10]. Этот генотип, к ак предположил W. Bodmer, обеспечивает более высокую резистентность к инфекци онным заболеваниям и является на сегодняшний день генетическим маркер ом европеоидной популяции. Следует отметить, что это предположение было подтверждено на примере недавних вспышек брюшного тифа в Суринаме, когд а среди выживших европеоидов значительный процент составили лица с гап лотипом HLA-A1 В8 DR3. Одновременно с этим W. Bodmer высказал справедливое предположен ие, что реализации этого эффекта могла быть связана только с ассоциациям и между конкретными HLA-спецнфичностями и HLA-гаплотипами и иммунным ответо м. Учитывая тот факт, что с одними и теми же гаплотипами HLA оказалась связан а устойчивость к самым различным инфекционным агентам, логично было пре дположить, что подобного рода ассоциация с HLA может быть связана не только с самой генетически обусловленной отвечаемостью к конкретному инфекц ионному агенту, но и с теми звеньями иммунного ответа, которые принимают участие в его реализации, т. е. в конечном эффекте. Именно это в настоящее в ремя и подразумевается под качеством иммунного ответа. К настоящему времени достаточно хорошо известно, что между отдельными HLA- специфичностями и HLA-гаплотипами существуют положительные и отрицатель ные ассоциации с теми или иными показателями иммунного статуса, как то к оличество и функциональная активность клеток CD4 + CD8 + , ЕКК, фагоцити рующей функции нейтрофилов и т. д. Следует, однако, отметить, что абсолютно е число работ в этом направлении ранее выполнялось при изучении кавказо идной популяции. В последние годы удалось показать, что ассоциированные с HLA показатели им мунного статуса могут различаться а разных этнических группах. Примеро м этого может быть исследование ассоциаций между отдельными параметра ми иммунного статуса и HLA-специфичностями в двух этнических группах -- рус ские (кавказоиды), буряты (ориенты). Следует отметить, что исследование данной физиологической функции сис темы НLA, несмотря на то что оно стало развиваться относительно недавно, яв ляется весьма перспективным как в фундаментальном аспекте -- в плане уст ановления молекулярных механизмов указанных ассоциаций, так и в практи ческом, поскольку это направление имеет значение в плане прогноза возмо жности неблагоприятных воздействий (в том числе техногенных) окружающе й среды на представителен различных этнических групп [19]. Глава 2. Ассоциация туберкулёза с различными генетическими факторами Туберкулез вызывается микобактериями туберкулеза, медленно растущими кислотоустойчивыми бациллами. Воскоподобная клеточная стенка микобак терий, которая состоит из нескольких гликолипидов, таких как липоарбино маннан и фосфоинозитолманнозид и длинной цепочки жирных кислот (50-80 атомо в углерода) ответственны за медленный рост, кислотоустойчивость, устойч ивость ко многим обычным антибиотикам и дезинфектантам. Отдельные виру лентные факторы не были описаны, но это может измениться, так как недавно был расшифрован геном микобактерий туберкулеза. Вдобавок, усилия должн ы быть направлены на определение функциональной нагрузки генома и белк ов Mycobacterium tuberculosis. Это связано с тем, что срочно необходима вакцина лучшая, чем ВЦ Ж с её низкой эффективностью. Данная вакцина должна достигнуть сильного цитотоксического и воспалительного Т-клеточного ответа для уничтожени я туберкулезных бацилл. Понимание важной роли генетических факторов в развитии туберкулеза пр ишло в первую очередь из эпидемиологических и близнецовых исследовани й. Так, в нескольких работах было показано, что степень устойчивости к M. tuberculosis у человека коррелируется с регионом его происхождения - предки боле е предрасположенных к заболеванию индивидов чаще всего происходил из о бластей, где туберкулез не распространен. Кроме того, частота клиническо го туберкулеза особенно высока во время эпидемий в популяциях, ранее не встречавшихся с данной инфекцией, в частности, у американских и канадски х индейцев. Опубликованы исследования генов, ответственных за предрасположенност ь к туберкулезу у человека. Так, у жителей Камбоджи была показана ассоциа ция аллеля HLA-DQB1*0503 II с заболеванием. Во многих популяциях предрасположеннос ть к проказе ассоциирована с HLA-DQB2. С проказой ассоциирован также полиморфи зм в области промотора гена TNFA. Показано, что с туберкулезом связаны три точечные замены в гене белка, св язывающего маннозу (MBL). Причем частота этих вариантов была достаточно выс ока как у европеоидов, так и у африканцев и австралийских аборигенов. В последнее время получены доказательства связи туберкулеза с полимор физмом гена рецептора к витамину D (VDR). Показаны ассоциации с туберкулезом полиморфизма генов, кодирующих интерлейкин-1? (ILIB) и его рецепторный антаго нист (ILIRA). Ведутся исследования также и других генов, рассматриваемых как к андидаты на роль генов предрасположенности к туберкулезу, исходя из их ф ункции (NOS2, TLR, NAT2, GST) [1]. Вместе с тем существуют четкие причинно-следственные отношения между р едкими менделирующими иммунодефицитами по Т-клеткам или фагоцитам и тя желыми формами туберкулеза. Пациенты с такими заболеваниями в значител ьной степени чувствительны к инфекции не только M. Tuberculosis, но и другими микроо рганизмами. На основании имеющихся на сегодняшний день данных сформулировано пред расположение о непрерывном спектре генетического контроля предраспол оженности к туберкулезу у человека: моногенные формы - варианты с эффект ом главного гена (олигогенные формы) - полигенная подверженность. Прогре сс в молекулярно-генетических исследованиях предрасположенности к заб олеванию будет, вероятно, возможен только при комплексном анализе. Возмо жно, на всех уровнях генетического контроля участвует один ген, имеющий редкие мутации, ответственные за менделирующие тяжелые фенотипы, относ ительно редкие варианты, обусловливающие основной эффект, и распростра ненные в популяциях полиморфизмы, в умеренной степени определяющие рис к развития заболевания [8]. Поиск такого гена (генов) - на сегодняшний день актуальная задача. Кроме то го, важным представляется изучение функционального полиморфизма извес тных генов-кандидатов туберкулеза в популяциях различного этнического состава с разной частотой заболевания. Глава 3. Персистентные бактериальные инфекции: интерфейс патогена и им мунная система хозяина Персистентные бактериальные инфекции включают в себя M. tuberculosis, Salmonella enterica и др., ко торые являются значительной проблемой для здоровья населения. Увеличи вается количество лекарственно-устойчивых штаммов M. tuberculosis и S. typhi. M. tuberculosis и S. typhi вы зывают заболевания, часто ассоциированные с HIV инфекцией. Когда патогенный микроорганизм впервые инфицирует своего хозяина, обы чно происходит драматическая активация врожденного и адаптивного имму нного ответов, что приводит к проявлению симптомов болезней. Адаптивная иммунная система хозяина обычно очищает организм от внедрившегося пат огенна. Хотя некоторые патогенные бактерии способны поддерживать инфе кционный процесс у млекопитающих даже при развитии воспаления, специфи ческих антимикробных механизмов и сильного адаптивного иммунного отве та; в дальнейшем развивается персистентная инфекция. Микобактерии тубе ркулеза вызывают длительную инфекцию и могут служить причиной острых и ли хронических заболеваний; они также могут бессмысленно персистирова ть и реактивироваться в дальнейшем [3]. Персистентная колонизация бактериями происходит без видимых клиничес ких проявлений. Хотя даже при отсутствии клинических симптомов инфекци я несет некоторый риск для хозяина. Индивиды, зараженные микобактериями туберкулеза, рискуют при реактивации патогенна заразиться активной фо рмой туберкулеза, которая опасна для жизни. Длительная персистенция бак терий в привилегированной нише хозяина - макрофагальной вакуоли - вызыва ет несколько фундаментальных биологических вопросов. Например, каков р епликативный и метаболический статус бактерии во время бессимптомной персистенции, и как им так долго удается избежать действия иммунного отв ета хозяина. Сейчас начинают понимать бактериальные и факторы хозяина, к оторые вовлечены во взаимодействие патоген-хозяин в течение персистир ующей инфекции. Возможность вызывать персистирующие инфекции - фундаментальный аспект взаимодействия между многими различными вирусными, бактериальными па тогенами и их хозяином-млекопитающим. 