Реферат: Авторадиография. Введение радиоактивной метки в биологические препараты - текст реферата. Скачать бесплатно.
Банк рефератов, курсовых и дипломных работ. Много и бесплатно. # | Правила оформления работ | Добавить в избранное
 
 
   
Меню Меню Меню Меню Меню
   
Napishem.com Napishem.com Napishem.com

Реферат

Авторадиография. Введение радиоактивной метки в биологические препараты

Банк рефератов / Медицина и здоровье

Рубрики  Рубрики реферат банка

закрыть
Категория: Реферат
Язык реферата: Русский
Дата добавления:   
 
Скачать
Архив Zip, 77 kb, скачать бесплатно
Заказать
Узнать стоимость написания уникального реферата

Узнайте стоимость написания уникальной работы

15 Реферат на тему : Авторадиография . Введение радиоактивной метки в биологические препа раты Авторад иография Основное назначение авторадиографии - регистрация полос радиоактивно меченых пр епаратов ( белков и НК ) после электрофореза . Для этой цели используют медицинскую " неэкранированную " рентгеновс кую пленку ( в пленках с защитным слоем на поверхности поглощается часть излучения ). Почернение рентгеновской пленки ( после проявления ) происхо дит как под действием электронов, так и у-излучения . Препараты, меченые тритием, ввиду малой проникающей способности его ( 3-электронов, лишь в случае очень высоких интенсивностей и злучения удается регистрировать данным методом . Авторадиография препаратов, меченых S и С осуществляется вполне успешно . Однако пластинки ПААГ в этих случая х необходимо перед регистрацией радиоактивности полностью высушивать . В противном случае Р-электроны, исп ускаемые в глубине геля, не достигнут пленки . Сушат гель, уложив его на толстую фильтровальную бумагу ( он прилипает и при сушке не съеживается ), 1 - 2 ч аса в вакууме и с нагреванием или 36 часов на воздухе при комнатной темпера туре - до состояния тонкой, прочной и прозрачной пленки . Тем не менее, неж елательно, чтобы толщина влажного геля превышала 0,4 мм . Рентгеновскую пленку накладывают эмульсией прямо на гель . В такой постановке опыта Р-эле ктроны углерода и серы проникают в слой эмульсии на глубину около 0,25 мм . Для хорошего прилегания пленки к гелю под крышку соответствую щей кассеты с пружинными зажимами кладут прокладку из губчатой резины . Саму кассету заворачивают в черную бумагу . Экспозиция длится нескольк о дней . Затем следует, как обычно, про явление и фиксация . Энергия Р-излучения радиоактивного фосфора достаточ но велика, чтобы его авторадиографию можно было вести прямо с влажной пл астины геля . Гель, покрытый пленкой, оставляют на одной из стеклянных пластин, заворачивают в тонкий полиэти лен и экспонируют, как было описано выше, в течение нескольких часов - лучше на холоде ( -20° ), с тем, чтобы помешать расп лыванию полос в геле во время экспозиции за счет диффу зии . Р-электроны радиоактивного фос фора могут проходить в материале рентгеновской пленки до глубины в 6 мм . Это означает, что большая часть их " прошивает " пленку, не передав в сю свою энергию молекулам бромистого серебра и, следовательно, не самым лучшим образом регистрируются . Иногда, е сли интенсивность Р-излучения невелика ( за малостью содержания ), эти " пропадающие зря " электроны улавливают с помощью фосфоресцирующ его экрана, который устанавливают по другую сторону пленки . Попавшие на экран Р-электроны вызывают его свечение и пленка регистрирует ( не без н екоторого размытия изображения ) ещ е и светящуюся полосу на экране . Зат о яркость почернения в этом случае может увеличиться в 5-8 раз . Поскольку при использовании флюоресценции экрана во зможна релаксация кристаллов бромистого серебра, распавшихся под дейс твием света, экспозицию пленки лучше проводить в этом случае при - 70° . Для правильного совмещения пленки после проявления с исходным гелем, на нем до авторадиографии делают две пометки по углам ра диоактивными чернилами . Сцинтилляционные счетчики излучения Метод авторадиографии имеет два серьезных недостатк а . Во-первых, нельзя количественно о ценить интенсивность радиоактивного излучения . Степень почернения полос для этого