3.1 Персистентные микобактериальные инфекции Патогенные микобактерии вызывают некоторые длительные инфекционные з аболевания у их хозяев. M. Tuberculosis вызывают туберкулез, одно из самых древних и звестных человеческих заболеваний, этими бактериями по различным оцен кам инфицирована треть населения Земли. Первоначальное заражение мико бактериями ведет к репликации инициального сайта инфекции в легких. Это сопровождается бацилемией, во время которой наибольшее число бактерий рассеиваются в нелегочных органах - региональных лимфатических узлах. М игрируют M. Tuberculosis внутри ДК. Адаптивный иммунный ответ и ограничение бактер иального роста происходит после их диссеминации, чему способствует дос тавка бактерий в лимфоидные органы. У многих инфекционный процесс закан чивается после инициации адаптивного иммунного ответа. Хотя у некоторы х организм никогда полностью не очищается от патогена. При персистентно м заражении люди могут стать носителями на многие годы и даже в течение в сей жизни. Существует риск, что бессимптомная инфекция перейдет в высоко контагиозный, клинически активный и потенциально опасный для жизни бол езненный статус, известный как реактивация туберкулеза. Риск перехода в клинически активную форму очень велик после инициации инфекции, часто э то происходит у иммунологически компромиссных индивидов (новорожденны х, людей старческого возраста и инфицированных ВИЧ). 3.2 Выживание микобактерий Персистирующие микобактерии находятся в гранулемах. Хотя точная локал изация живых патентных микобактерий во время персистирования остается спорной. Бактерии часто находят в макрофагах внутри гранулем, которые ф ормируются в ответ на персистенцию внутриклеточных патогенов (рис. 2). Туб еркулезные гранулемы человека и мышей состоят из организованной колле кции макрофагов, Т-лимфоцитов, некоторых В-лимфоцитов, дендритных клеток , фибробластов. Считается, что гранулемы начинаются с агрегацией мононук леарных фагоцитов, которые окружают индивидуальные инфицированные мак рофаги. Данные макрофаги становятся активированными и в некоторых случ аях макрофаги сливаются в гигантские клетки, которые также формируются в ответ на другие персистирующие инфекции, в частности, вирусные. Т-лимфо циты и другие иммунные клетки также участвуют в процессе образования гр анулемы. Развивающееся поражение закрывается окружающими эпителиальн ыми тканями, которые имеют плотные интердигитированные клеточные мемб раны, формирующие оболочку, похожую на молнию и соединяющую соседние кле тки. В центре гранулемы обычно находится очаг казеозного некроза - участ ок клеточных осколков. Как микобактерии выживают внутри данного пораже ния в течение многих лет? Одна из гипотез гласит, что персистентные бакте рии находятся в нерепликативной стадии или имеют низкий уровень реплик ации в центре казеозного очага. Доказательство того, что у человека перс истентные бактерии в дремлющем состоянии, в результатах культурирован ия и окрашивания пораженных тканей пациентов, подвергшихся химиотерап ии. Это, возможно, является ошибкой при культивировании. Альтернативная гипотеза того, как постоянный бактериальный груз поддерживается, состо ит в том, что существует баланс между бактериальной репликацией и действ ием иммунной системы. 3.3 Выживание внутри макрофагов Патогенные микробактерии инициируют длительную инфекцию, внедряясь в макрофаги и предотвращая нормальное созревание фагосом. Возможность м икобактерий реплицироваться и/или выживать в макрофагах играет сущест венную роль в персистенции in vivo. Это черта, с помощью которой различают пат огенные и непатогенные штаммы. Инфицированные макрофаги становятся главными резервуарами микобакте рий. Были описаны случаи распространения патогенна внутри макрофагов. М икобактерии вмешиваются в созревание фагосом, блокируя слияние образо вавшихся фагосом с эндосомами и лизосомами и изменяя мембранные протеи ны, которые в норме способствуют образованию фаголизосом. Также у патоге нных микобактерий выработался механизм, который позволяет им персисти ровать в макрофагальных фаголизосомах. Исследования показали, что внут ри гранулем лягушки ? 60 % интактных бактерий вида М.marinum, которые близки к M. tuberculosis. Уровень фаголизосомального слияния коррелирует с уровнем макрофагаль ной активации. Микобактерии имеют два механизма адаптации к интрамакро фагальному выживанию: ограничение фаголизосомального слияния или адап тация к фаголизосомальным условиям. В последних публикациях сказано, что микобактерии имеют временные и имм унно-опосредованные различия в генной экспрессии в активированных in vitro и в макрофагах, изолированных от инфицированных тканей. Последние исслед ования показали различные выживания микобактерий в типе 1 (ИЛ23-продуциру ющие) и типе 2 (ИЛ10-продуцирующие) макрофагов. Иммунный статус макрофагов и меет важную роль в персистенции микобактерий. ИФН? - критический компоне нт иммунитета при туберкулезе, он активирует инфицированные макрофаги, что приводит к ингибированию репликации микобактерий. Важность данной молекулы в контроле микобактериальных инфекций доказывается открытие м ИФН?-связанных генетических мутаций, при которых появляется предраспо ложенность к туберкулезу. ИФН? индуцирует экспрессию NO-синтетазы 2 (NOS2) и нед авно идентифицированного NOS2-независимого, 47 кДа гуанозин-3-фосфат протеин а LRG-47; оба пути важны в контроле интрацеллюлярной репликации микобактери й. Хотя часть бактерий всё равно способна выживать в макрофагах, возможн о, благодаря механизмам ингибирования STAT-1 опосредованного ИФН? транскрип ционного ответа и/или супрессии секреции ИЛ12 - провоспалительного циток ина, который способствует усилению продукции ИФН? [5]. 3.4 Иммунный ответ на персистирующие микобактерии Пока мало известно об иммунных механизмах, которые вовлечены в ответ про тив персистирующих микобактерий. В последних работах с использованием методов молекулярных отпечатков было показано повторное заражение имм уннокомпетентных людей новыми штаммами M. Tuberculosis. Это доказывает, что иммуни тет к туберкулезу может быть неполным и что повторное заражение играет н емаловажную роль. Роль адаптивного иммунного ответа при персистенции микобактерий очень важна. Есть некоторые свидетельства, что CD8 + Т-клетки секр етируют большую часть ИФН?. Во время острой фазы болезни большую часть ИФ Н? продуцирует CD4 + Т-клетки, доказывая различную активацию Т-лимфоц итов в эти фазы инфекционного процесса. В дополнение к продукции ИФН? акт ивные CD8 + Т-клетки контролируют персистентные инфекции. Продукция иммунносупрессорных цитокинов, таких ИЛ10 и ТФР?, была описана у людей с активным туберкулезом и повышение продукции ИЛ10 в легких у мышей с хронической микобактериальной инфекцией. Это свидетельствует о том, ч то ИЛ10 может способствовать реактивации хронического туберкулеза. Глава 4. CD-1 и CD-1-рестриктированные Т-клетки при инфекциях, вызванных внутр иклеточными бактериями Гликолипид-специфичные, CD-1a-, b-, c- зависимые цитотоксические Т-клетки вовлеч ены в ответ организма против туберкулеза (рис. 3). Молекулы CD-1 презентуют ми кобактериальные гликолипиды из различных внутриклеточных участков за раженной клетки. Во время микробной инфекции CD-1d-зависимые натуральные ки ллеры быстро продуцируют цитокины и выполняют регуляторную функцию [23]. Участие главного комплекса гистосовместимости (МНС) в Т-клеточном ответ е было показано на вирусных системах, но его важность в бактериальных ин фекциях и в ответе против простейших бесспорно. МНС-II-рестрикрированные CD8 + Т- клетки играют важную роль в защите организма против бактерий и простейш их, тогда как МНС-I-рестриктированные CD8 + Т-клетки важны в случаях вирусных инфе кций. Первые Т-клеточные популяции выполняют хэлперную функцию, выделяю тся цитокины для активации макрофагов и/или В-клеток, тогда как последую щие, главным образом, действуют, убивая зараженные клетки хозяина. Во вре мя некоторых бактериальных инфекций вместе с обычными CD4 + и CD8 + Т-клетками та кже есть необычные Т-клетки для содействия в достижении устойчивости: эт о Т??-лимфоциты, которые распознают фосфолипиды и Т??-лимфоциты, которые ко нтролируются неклассическими МНС и МНС-похожими молекулами. Т-клетки, ко нтролируемые CD-1 молекулами и противодействующие бактериальным гликоли пидам, также являются необычными Т-клетками. 4.1 Атигенпрезентующие молекулы В цитоплазме белки разрушаются протеазами. Образовавшиеся пептиды зат ем трансформируются в эндоплазматическом ретикулуме специальными тра нспортными молекулами так называемыми транспортерами переработанног о антигена (ТАР). В эндоплазматическом ретикулуме эти пептиды затем обре заются для упаковки в щель, сформированную первым и вторым доменом тяжел ой цепи МНС-I. После ассоциации с ? 2 микроглобулином (? 2 m), комплекс МНС -I- ? 2 m тр анспортируется на клеточную поверхность, где презентует пептиды для CD8 + Т-кл еток. Молекула МНС-II состоит из двух тяжелых цепей: ?-цепь и ?-цепь, первые дом ены обоих цепей образуют щель, в которую загружается пептид в поздних эн досомально-лизомальных отделах. Пептиды, которые презентуются молекул ами МНС-II, образуются в эндосомально-лизомальной системе под действием п ротеаз (таких как аспарагинилпептидаза, катепсины). Благодаря большому п олиморфизму молекул МНС, каждая обладает уникальным гаплотипом. Это гар антирует то, что огромное множество антигенных пептидов будет презенто вано и исключает возможность, что какой-то патоген избежит распознавани я Т-клетками. Различные антигенные пептиды выбираются разными видами МН С. В противоположность классическим молекулам МНС неклассические МНС-Ib и CD-1 не обладают полиморфизмом. Поэтому антигенные лиганды, презентуемые данными молекулами Т-клеткам, должны быть более устойчивыми [24]. До недавнего времени считалось, что Т-клетки оказывают влияние на пептид ный антиген, тогда как В-клетки могут распознавать протеины сахара, глик олипиды, нуклеиновые кислоты и другие виды антигенов. Эта теория была по двергнута сомнению, когда обнаружили, что CD-1 молекулы презентуют гликоли пидные антигены Т-клеткам (рис. 4). Есть два вида молекул CD-1 CD-1a, CD-1b CD-1c из первой гр уппы, CD-1d из второй группы. Обе группы презентуют антиген в человеческом ор ганизме и в организме некоторых млекопитающих, таких как кролик. У мыши а нтиген презентуют только молекулы СD-1 из второй группы. CD-1 молекулы похожи на молекулы МНС-I тем, что они состоят из ?-цепочки, включающей три домена, ко торые нековалентно связаны с ? 2 m. Анализ кристаллической структуры CD-1d показал, что ?-цепочка формирует щель между первым и вторым доменами, которая уже и глубже, чем у молекул МНС 1-го класса. CD-1 антиген-связывающая щель не способ на формировать водородные связи с пептидным антигеном как это делает мо лекула МНС 1-го класса, но хорошо подходит для гидрофобного взаимодейств ия. В добавок к кортикальным тимоцитам, группа I СD-1 молекул первая экспрес сируется в дендритных клетках (ДК), которые являются важнейшими антигенп резентующими (АПК) для Т-клеток. Группа II CD1 молекул наоборот, в основном нах одится на эпителиальных клетках, кортикальных тимоцитах и гепатоцитах, но они тоже могут быть экспрессированы на АПК таких, как ДК, макрофагах и ?- клетках. При микобактериальной инфекции in vitro возрастает экспрессия CD1d мол екул на поверхности мышиных ДК и макрофагов [23]. 4.2 Презентация микобактериальных липидов группой I CD1 молекул Исследования, проведенные Порцелли, Бреннер, Кроненберг и Модлин доказа ли, что CD1a, CD1b, CD1c молекулы презентуют микобактериальные гликолипиды клеточ ной стенки. Микобактерии обладают клеточной стенкой, богатой гликолипи дами, что очень важно для их устойчивости. Было доказано, что CD1 молекулы пе рвой группы презентуют на Т??-клетках гликолипиды фосфоиннозитолманноз иды (PIM), липоарабиноманнан, (LAM) миколовые кислоты и гексозо-1-фосфоизопренои ды. Не было идентифицировано ни одного бактериального антигена, презент уемого CD1 молекулами второй группы. CD1d-рестриктированные клетки имеют уникальный фенотип. Они экспрессирую т на поверхности CD3 комплекс также хорошо, как и маркеры для NK, NK1-клеток. Боле е того, они экспрессируют высоко специфичный ТКР репертуар, включающий V?14J?281 комбинацию у мыши и гомологичную V?24J?Q у человека. Поэтому считается, что NK Т-клетки похожи. Этот факт также подтверждается тем, что они реагируют с ?GalCer. 4.3 Внутриклеточная локализация CD1 молекул Фагоцитированный макрофагами бактериальный патоген попадает в фагосо му, которая затем проходит через несколько стадий. Главные шаги, которые проходит фагосома: 1.Ранняя эндосомальная стадия, на которой фагосома сближается и трансфер рином. 2.Поздняя эндосомальная стадия, на которой фагосома закисляется до оптим альной для лизосомальных ферментов pH. 3.Фагосома, в которой идет внутриклеточноке "пищеварение". Микобактерии мешают созреванию фагосом, хотя механизм этого пока еще не известен. Микобактериальные фагосомы не до конца закислены, но бактерии получают доступ к трансферрину, который является главным депо железа не только для клеток хозяина, но и для микобактерий. Трансферрин и его рецеп тор двигаются вдоль ранней переработанной эндосомы, отдает готовое жел езо и затем возвращается на клеточную поверхность. Показано, что микобак териальные гликолипиды в самом деле нагружаются на CD1 молекулы в течении микобактериальной инфекции, эти молекулы могут быть найдены в компартм ентах. Внутриклеточная локализация CD1 молекул и микобактерий, покрывающ их их была анализирована с помощью конфокусной сканирующей лазерной ми кроскопии дендритных клеток зараженного человека. При использовании р азличных внутриклеточных меркеров было найдено, что три CD1 молекулы перв ой группы локализованы в клетки по-разному. CD1а молекула по распределению похожа на МНС первого класса и точно также экспрессирована на клеточной поверхности. Кроме того, CD1а молекула была локализована на ранних рецикли рующих эндосомах положительных для GT-Pase ARF6 и для гранул Бирбека клеток Ланг ерганса. CD1b и CD1c молекулы были найдены в поздних эндосомально-лизосомальны х везикулах. Данные компартменты также служат как "доки" для разгрузки пе птидов в МНС молекулы второго класса. В противопоставление CD1b, CD1с молекула обильно презентуется на плазматической мембране и в Tf-лабильных ранних эндосомах. Кроме того, было найдено, что многочисленные гликолипиды, вкл ючая LAM и PIM, отщепляются от микобактерий внутри фагосом и транспортируютс я из фагосомы в поздние эндосомы и лизосомы. CD1b и CD1с молекулы были также обн аружены в этих компартментах. CD1с молекулы могут также взаимодействоват ь с микобактериальными гликолипидами, потому что в зараженных клетках о ни были обнаружены в микобактериальных фагосомах, задержанных на ранне й стадии активации [24]. CD1b молекулы были первоначально найдены в зрелых фаголизосомах. Как ранее было показано, созревание фагосом сопровождается потерей жизнеспособн ости микобактериями, поэтому эти фаголизосомы скорее всего состоят из н ежизнеспособных микобактерий. Дальнейшие эксперименты показали, что з араженные клетки хозяина отщепляют гликолипиды, которые могут быть пог лощены дендритными клетками, лежащими в их окрестности. Данные открытия объясняют транспорт антигенных гликолипидов из макрофагов в ДК, или из г лавных хозяйских клеток к главным АПК, экспрессирующим CD1 молекулы, в эксп ерименте in vitro. Предварительные данные свидетельствуют, что внутриклеточ ные везикулы различных размеров, такие как экзосомы и апоптические пузы рьки, принимают участие в данном транспорте. Во время микобактериальной инфекции экспрессия на поверхности молекул МНС первого и второго класс а и CD1b нерегулируема. 