критерий слишком груб ый . Во-вторых, практически невозмож но во многих случаях авторадиографией зарегистрировать излучение трит ия Оба эти недостатка снимаются при использовании жидко стных сцинтилляционных счетчиков . Идея заключается в том, чтобы растворить радиоактивно-меченое вещество в жидкости, которая на воздействие Р-электронов, обладающих даже относит ельно малой энергией, отвечала бы вспышками света . Эти вспышки могут быть зарегистрированы высокочувст вительными фотоэлементами . Такая ж идкость именуется сцинтиллятором , а сами вспышки - сцинтилля циями . Принцип действия здесь прост . Электрон, вылетевший из ядра радио активного атома, входящего в состав некой биологической молекулы, сразу же попадает в жидкую среду, где он обречен столкнуться на пути своего пол ета ( пусть он будет измеряться лишь доля ми миллиметра ) с молекулами сцитилл ятора . Немалая часть таких столкнов ений приведет к передаче части кинетической энергии электрона какому-л ибо " легко возбудимому " наружному электрону сцинтиллятора . Скорее всего электрону, участвующему в реализации со пряженных двойных связей в ароматической молекуле, например, толуола или нафталина . Обычное " время жизни " такого электрона в возбужденном состоянии - порядка 10~ 8 сек " после чего он возвращается к своему нормальному положению, отд авая полученную " лишнюю " энергию посредством испускания кванта света . Электроны летят очень быстро . Поэтому интервалы между появлением фотонов ( на пути пролета электрона ) будут столь малы, что не только человеческий глаз ( если бы этот свет оказался в видимой области ), но и электронные регистрирующие прибор ы воспринимают эту цепочку вспыш ек, как о дин световой импульс . Сколько радио активных распадов в препарате случится за 1 минуту, т.е. сколько электронов за минуту прочертят свои траектории в сцитилляторе, столько же электрических импульсов зар егистрирует высокочувствительный счетчик излучений . В качестве такового используют не фотоэлементы ( их чувствительность слишком мала ), а фотоумножители ( ФЭУ ). С эт ими приборами вас должны познакомить в курсе физики . Идея их устройства состоит в том, что в торце, внутри отк аченного до высокого вакуума цилиндра имеется фотокатод, который даже п ри попадании на него единичного фотона испускает, как минимум, один элек трон . Под действием сильного электр ического поля этот электрон разгоняется и ударяет в первый " динод " - металлическую пластинку, покрытую особым составом, способным " ответить " на удар быстро летящего электрона испусканием порядка 5-ти " вторичных " электронов . Все они, в свою очередь, р азгоняются электрическим полем и ударяют во второй динод . Из которого вылетает уже около 25-ти электрон ов . Такое умножение числа электроно в происходит на 8-10 " каскадах ". Так, что на стоящий в конце цилиндра анод обрушиваетс я целая " лавина " электронов, порожденная любой очень слабой и короткой вспышко й света . Лавина электронов легко пр еобразуется во вполне ощутимый и столь же короткий, как первоначальная в спышка света, импульс напряжения . Д алее следует усилитель этого напряжения и электронный счетчик импульс ов, успевающий регистрировать многие тысячи импульсов в секунду . По окончании заданного времени счета ( например, 1 минуты ) счетчик останавливается и показывает конечный результа т счета ( в имп/мин ). Выше была сделана оговорка : " если бы этот свет был видим глазом ". Он не видим потому, что лежит в ультрафиолетовой области . Такой далекой, что его не ре гистрирует обычный ФЭУ . Но коротков олновое излучение можно без труда превратить в более длинноволновое с п омощью люминофоров - веществ, отвеч ающих на поглощение коротких волн света испусканием более длинных волн . В сцинтиллятор добавляют в небольш ом количестве ( -0,5% ) такие люминофоры, которые в два этапа, но мгновенно перевод ят исходную вспышку света с длиной волны около 310 тц во вспышку с длиной во лны 420 mi , хорошо регистрируемую ФЭУ . Способ регистрации энергетически слабой радиоактив ности ( З H ) и оценки ее удельной активности ( числом имп/мин ) кажется найден, но возникают некоторые трудности, о преодолени и которых следует упомянуть . Я не сл учайно назвал выше в качестве первичных сцинтилляторов толуол и нафтал ин . Именно им по ряду причин отдаетс я предпочтение . Но нафталин - это твердое вещество . К счастью, его до концентрации 6 - 10% по весу можно растворить в диоксане . А диоксан хорошо смешивается с водой и не теряет этой с пособности, если в нем растворен нафталин . Это - существенно, так как б ольшинство биологических препаратов исследуется в виде водных раствор ов . То, что во флаконе со сцинтилляторной жидкостью лишь 10% растворенного вещества является, собственно говоря, сцинтиллятором, не сказывается на эффективности счета импульсов . " Результативных " столкновений все-таки оказывается достаточно много, а они все равно сливаются в единую вспышку света . Ну а как быть со сцинтиллятором на основе толуола ? В этом случае вся жидкость во флаконе являе тся первичным сцинтиллятором, но ... она не смешивается с водой . Проблему удается решить добавлением в толуол, в соотношении 1 : 3 или даже 1 : 2, детергента Тритон Х-100 . Если количество водного раствора радиоактивного препарата не превышае т 2,8 мл на 20 мл сцинтиллятора, то получается истинный раствор, и эффективнос ть счета импульсов практически не снижается . Задача, кажется, решена . Достаточно в стеклянный флакон, емкостью в 25 мл залить один из д вух сцинтилляторов, добавить в количестве 2-2,5 мл водный раствор радиоакти вно меченого биологического препарата, поставить этот флакон в полной т емноте ( в глубине хорошо закрытого от св ета прибора ) перед фотокатодом ФЭУ и можно считать импульсы . Но не тут-т о было . Поскольку надо считать с бол ьшой точностью порой очень малые уровни радиоактивности, то вмешиваетс я постоянный " враг " всех высокочувствительных электронных приборов - так называемый " собственный шум " элементов, об разующих эти приборы . В том числе " шумит " и ФЭУ . Физическая причина этого лежит в том, что из фотокатода, без всякого освещения, а только за счет своих теп ловых движений непрерывно, с большой частотой и совершенно хаотичес к и вылетают электроны . Они тут же подхватываются сильным электрическим поле м, умножаются, как описано выше, и дают ложные, " темновые " импульсы напряжения , которые благополучно регистрируются счетчиком импульсов . Этот " темно вой счет " может во много раз превышать сч ет регистрируемой радиоактивности ( он д остигает величины порядка 105 имп/мин ). Такова " плата " за высокую чувствительность ! Однако электроника нашла выход и из этого, казалось бы , безнадежного положения . Флакон с п репаратом ставят между двумя фотоумножителями . Импульсы напряжения с каждого из них подаются одновременн о на электронное устройство, именуемое " схемой совпадений ". К сожалению, школьны й курс физики ( боюсь, что и курс биологиче ского факультета ) не позволяет здес ь описать это очень простое, но замечательное изобретение . Остается только сообщить, что оно осуществл яет . Оно пропускает ( в виде одиночного импульса ) в следующую за ним электронную цепь два импульса напряжени я, приходящие на два его " входа " строго одновременно - с точностью до 10~ 8 сек . Я упомянул, что ФЭУ шумят хотя и с бол ьшой частотой следования шумовых импульсов, но хаотически . Поэтому вероятность того, что два шумовых и мпульса придут на входы схемы совпадений одновременно ( с указанной точностью ) очень мала . В результате ч исло регистрируемых шумовых импульсов падает катастрофически - до 3 - 5 имп/мин . А вспышку света в сцинтилля торе оба ФЭУ " видят " и регистрируют идеально одновременно ! Впрочем, существуют и другие источники ложного счета импульсов . Например, космические лу чи . Они пролетают через флакон со сц интиллятором и порождают вспышку света . Для защиты от них флакон, опускающийся для просчета в глубину п рибора, защищен там толстой свинцовой " б роней ". Электроника позволяет достигнуть еще одного, не мене е замечательного результата . Если в сцинтиллятор вносить одновременно два препарата, из которых один, к при меру, помечен , а