4.4 Рецептор для транспорта АГ Маннозо-мембраные рецепторы (PPR) играют роль в понимании (распознавании) и презентации очищенного LAM с помощью CD1b. Этот R был идентифицирован в ранних эндосомах, но не в микобактериальных фагосомах, что доказывает его участ ие в распознавании чистых гликолипидов. РРR CD14 связывает не только липопо лисахариды грам "-" бактерий, но также некоторые микобактериальные глико липиды. Этот R путешествует через фагосомы и поздние эндосомы-лизосомы з араженных микобактериями макрофагов. Отсюда следует, что CD14 может приним ать участие в транспорте гликолипидов из фагосом в другие внутриклеточ ные компартменты. Так как CD14 экспрессируется только на макрофагах, то ден дритные клетки, несущие CD1 молекулу, должны использовать другие R, для тран спорта гликолипида. Предполагается, что гликолипиды транспортируются из зараженных макрофагов в незараженные ДК для презентации, а также, что CD14 может принимать участие в транслокациях гликолипида внутри макрофаг а. Как было показано для LAM, гликолипиды могут встраиваться в мембрану хоз яйской клетки и мигрировать вдоль фосфолипидного бислоя. В фагосомах CD1 м ожет принимать гликолипиды из депо. Здесь загрузка CD1а и CD1с (но не CD1b) независ има от низкого рH. Расщепленные микобактериальные гликолипиды могут быс тро связываться с экспрессированными на клеточной поверхности молекул ами CD1 с помощью механизма экстрацеллюлярной загрузки - этот процесс пост улирован для CD1а и, возможно, CD1с. Считается, что загружающие гликолипиды в CD1 молекулы могут включать шапе рон-подобные молекулы для облегчения связывания половины гидрофобного липида с гидрофильной антиген-связывающей щелью. Также исследуется, как ие микобактериальные гликолипиды нуждаются в переработке до того, как о ни будут связаны и презентованы молекулами CD1. было показано, что презента ция гликолипида молекулами CD1b (но не CD1а) включает в себя транспорт гликоли пидов в лизосомальные компартменты. Более того, эндосомально путешеств ующие CD1b, CD1с и CD1в молекулы содержат YXXZ эндосомально-целевую последовательн ость (Z содержит большую гидрофобную часть цепочки). Этот целевой мотив по могает ассоциации CD1 молекул с адапторным протеином (АР) их корректной вну триклеточной сортировке. При мутации данной последовательности отменя ется презентация антигена молекулой CD1b. Кислая среда внутри лизосом може т облегчить расщепление антиген - связывающий щели CD1 и обрезанию гликоли пидов лизосомальными гликозидазами и липазами. Действительно, при пров едении экспериментов с меченными радиоактивными атомами микобактерия ми было доказано, что микобактериальные гликолипиды ферментативно изм еняются на их пути из фагосом. Антиген-связывающая щель CD1 молекул, возможно, связывает две гидрофобные цепочки жирных кислот гликолипидов, тогда как гидрофильная углеводная часть высовывается для распознавания Т-клетками (рис. 4). Ферментативная м одификация углеводной части может привести к дифференциации Т-клеточн ых эпитопов и, следовательно, к антигенной специфичности, несмотря на то, что CD1 молекулы неполиморфны. Ферментативная модификация жирных кислот может улучшить аккомодацию гликолипидов в щели CD1 молекул [23]. 4.5 CD1d и NКТ-клетки при инфекциях Знания о роли второй группы CD1 молекул и NКТ-клеток в антибактериальном от вете хозяина ещё ограничены. NКТ-клетки находятся первоначально в печени , где они продуцируют IL4 в ответ на лиганд ТКR. Стимуляция NКТ-клеток ?GalCer индуц ирует синтез ИЛ4 и ИФН?, в результате иммунный ответ склоняется в сторону Т х 2 -ти па. При инфекции, вызванной Mycobacteriym bovis, Bacille-Calmette Guerrin начальный интерлейкиновый взры в NКТ-клеток модулирует продукцию ИФН?. Это, возможно, достигается за счет индуцированного ВСG выделения ИЛ12. В самом деле, при выделении обоих циток инов происходит сдвиг в сторону продукции ИФН?. Введение анти-CD1 моноклона льных антител приводит к незначительному улучшению течения листериоза . Параллельно увеличивается секреция ИФН?, ИЛ17 и ТНФ, а секреция ТНФ? сильно снижается. Позже показана практическая роль ТНФ? в иммунной регуляции NК Т-клетками. Такое же анти-CD1 введение слегка усиливает туберкулез у мышей и снижает продукцию ИФН?, ИЛ12 и ТНФ. Согласуется с этим то, что NКТ-клетки, кон тролируемые CD1, принимают участие в формировании гранулемы, индуцируемо й микобактериальными гликолипидами, в частности РIМ. CD1 Knock out мыши, зараженны е M. tuberculosis, не страдают от развивающегося туберкулеза по сравнению с диким ти пом мышей. Это различие может быть объяснено чрезмерностью иммунной сис темы, что способствует компенсации функций NKТ-клеток другими клетками у CD1 КО мышей. Или, возможно, что введение анти-СD1d АТ не только блокирует узнав ание СD1 клетками NK, но также и заражение АПК. Интересен тот факт, что реагир ующие клетки через CD1d и CD1c могут влиять на кальциевый наплыв в Т-клеточную л инию, экспрессирующую СD1. Регуляторную роль NКТ-клеток лучше всего демонстрируется на их роли в ЛП С-индуцированной реакции. Считается, что данная продукция ИФН? является движущей силой ЛПС-индуцированного летального шока. Хотя считалось, что быстрая продукция ИФН? происходит NКT-клетками, но, воз можно, что резидентные печеночные NКТ-клетки являются источником ИФН? пр и ЛПС-индуцированной печеночной патологии. Было показано, что резидентн ые печеночные NКТ-клетки, ответственные за гепатотоксичность, активирую тся ИЛ-12, которая выделяется ЛПС-стимулированными Купферовскими клеткам и. Истощение NКТ-клеток возрастает при сопротивлении накоплению ИЛ-12 (ЛПС- индуцированная генерализованная реакция Шварумана). CD7 КО мыши с дефекто м в продукции ИФН? и сокращением числа резидентных печеночных NКТ-клеток устойчивы к ЛПС-индуцированному шоку. Порог активации NКТ-клеток бактери альными продуктами низок, поэтому возникает риск острой и тяжелой патол огии, которая требует контррегуляции игибиторными цитокинами, такими к ак ИЛ-10 или ТФР?. Такая чувствительность позволяет NКТ-клеткам быстро отве чать на проникновение микроорганизма, но несет риск возникновения чрез мерной реакции, приносящей вред хозяину. Интересно, что активация и эксп ансия NКТ-клеток не вызвана легким попаданием бактериальной флоры. Незар аженные мыши содержат то же число NКТ-клеток, что их обычно выведенные сор одичи.CD1а-, CD1b- и CD1с-зависимые Т-клетки убивают зараженные клетки - мишени перф орин-зависимым способом. Они выделяют микробицидную молекулу, вместе с NKT-клетками гранулизин, кот орая способна убивать микобактерии также хорошо, как и другие патогенны е бактерии, грибы и паразиты. Гранулизин не может добраться до патогенна, расположенного в фагосомах, поэтому зависит от кооперации с перфорином. Открытие, что Т-клетки распознают липиды и гликолипиды, презентуемые CD1 бе лками, сильно расширило число потенциальных микробных антигенов, пресл едуемых иммунной системой во время инфекции. Способность CD1d и NКТ-клеток а ктивировать врожденный и адаптированный иммунные ответы привела к иде е, что эти клетки могут модулировать устойчивость к инфекционным агента м. В добавок, CD1d NКТ-клетки могут непосредственно внести вклад в резистентн ость хозяина, так как они выделяют множество эффекторных молекул, которы е могут воздействовать на антимикробный эффект. Хотя многое было изучен о о CD1d NКТ-клетках при использовании синтетического АГ ?