второй - радиоактивным углеродом, то современный 2-х канальный счетчик излучений может зарегистрировать в своих двух канал ах одну и другую радиоактивность порознь . Здесь игра идет на различии амплитуд импульсов тритиевого и уг леродного происхождения . Оно проис текает из разницы энергий Р-электронов, а значит и из различия яркости со ответствующих вспышек света . Это ра зличие преобразуется в различие амплитуд первоначальных импульсов нап ряжения, снимаемых с анодов обоих ФЭУ . На входе каждого из двух каналов счетчика ( после общего предвари тельного усилителя напряжений ) сто ят по два, так называемых, " пороговых огра ничителя ". Один из них (" верхний порог " ) не пропускает к счетчику импульсы напряжений, величина которы х больше некоторого наперед задан ного значения . Второй (" нижний порог ") " отрезает " все имп ульсы, которые меньше другого, тож е наперед заданного значения . Все э ти четыре ограничителя ( в 2-х каналах ) устанавливаются экспериментатором в зависимости от того, какая пара изотопов просчитывается . В результате такой регулировки в один канал для счета поступают импульсы только от более мощного излучателя , а в другой - только от слабого . При рег улировке учитывается и неизбежное частичное перекрытие распределений по энергиям для Р-электронов из обоих источников . С этой целью распределение для мощных импульсов частично " отрезается " снизу - со стороны импульс ов меньшей амплитуды . А регистрация слабых импульсов ограничивается " сверх у " - не проходит часть н аиболее " высоких " импульсов этой категории . В результате счет числа импульсов обеих категорий несколько з анижается, но они оказываются разведенными в разные каналы . Поправочные коэффициенты на такое занижен ие прибор вносит автоматически, просчитав предварительно ( при установленных порогах ) эталонные образцы каждого из двух видов используемой ради оактивности . Результаты печатаютс я на ленте в отдельных столбцах . В автоматический прибор можно с помощью многозвенной цепи металлических гнезд устанавливать до двух сотен нумерованных фла конов, которые просчитываются последовательно без участия оператора ( например, ночью ). На рис . 1 изображена принципиальная электрическая с хема 2-х канального счетчика излучений . Обозначения : 1 - флакон с препаратом, 2 - ФЭУ, 3 - схема совпа дений, 4 - усилитель напряжения, 5 - нижние пороги, 6 - верхние пороги, 7 - счетч ики числа импульсов для каналов А и В . А В Рис . 1. Счет радиоактивности на фил ьтрах Если синтез белка или нуклеиновой кислоты ведут в пол ной ферментативной системе in vitro ( в пробирке ) с использован ием радиоактивно меченых низкомолекулярных предшественников, то оцени ть включение радиоактивности в биополимер можно с использованием счет а радиоактивности конечного продукта на фильтре . Для задержания белков или нуклеиновых кислот после осажд ения их из реакционной смеси трихлоруксусной кислотой ( ТХУ ) или этанолом можно использовать фильтры из толстой фильтровальной бумаги или стекл оволокна с размером пор 0,45-1,2 ц . Второй вариант предполагает использование имеющихся в продаже мембранных фил ьтров из нитроцеллюлозы ( без осаждения ). В этом случае задержание продукта реакции на фильтре обусловлено его сорбцией . Нитроцеллюлоза прочно сорбирует щелочные белки, рибосомы и од нонитевые ( денатурированные ) молекулы ДНК . Следует отметить, что в случае использования бумажных или стек ловолокнистых фильтров часть радиоактивного продукта проникает в глуб ь фильтра, а на мембранном - весь он т онкой пленкой распределяется по поверхности . С точки зрения надежного контакта со сцинтиллятором второ й вариант предпочтительнее . Но мемб ранные фильтры намного дороже бумажных или стекловолокнистых . Для данной цели удобны фильтры диаметром 24 мм, что позволяет легко вносить их во флако ны сцинтилляционного счетчика . Фил ьтрование осуществляют с помощью простого устройства, изображенного н а рис .2. Рис . 2. В колбу Бунзена ( 1 ) вставляют на резиновой пробке кольцеву ю подложку для фильтра ( 2 ) из нержавеющей стали в виде решетки с кольц евым шлифованным фланцем . На нее кл адут фильтр ( 3 ), а на фильтр ставят резервуар ( 4 ), выточенный из такой же стали и тоже со шлифованным фланцем . Фланцы сжим ают пружинными зажимами ( не показаны ). Такая легко разборная конструкция удобна для манипуляций с фильтром . В резервуар заливают реакционную смесь со взвешенным в ней осадком исследуемого продукта ( в п ервом варианте ) или без осадка ( во втором варианте ) и при небольшом разрежении отсасывают жидкость . Радиоактивные предшественники вымывают 5-6 раз сменяя в резервуаре промывную жидкость, не способную растворить оса док . ( Например, ту же, в к оторой велось осаждение полимера ) Если фильтров много, то, пронумеровав их предваритель но по краю карандашом, можно промывку вести " в объеме ", большими партиями, см еняя промывную жидкость каждые 15 минут и периодически встряхивая ее . Последние промывки в любом случае веду т этанолом, затем эфиром для полного удаления воды во время последующей сушки фильтров . Это особенно важно для " объемных ": бумажных и стекловолокнистых фильтров, где вода должна быть по лностью удалена из внутренних пор, так как просчет радиоактивности осад ка на фильтре ведут во флаконе с чистым толуоловым сцинтиллятором . Остатки воды в порах могут преградить сц интиллятору доступ к радиоактивному веществу . Хорошо высушенный фильтр в толуоловом сцинтилляторе выгл ядит однородно полупрозрачным . Суш ку ведут на воздухе при комнатной температуре 15 - 20 минут ( до исчезновения зап аха эфира ). Положение " объемного " фильтра во флаконе, - лежа на дне или стоя на ребре, - не играет существенной роли . Вспышки света при испускании ( 3- электронов все равно " засвечивают " всю жидкость во флаконе и будут замечены обои ми ФЭУ . Впрочем, мембранный фильтр, в се-таки, лучше положить на дно пленкой вещества вверх . В случае малых объемов инкубационной смеси даже в пер вом варианте использования фильтров не обязательно проводить реакцию и осаждение полимера в объеме для последующего сбора осадка фильтрован ием . До 50 мкл реакционной смеси можно просто нанести на бумажный фильтр и дать жидкости впитаться . Эту операцию можно провести за один прием д ля нескольких десятков пронумерованных фильтров, ряд за рядом наколоты х булавками на слой резины, так чтобы они ее не касались . Затем резину с фильтрами помещаю т во влажную камеру, термостати рованную при темп ературе ферментативной реакции . По ее окончании фильтры вместе с булавками снимают и помещают в большой ста кан, заполненный 5% - ным раствором ТХУ или э танолом . Осаждение полимера будет п роисходить внутри фильтров . ( С булавок фильтры снимать не следует, так как булавки предохра няют их от слипания ) Там же, в стакане производят и все промывки . Затем фи льтры снова накалывают на резину, сушат и помещают во флаконы со сцинтил лятором в порядке их номеров . Разумеется, при использовании фильтров эффективност ь счета снижается по сравнению с просчетом препарата, растворенного в сц интилляторе . Некоторая часть энерг ии ( 3-электронов теряется на соударения с материалом осадка и пространственной сеткой фильтра . Однако Р-электрон, потерявший часть энергии, вовсе не обязательно уже неспособен вызвать световую вспышку в сцинтилляторе . А для счета важно только число импу льсов в минуту, а не их амплитуда ( за исклю чением счета двойной метки ). Тем не м енее, следует контролировать тормозящие факторы - толщину и плотность осадка, а также и самого фильтра, с тем, чтобы по возможности уменьшить число импульсов, оказавшихся не просчит анными из-за слишком большой потери энергии по дороге к сцинтиллятору . Введение радиоактивной мет ки в биологические препараты a ) In viuo . Проще всего предоставить непростую, а иногда и небезо пасную операцию введения метки самой природе . Для этого в питательную среду вносят радиоактивно меченый предшественник синтеза интересующего нас вещества в организме . Проще всего это сделать для бактерий . Меченый по тимидин за 1 час легко вкл ючается в ее ДНК до уровня, составляющего около 10% внесенной в среду радио активности . Точно так же метят ДНК в