-галактозинцерами да (?GalCer), остается область, недостаточно изученная, о физиологии собственн ых и микробных антигенов, которые могут быть презентованы с помощью CD1d [24]. 4.6 ?GalCer специфически активирует CD1d iNКТ-клетками Сложный ?GalCer - синтетический гликолипид, основанный на связанных липидах, о чищенных из морской губки, которой индуцировали регрессию опухоли. Тани гичи и др. показали, что антиопухолевый эффект ?GalCer зависит от iNКТ-клеток, чт о ?-гликозилцерамид презентуется CD1d. Узнавание ?GalCer - общая черта для мышиных и человеческих iNКТ-клеток. ?GalCer связывается с очищенным CD1d белком в бесклето чных системах, в результате ?GalCer/CD1d комплекс может активировать iNКТ клеточн ые гибридомы. Хотя их структура напоминает таковую из других CD1-презентуе мых антигенов, ?-гликозилцерамид не продуцируется клетками млекопитающ их или патогенных микробов. Несмотря на это возможность активировать iNК Т-клетки сделала ?GalCer необходимым реагентом для изучения iNКТ. In vivo прием ?GalCer имеет глубокие иммунологические последствия, которые опосре дованы CD1d iNКТ-клетками; ?GalCer-зависимая модуляция иммунного ответа не происх одит у мышей, которые испытывают недостаток CD1d или iNКТ-клеток. Этот эффект включает активацию NК, В-клеток и Т-клеток в пределах 3-24 часов, которые дете рминируются индукцией ранних маркерных клеток активации, таких как CD69 (В, Т и NК), CD80 и CD86 (В-клеток). Например, после введения ?GalCer iNКТ-клетки активируют NК к п родукции ИФН?. ?GalCer активированные iNКТ-клетки ингибируют дифференцировку Т х 2 . Ра спознавание iNКТ-клетками ?GalCer, презентуемого ДК, ведет к CD40/CD40L-зависимой проду кции ИЛ12 дендритными клетками. Таким образом, под влиянием iNКТ-клеток ДК с озревают. Напротив, продукция ИЛ4 iNКТ-клетками зависит от ИЛ12. Таким образо м, сложные взаимодействия и регулирующие сети обратной связи между АПК и iNКТ-клетками могут определять развитие иммунного ответа по Тх 1 или Тх 2 -типу. Вдобавок к этому эффекту на иммунный ответ, ?GalCer оказывает влияние iNКТ-клет ки непосредственно. В противоположность обычным Т-клеткам, распростран ения iNКТ-клеток были обнаружены после активации. Фактически после стиму ляции анти-CD3 моноклональными антителами или ?GalCer тяжело обнаружить iNКТ-кле тки, потому что они подвергаются апоптозу [25]. Глава 5. Отличительные частоты генотипа цитокинов среди канадских або ригенов и кавказских популяций Генетическое разнообразие, связанное с человеческим иммунным ответом, - ключевой фактор выживания индивидуумов и популяций в истории человече ства. Разнообразие популяций в восприимчивости к болезням и сопротивле нии было идентифицировано и связано с различиями в цитокине mRNA и уровнях экспрессии белков. Полиморфизмы в регуляторных областях генов цитокин ов могут влиять на уровни транскрипции генов. Они были ассоциированы с в осприимчивостью к аутоиммунным заболеваниям, таким как ревматоидный а ртрит, менингит и сепсис. Канадские аборигены имеют более высокую частот у полиморфизма цитокинов, что благоприятствуют низкой продукции TNF?, ИФН? и ИЛ10 и высокой продукции ИЛ6 по сравнению с кавказским населением. Эволюц ия этого уникального генотипа цитокинового профиля может быть связана с адаптацией аборигенов к давлению отбора окружающей среды, в которой пр еобладают гельминты, паразиты и грибковые инфекции [22]. Инфекционные патогенны, такие как M. tuberculosis и RSV продолжают иметь разрушитель ный эффект в некоторых североамериканских популяциях. Например, в Канад е 43% из всех новых активных и рецидивных случаев туберкулеза происходят с реди аборигенов, 37% случаев - среди индивидуумов иностранного происхожде ния и 20% - среди рожденных в Канаде, но не аборигенов. В то время как большинс тво изучений сфокусировано на социоэкономических различиях, небольшое внимание тратится на генетические различия, которые могут существоват ь среди человеческих популяций и регулировать качество иммунного отве та на данный патоген. Изучения инбредных мышей ясно демонстрируют, что г енетический фон играет ключевую роль в определении качества цитокинов ого ответа (Тх 1 против Тх 2 ), который в свою очередь затрагивает способ ность хозяина уничтожать инфекционного агента. С завершением проекта расшифровки генома человека стало очевидно, что п олиморфизмы одного нуклеотида (SNPs) являются обычными и в зависимости от л окализации могут затрагивать уровни транскрипции генов. В контексте им мунного ответа хозяина на инфекционного агента идентификация различий в цитокиновых SNPs профилях может иметь важные значения для сопротивления организма хозяина или восприимчивости к данному специфическому агенту . Текущее изучение описывает частоту SNPs, которая, как известно, коррелируе т с дифференциальной экспрессией генов ИЛ6, ИЛ10, ТНФ?, ИФН? и ТФР? в кавказско й, канадских аборигенов и филиппинской когортах и постулирует, почему оп ределенные цитокиновые SNPs профили могут развиваться на популяционном у ровне. В двух независимых опытах было найдено, что этнические популяции имеют с татистическое различие в цитокиновых SNPs профилях. Вначале было замечено, что цитокиновые генотипы у североамериканских аборигенов и филиппинце в с ESRD имеют значительные различия по сравнению с кавказцами с конечной с тадией данной почечной болезни. Во втором опыте, в который были вовлечен ы нормальные контрольные популяции кавказских индивидуумов и абориген ов, были подтверждены первоначальные наблюдения. По сравнению с когортами аборигенов и филиппинцев, кавказцы поддержива ют высокую частоту ТНФ? и ИФН? аллелей SNPs, чья фенотипическая экспрессия ас социирована с увеличением продукции этих цитокинов. Противоположность кавказской когорте индивидуумы филиппинского происхождения имеют выс окую частоту ИЛ6 аллели, ассоциированную с высокой продукцией данного ци токина. Аборигены поддерживают статистически высокую частоту аллеля "G" в ТНФ? и поэтому имеют низкую продукцию этого цитокина по сравнению с кав казской когортой. Точно также аборигены поддерживают статистически вы сокую частоту аллеля "А" в ИФН?, которая ассоциирована с низкой продукцией этого цитокина. Кавказцы могут поддерживать Тх 1 иммунный ответ, в то время как SNPs частоты в ре гионах промотеров цитокинов аборигенов и филиппинцев имеют тенденцию к поддержанию Тх 2 иммунного ответа. Для объяснения данных генетич еских различий нужно учесть исторический контекст, в котором развивали сь популяции с их микробной средой [22]. Старая мировая кавказская популяция в течение последних 11 тысяч лет зан ималась охотой и собирательством. Для одних это включало одомашнивание растений и животных, оседание и последующая урбанизация. Эти изменения в пропитании и образцах поселения закончились глубокими изменениями в м икробной среде Старого Света. С появлением сельского хозяйства и урбани зации так называемые "инфекции толпы" стали превалирующими, и эпидемии о спы, кори, чумы и туберкулеза распространялись по Европе [21]. С данными пато генами был связан высокий уровень смертности, что оказывало интенсивно е селективное давление на популяцию. Например, учитывая высокую распрос траненность туберкулезной инфекции, ведущей к преждевременной смерти в Европе (примерно 18 столетие), выживали те индивидуумы, которые могли эфф ективно воздействовать на патоген с помощью гиперчувствительности зам едленного типа. Этот тип ответа характеризовался высоким уровнем экспр ессии цитокинов ТНФ? и ИФН?. Действительно, когда анти-ТНФ? вводился пациен там с воспалением кишечника, то это ассоциировалось с возникновением ил и реактивацией туберкулеза, что подтверждает важную роль ТНФ? как иммунн ого модулятора или нейтрализатора туберкулеза. Определенные SNPs в регион е промотера ТНФ? были вовлечены в инфекционные болезни, такие как маляри я. Схожим образом ИФН? имеет важную роль в защите организма хозяина от мико бактерий, хотя продукция ИФН? не может адекватно контролировать инфекци ю без присутствия других цитокинов. До настоящего времени нет свидетель ства от изучения популяций, что общие варианты в генах рецепторов к ИФН? в лияют на восприимчивость к туберкулезу. Были случаи инактивации мутаци й в рецепторе к ИФН?, которые были ассоциированы с чувствительностью к об ычным непатогенным микобактериям. В пределах других цитокинов у животн ых моделей недавно было найдено, что экспрессия ИЛ6 макрофагами может пр епятствовать эффективному сдерживанию туберкулезной инфекции. При изу чении кавказской популяции было замечено, что она поддерживает относит ельно высокую частоту SNPs цитокинов, что приводит к гиперчувствительност и замедленного типа и низкому уровню экспрессии ИЛ6 по сравнению с други ми когортами. Учитывая вышеупомянутую высокую распространенность тубе ркулеза в Европе с 1700 года до ранних 1900-х, когда была развита эффективная ант имикробная терапия, можно объяснить цитокиновый SNPs профиль, наблюдаемый сегодня в кавказской популяции. Популяции аборигенов Северной Америки испытали уникальный набор эволю ционных давлений из-за их миграции через Берингов "Земной мост" (приблизи тельно 15-20 тысяч лет назад) и их изоляции от популяций Старого Света прибли зительно с 1400 года нашей эры. Аборигены вели охотничий и собирательский о браз жизни (это существовало и в Старом Свете), это способствовало диффуз ному расселению с низкой плотностью населения. Анализ патологий в челов еческих скелетных останках древних аборигенов указывает, что паразити ческие грибковые инфекции и недоедания присутствовали у древних людей. Употребление сырого или недостаточно приготовленного мяса, условия жи зни в зимнее время и определенные образцы поедаемых диких растений прив ели к тесному контакту этих людей с грибковыми инфекциями и паразитами и сделали их уязвимыми к сезонным авитаминозам. Микробная среда способст вовала позитивной селекции Тх 2 типа адаптивного иммунного ответа для выжива ния. Действительно, изучение семейств аборигенов Южной Америки во время инфекции Shistosoma mansoni подтвердили защитную роль Тх 2 типа цитокино в: ИЛ4, ИЛ6, ИЛ13, - в защите против паразитической инфекции. Чрезмерная экспре ссия Тх 2 типа цитокинов (ИЛ6, ИЛ10) индуцирует гиперактивнос ть В-клеток, которая характерна для системной красной волчанки. Полиморф измы в промотерах регионов ТНФ?, ИФН?, ИЛ10 и ИЛ6 ассоциированы с дифференциа льными уровнями экспрессии данных цитокинов. Сохранение данных полимо рфизов популяции может привести к селективному преимуществу. В контекс те существующих исследовании факт, что цитокиновый SNPs профиль у канадски х аборигенов искажен в сторону высокой продукции ИЛ6 и относительно низк ой ТНФ?, ИФН?, поддерживая концепцию низкой распространенности M. tuberculosis в дан ных популяциях до контакта с европейцами. SNP частоты цитокинов филиппинцев похожи с аборигенами Северной Америки. Общее азиатское наследие популяции аборигенов и филиппинцев и их парал лельные миграции из европейского континента более 12 тысяч лет назад мог ли привести к данному сходству. Изучения инфекционных болезней среди популяции аборигенов сосредотач ивались на социоэкономических факторах, способствующих устойчивости к заболеваниям или восприимчивости. В большинстве данных исследований г енетические различия между популяциями признаны способствующими факт орами в восприимчивости к болезням или в устойчивости. Хотя основания дл я данного генетического неравенства остаются в значительной степени н еизведанными. Чувствительность к туберкулезу, например, в относительно изолированной Южной Америке высока. Хотя индивиды с высоким уровнем пит ания и социоэкономическим статусом одинаково подвержены опасностям за болевания, как индивиды с низким уровнем питания и социоэкономическим с татусом. Предполагается, что высокий уровень продукции антител и Тх 2 -опосред ованной активации у южноамериканцев конкурирует с Тх 1 -опосредованно й защиты, необходимой для эффективной борьбы против инфекционных болез ней, таких как туберкулез. Популяции североамериканских аборигенов в Ма нитобе имеют самую высокую сферу действия туберкулеза относительно др угих местных популяций. Неравный риск заболевания между этническими по пуляциями может быть частично объяснен окружающими условиями и социоэ кономическими различиями. SNPs цитокинов могут также играть роль в данной и зменчивости. В итоговом этническом кладе вероятен фактор наблюдаемых различий част от SNPs цитокинов. Данные различия между кавказской, популяцией аборигенов и филиппинцев могут частично отразить тот факт, что данные популяции раз вивались в ответ на селективное давление их микробных сред [22]. Глава 6. Ассоциация туберкулёза со специфичностями гена HLA-DR-B1 в различных регионах Тувы Генетические факторы в значительной мере определяют восприимчивость к различным заболеваниям, в том числе и инфекционной природы. Туберкулез в этом отношении не является исключением. Определенный вклад в восприим чивость к туберкулезу вносят гены системы HLA, которые детерминируют разл ичные иммунологические феномены. Имеются многочисленные работы, в кото рых обнаружена положительная ассоциация антигенов HLA с заболеванием туб еркулезом. Считается, что наиболее значимыми являются ассоциации тубер кулеза с генетическими маркерами локуса HLA-DR, поскольку в этом локусе расп олагаются гены иммунного ответа. Этот факт можно использовать для форми рования по генетическим маркерам системы HLA групп риска в отношении забо левания туберкулезом. В то же время показано, что в различных популяциях с заболеванием туберкулезом ассоциируются разные антигены HLA. В ряде работ не было обнаружено значительных различий во встречаемости антигенов HLA у больных туберкулезом и здоровых лиц. Возможно, это связано или с малочисленностью материала, или с неправильно подобранными сравн иваемыми группами, поскольку в подавляющем большинстве работ обнаруже на положительная ассоциация антигенов HLA с туберкулезом. В то же время исс ледования в разных регионах Республики Тува выявили положительную асс оциацию туберкулеза со специфичностями HLA-DR-B1 13(6) и HLA-DR-B1 14(6). Возможно, высокая за болеваемость коренного населения Тувы ассоциирована с названными спец ифичностями гена HLA-DR-B1, что связано с национальными особенностями коренно го населения Республики Тува [9]. Глава 7. Распределение антигенов комплекса HLA у больных туберкулёзом и з доровых лиц в татарской популяции Результаты изучения распределения антигенов HLA у здорового населения об следованных популяций (русской, молдавской, узбекской, туркменской и тув инской) вошли в сборник исследований по генофонду населения России и соп редельных стран, проводимых Российской академией наук. Первая работа в этом по распределению антигенов HLA населения республики Татарстан была выполнена в 2003 г. в 4 районах Северо-Западной и Прикамской ча стей Татарстана (Арский, Балтасинский, Высокогорский и Атнинский). Татар ское население этих районов проживает в указанной местности на протяже нии жизни не менее 4 поколений, что