животных клетках, растущих в культуре ткани . Импульсную метку в иРНК бактерий осуществляют путем введения в питательную среду С-урацила или того же Р-ортофосфата - после исчерпания или отмывки нерадиоак тивного фосфора . Ввиду быстроты про текания процессов метаболизма у бактерий продолжительность такого имп ульса должна быть небольшой ( 10-30 сек . ). После чего жизнедеятельн ость бактерий надо немедленно прекратить, например, вылить их суспензию на мелко раздробленный лед, содержащий азид натрия . Метку в бактериальные белки, как и в белки высших орган измов в культуре клеток, удобнее всего вносить с помощью меченого по С ил и S метионина . Напомню, что метионин является незаменимой аминокислотой (т.е. не синтезируется в самом организме ) дл я клеток всех высших животных и некоторых бактерий . Кроме того, с него начинается синтез любого белка, что п озволяет следить за началом этого процесса . Введение метки через диету животных практически не и спользуется, так как радиоактивные изотопы по путям метаболизма включа ются во многие биологические молекулы . Кроме того разбавление радиоактивной метки происходит за сче т собственных запасов организма, например, незаменимых аминокислот, пол ученных в результате катаболизма ( расще пления ) собственных белков . Все это требует большого расхода дорого стоящих радиоактивных препаратов и связано с повышенной степенью ради ационной опасности . Здесь уместно заметить, что радиоактивная метка ввод ится, точнее сказать, создается в аминокислотах, нуклеотидах и других би ологических значимых молекулах путем специального облучения в атомных реакторах . Каталоги специализиров анных зарубежных фирм содержат многие сотни наименований радиоактивно меченых молекул . Чего, к сожалению, н ельзя сказать об отечественной продукции . б ) In vitro . Введение радиоактивной метки в уже очищенные белки и ли нуклеиновые кислоты можно производить и в лабораторных условиях с по мощью химических реакций замещения или присоединения радиоактивных ат омов, а иногда и простых радиоактивно меченых молекул . Эти реакции достаточно сложны и рассматривать их зде сь не имеет смысла . Чаще введение ме тки осуществляется в процессе идущих in vitro ферментати вных реакций синтеза биополимеров с использованием радиоактивно мечен ых предшественников ( Р-АТФ, аминокислот, нуклеозидтрифосфатов и проч . ) Некоторые из ферментов присоединяют только одно меченое звен о на конец цепи соответствующего полимера . Другие ферменты, ведущие в пробирке комплементарный синтез биополимеров ( ДНК-п олимеразы, РНК-полимеразы, рибо сомальные комплексы ) при наличии радиоактивно меченых м ономерных предшественников ( рибо - и дезоксирибонуклеозидт р ифосфатов, аминоацил-тРНК ) могут вк лючать радиоактивную метку во все или некоторые звенья полимерных цепе й, придавая им очень высокую степень радиоактивности . В заключение следует отметить, что по причинам безопа сности и удобства детектирования результатов биосинтеза в последние г оды возникла тенденция к за мене радиоактивной метки на флю оресцентную, что мы уже наблюдали на примере эволюции метода секвенирования ДНК . Литература 1. Авдонин П .В., Ткачук В . А, Рецепторы и вну триклеточный кальций . 19 94 . - Наука, Москва . - С .2 9-42 . 2. А вцын А .П., Жаворонков А .А., Риш М .А., Строчкова Л .С. Микроэлементы человека, Медицина . М. - 1991 . 3. А нестиади В .Х., Нагорнев В .А. О пато - и морфогене зе атеросклероза . Кишинев, Медицина . - 1985 . - С .9 2 . 4. А нтонов В .Ф. Липиды и ионная проницаемость мембран . - М .: Медицина, 1982 . 5. А ронов Д .М., Бубнова Н .Р., Перова Н .В. и др . Влияние ловастатина на динамику липидов и а полипротеидов сыворотки крови после максимальной физической нагрузки в период пищевой липемии у больных ИБС // К ардиология, - 1995 . - Т .3 5 . - N 31 . - С .3 8-39 . 6. А таджанов М .А., Баширова Н .С., Усманходжаева А .И. Спек тр фосфолипидов в органах-мишенях при хроническом стрессе // Патологич . физио логия и эксперим . терапия . - 1995, - N 3 : - С .4 6-48 .
1Архитектура и строительство
2Астрономия, авиация, космонавтика
 