установлено методом опроса. Иммуногенетическому исследованию предшествовало изучение эпидемиол огической ситуации по туберкулезу - заболеваемости, болезненности, смер тности. Изучено распределение антигенов HLA первого класса у здоровых лиц и больн ых активным туберкулезом органов дыхания, выявленных в 2002 г. Статистически достоверная разница между частотами встречаемости анти генов трех исследованных локусов системы HLA обнаружена только для антиг ена HLA-B22. Это указывает на то, что по крайней мере в этой части Татарстана у б ольных активным туберкулезом легких существует ассоциация с антигеном В22 [2]. Таким образом, в результате исследования распределения антигенов комп лекса HLA первого класса в татарской этнической группе (4 района Татарстана ) установлено, что у больных активным туберкулезом легких существует асс оциация с антигеном HLA-B22. ЗАКЛЮЧЕНИЕ Открытие антигенов тканевой совместимости у человека HLA (Human Leucocyte Antigens) положил о начало успешному развитию кооперативных интернациональных исследов аний, в которых участвуют все лаборатории мира, занимающиеся тканевой со вместимостью. Проведено исследование распределения компонентов компл екса HLA в большинстве популяций мира. Успехи трансплантологии, с одной стороны, и достижения клинической гене тики и иммуногенегики -- с другой, диктуют необходимость продолжать иссл едования в нашей стране. Подобные исследования были начаты в 80-е годы XX столетия в Центральном НИИ туберкулеза РАМН под руководством акад. РАМН А. Г. Хоменко и проф. В. И. Литви нова и получили развитие в последние годы [16]. В условиях экспедиций в ряде регионов России и стран СНГ проведены компл ексные клинические, генетико-эпидемиологические и иммунологические ис следования групп коренного населения с различной этнической принадлеж ностью и эпидемической ситуацией по туберкулезу. Изучение распределен ия компонентов комплекса HLA среди здорового населения и у больных туберк улезом легких проведено в русской, узбекской, туркменской, молдавской, т увинской популяциях. Для каждой популяции были обнаружены свои особенн ости в частотах встречаемости антигенов HLA и характерные для данной попу ляции ассоциации с восприимчивостью (или резистентностью) к туберкулез у легких. В проведенных исследованиях в русской популяции Москвы и Московской об ласти найдена ассоциация туберкулеза легких с антигенами В5 и В17, в молдав ской -- с антигенами В5 и В38, в узбекской -- с антигеном В12, в армянской - с В12 и В35, в тувинской -- с В15. Отличие в этом отношении татарской популяции от других (а ссоциация с антигеном В22) может быть объяснено либо особенностями этног енеза всего татарского населения республики, либо генетическими особе нностями татарского населения этих районов Татарстана, обособленного в генетическом плане в субизолят. Это может подтвердиться после иммуног енетического обследования большей части районов республики. В ряде работ не было обнаружено значительных различий во встречаемости антигенов HLA у больных туберкулезом и здоровых лиц. В подавляющем большин стве работ обнаружена положительная ассоциация антигенов HLA с туберкуле зом. В то же время исследования в разных регионах Республики Тыва выявил и положительную ассоциацию туберкулеза со специфичностями HLA-DR-B1 13(6) и HLA-DR-B1 14(6). Возможно, высокая заболеваемость коренного населения Тувы ассоциирова на с названными специфичностями гена HLA-DR-B1, что связано с национальными ос обенностями коренного населения Республики Тува. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 1. Баранов В.С., Баранова Е.В., Иващенко Т.Э., Асеев М.В. Геном человека и гены "пре драсположенности". Введение в предиктивную медицину. - 2000. - 271 с. 2. Гергерт В.Я., Валиев Р.Ш., Чуканова В.П. Распределение антигенов комплекса HLA у больных туберкулёзом и здоровых лиц в татарской популяции. // Проблемы туберкулёза и болезни лёгких. - 2004. - №2. - с. 45-46. 3. Гриппи М.А. Патофизиология легких. - 1997. - 344 с. 4. Иващенко Т.Э., Сиделева О.Г., Петрова М.А. и др. Генетические факторы предрас положенности к бронхиальной астме // Генетика. - 2001. - Т.37. - №1. - с.107-111. 5. Комогорова Е.Э., Костенко Е.В., Стаханов А.Н. Особенности иммунологических показателей у больных с различными формами туберкулёза лёгких. // Клинич еская иммунология. - 2005. - №1 - с. 45-50. 6. Ляхович В.В., Вавилин В.А., Макарова С.И. и др. Роль ферментов биотрансформац ии ксенобиотиков в предрасположенности к бронхиальной астме и формиро вании особенностей её клинического фенотипа // Вестн. РАМН. - 2000. - №12. - С.36-41. 7. Макарова С.И., Вавилин В.А., Ляхович В.В., Гавалов С.М. Аллель NAT285 - фактор устойч ивости к заболеванию бронхиальной астмой у детей // Бюллетень эксперимен тальной биологии и медицины. - 2000. - Т.129. - №6. - с.677-679. 8. Маянский А.Н. Туберкулёз (иммунологические и иммунопатогенетические а спекты). // Клиническая иммунология. - 2001. - №2. - с. 53-65. 9. Поспелов Л.Е., Матракшин А.Г., Ларионова Е.Е. Ассоциация туберкулёза со спе цифичностями гена HLA-DR-B1 в различных регионах Тувы. // Проблемы туберкулёза и болезни лёгких. - 2005. - №2. - с.23-24. 10. Поспелов Л.Е., Серова Л.Д., Калинина Н.М. HLA-DR-антигены у больных туберкулёзом и здоровых ревакцинированных БЦЖ лиц. // Проблемы туберкулёза и болезни л ёгких. - 2003. - №2. - с.82-83. 11. Пузырев В.П. Медико-генетическое исследование населения приполярных р егионов. - 1991. - 200 с. 12. Пузырев В.П. Состояние и перспективы геномных исследований генетическ ой кардиологии // Вестн. РАМН. - 2000. - №7. - с.28-33. 13. Пузырев В.П. Генетика артериальной гипертензии (современные исследова тельские парадигмы) // Клиническая медицина. - 2003. - №1. - с.12-18. 14. Пузырев В.П., Огородова Л.М. Геномная медицина в решении проблем пульмоно логии // Вестн. РАМН. - 2000. - №12. - с.45-48. 15. Пузырев В.П., Огородова Л.М., Салюкова О.А. Генетические основы этиопатоге неза бронхиальной астмы // Сиб. мед. журнал. - 1998. - №3. - с.82-85. 16. Соафер В.Н. Международный проект "Геном человека" // Соросовск. образ. Журн ал. - 1998. - №12. - С.4-11. 17. Степанов В.А., Пузырев К.В., Спиридонова М.Г. и др. Полиморфизм генов ангиоте нзин-превращающего фермента и эндотелиальной синтазы окиси азота у лиц с артериальной гипертензией, гипертрофией левого желудочка и гипертро фической кардиомиопатией // Генетика. - 1999. - Т.34. - №11. - с.1578-1581. 18. Суздальцева Т.В. Иммунопатологические аспекты аспирин-индуцированной бронхиальной астмы // Аллергология. - 1999. - №4. - с.16-18. 19. Хаитов Р.М., Алексеев Л.П. Физиологическая роль главного комплекса гисто совместимости. // Клиническая иммунология. - 2001. - №3. - с. 4-12. 20. Хаитов Р.М., Богова А.В., Ильина Н.И. Эпидемиология аллергических заболева ний в России // Иммунология. - 1998. - №3. - С.4-9. 21. Шевченко Ю.Л. Значение социальных факторов во взаимодействии человека и микроорганизмов. Роль здравоохранения в профилактике и лечении инфек ционных заболеваний // Вестн. РАМН. - 2000. - №11. - с.7-11. 22. Larcombe L., Rempel J.D., Dembinski I. Differential cytocine genotipe frequencies. // Genes and Immunity. - 2005. - №6. - p.140-144. 23. Markus S., Samuel M. Behar. Role of CD1d-Restricted NKT Cells in Microbal Immunity. // Infection and Immunity. - 2003. - №10. - p.5447-5455. 24. Natural reviews / Microbiologi. - 2004. - №2. - p. 747-754. 25. Trends in Microbiologi. - 2000. - №9. - p.419-425. ПРИЛОЖЕНИЯ Рисунок 1. Процессинг и экспрессия HLA-пептида. Рисунок 2. Персистентные микобактериальные инфекции и иммунный ответ хо зяина. Рисунок 3. Т-клеточные популяции, вовлечённые в антимикробную защиту. Рисунок 4. Встреча CD1 молекул с гликолипидами.
1Архитектура и строительство
2Астрономия, авиация, космонавтика
 