3Безопасность жизнедеятельности
4Биология
 
5Военная кафедра, гражданская оборона
 
6География, экономическая география
7Геология и геодезия
8Государственное регулирование и налоги
 
9Естествознание
 
10Журналистика
 
11Законодательство и право
12Адвокатура
13Административное право
14Арбитражное процессуальное право
15Банковское право
16Государство и право
17Гражданское право и процесс
18Жилищное право
19Законодательство зарубежных стран
20Земельное право
21Конституционное право
22Конституционное право зарубежных стран
23Международное право
24Муниципальное право
25Налоговое право
26Римское право
27Семейное право
28Таможенное право
29Трудовое право
30Уголовное право и процесс
31Финансовое право
32Хозяйственное право
33Экологическое право
34Юриспруденция
 
35Иностранные языки
36Информатика, информационные технологии
37Базы данных
38Компьютерные сети
39Программирование
40Искусство и культура
41Краеведение
42Культурология
43Музыка
44История
45Биографии
46Историческая личность
47Литература
 
48Маркетинг и реклама
49Математика
50Медицина и здоровье
51Менеджмент
52Антикризисное управление
53Делопроизводство и документооборот
54Логистика
 
55Педагогика
56Политология
57Правоохранительные органы
58Криминалистика и криминология
59Прочее
60Психология
61Юридическая психология
 
62Радиоэлектроника
63Религия
 
64Сельское хозяйство и землепользование
65Социология
66Страхование
 
67Технологии
68Материаловедение
69Машиностроение
70Металлургия
71Транспорт
72Туризм
 
73Физика
74Физкультура и спорт
75Философия
 
76Химия
 
77Экология, охрана природы
78Экономика и финансы
79Анализ хозяйственной деятельности
80Банковское дело и кредитование
81Биржевое дело
82Бухгалтерский учет и аудит
83История экономических учений
84Международные отношения
85Предпринимательство, бизнес, микроэкономика
86Финансы
87Ценные бумаги и фондовый рынок
88Экономика предприятия
89Экономико-математическое моделирование
90Экономическая теория

 Анекдоты - это почти как рефераты, только короткие и смешные Следующий
А не пора ли вам бросить курить? - спросили курильщиков чиновники.
А не пора ли вам бросить воровать? - ответили чиновникам курильщики.
Anekdot.ru

Узнайте стоимость курсовой, диплома, реферата на заказ.

Обратите внимание, реферат по медицине и здоровью "Авторадиография. Введение радиоактивной метки в биологические препараты", также как и все другие рефераты, курсовые, дипломные и другие работы вы можете скачать бесплатно.

Смотрите также:


Банк рефератов - РефератБанк.ру
© РефератБанк, 2002 - 2016
Рейтинг@Mail.ru