3Безопасность жизнедеятельности
4Биология
 
5Военная кафедра, гражданская оборона
 
6География, экономическая география
7Геология и геодезия
8Государственное регулирование и налоги
 
9Естествознание
 
10Журналистика
 
11Законодательство и право
12Адвокатура
13Административное право
14Арбитражное процессуальное право
15Банковское право
16Государство и право
17Гражданское право и процесс
18Жилищное право
19Законодательство зарубежных стран
20Земельное право
21Конституционное право
22Конституционное право зарубежных стран
23Международное право
24Муниципальное право
25Налоговое право
26Римское право
27Семейное право
28Таможенное право
29Трудовое право
30Уголовное право и процесс
31Финансовое право
32Хозяйственное право
33Экологическое право
34Юриспруденция
 
35Иностранные языки
36Информатика, информационные технологии
37Базы данных
38Компьютерные сети
39Программирование
40Искусство и культура
41Краеведение
42Культурология
43Музыка
44История
45Биографии
46Историческая личность
47Литература
 
48Маркетинг и реклама
49Математика
50Медицина и здоровье
51Менеджмент
52Антикризисное управление
53Делопроизводство и документооборот
54Логистика
 
55Педагогика
56Политология
57Правоохранительные органы
58Криминалистика и криминология
59Прочее
60Психология
61Юридическая психология
 
62Радиоэлектроника
63Религия
 
64Сельское хозяйство и землепользование
65Социология
66Страхование
 
67Технологии
68Материаловедение
69Машиностроение
70Металлургия
71Транспорт
72Туризм
 
73Физика
74Физкультура и спорт
75Философия
 
76Химия
 
77Экология, охрана природы
78Экономика и финансы
79Анализ хозяйственной деятельности
80Банковское дело и кредитование
81Биржевое дело
82Бухгалтерский учет и аудит
83История экономических учений
84Международные отношения
85Предпринимательство, бизнес, микроэкономика
86Финансы
87Ценные бумаги и фондовый рынок
88Экономика предприятия
89Экономико-математическое моделирование
90Экономическая теория

 Анекдоты - это почти как рефераты, только короткие и смешные Следующий
Ни о каком расовом равенстве в Америке не может быть и речи, пока белых там не называют евро-американцами.
Anekdot.ru

Узнайте стоимость курсовой, диплома, реферата на заказ.

Обратите внимание, курсовая по медицине и здоровью "Ассоциации иммуногенетической системы HLA с развитием туберкулеза", также как и все другие рефераты, курсовые, дипломные и другие работы вы можете скачать бесплатно.

Смотрите также:


Банк рефератов - РефератБанк.ру
© РефератБанк, 2002 - 2016
Рейтинг@Mail.ru