Курсовая: Герпес-вирусы и их репликация - текст курсовой. Скачать бесплатно.
Банк рефератов, курсовых и дипломных работ. Много и бесплатно. # | Правила оформления работ | Добавить в избранное
 
 
   
Меню Меню Меню Меню Меню
   
Napishem.com Napishem.com Napishem.com

Курсовая

Герпес-вирусы и их репликация

Банк рефератов / Биология

Рубрики  Рубрики реферат банка

закрыть
Категория: Курсовая работа
Язык курсовой: Русский
Дата добавления:   
 
Скачать
Архив Zip, 86 kb, скачать бесплатно
Заказать
Узнать стоимость написания уникальной курсовой работы

Узнайте стоимость написания уникальной работы

ГЕРПЕСВИРУСЫ И ИХ РЕПЛИКАЦ ИЯ. О.В. Мосин Вирус герпеса и заболевания, которые он вызывает простой герпес, ве тряная оспа, опоясывающий лишай и др. распространены на Земле широчайшим образом. Название герпеса было введено врачами Древней Греции, оно прои зошло от латинского глагола "герпейн", что означает "ползать". Объясняется такое название тем, что он распространяется расползаясь в виде характер ных пузырьковых высыпаний на коже больного. Герпес был впервые описан в научной литературе врачами Древнего Рима приблизительно за тысячу лет до нашей эры. Проблемой, заостряющей на себе внимание общества, герпес ст ал именно в 20 веке. Этот коварный вирус находится в числе наиболее распрос траненных заболеваний человека, передающихся в виде вирусной инфекции. Герпес - это важная и труднорешимая проблема современного общества и мед ицины. Девять из десяти жителей в мире больны герпесом простого типа, а ка ждый пятый имеет проявления герпеса в виде простудной сыпи. Клинических проявлений герпеса существует довольно много, и все они разного вида: по ражена может быть не только кожа, но и глаза, полость рта, нервная система больного герпесом, его дыхательная система и гениталии. Из-за своего ней родерматропизма герпес вызывает высыпания на коже, поражение слизисты х оболочек организма. Деструктивные действия, которые герпес оказывает на центральную нервную систему больного, вызывают такие заболевания, ка к энцефалит и менингит. При герпеcе возможны также заболевания глаз; кера тит или конъюнктивит. Простой герпес может выступать причиной патологи й у беременных женщин во время созревания плода и родов, в некоторых случ аях возникает спонтанный, непреднамеренный аборт или смерть плода еще в утробе матери, больной герпесом. Также у рожденного ребенка может иметьс я герпес в генерализованной форме. Исследователи отмечают связь между г енитальным герпесом у мужчин (рак предстательной железы) и женщин (рак ше йки матки). Статистика последних лет показывает, что частота заболеваний герпесом постоянно увеличивается - это не может не настораживать. В США, п о данным исследований, генитальным герпесом болеют около 40 миллионов че ловек, причем за один год это число увеличивается в среднем на полмиллио на человек. У каждого пятого американца при обследовании обнаруживаютс я клинические признаки того, что он когда-то переносил инфекцию, вызванн ую вирусом герпеса. В России ситуация выглядит также далеко не лучшим об разом - каждый год в российские больницы поступают около двух миллионов человек, больных герпесом. Чтобы знать этого опасного вируса, необходимо его исследовать. Данный научный обзор к.х.н. О.В. Мосина знакомит читателя с генетическими и биохимическими исследованиями герпесвирусов и механ измами их клеточной репликации. Принадлежность к семейству Herpesviridae определяется присут ствием в составе вири она двухцепочечной линейной ДНК, кодирующей около 20 вирусных белков, ико садельтаэдрического капсида из 162 капсомеров, сборка кото рого происходит в ядре, и оболочки, образующейся из я дерной мембраны. Интерес к герпесвирусам связан с их способностью в ызывать очень опасные инфекции, связанные с образо ванием пузырьков, фоликул и язв на слизистых оболочках человека и других животных, рекуррентные заболевания ( Alphaherpesvirinae и особенно HSV ), трансплацентарные инфекции с воз никн овением врожденных уродств (некоторые Betaherpesvirinae и особенно CMV ), потенциально летальные лимф опролифератив ные заболевания ( Gammaherpesvirinae и особенно EBV ). Герпесвирусы очень широко распространены в природе. Сре ди высших эукариот редко встречаются такие, которые н е под вергались бы заражению хотя бы одним из предс тавителей этого семейства вирусов. Известно около 90 охарактеризованных герпесвирусов: пять из них выд елены от человека [вирус простого герпеса 1 ( HSV -1), вирус простого гер песа 2 ( HSV -2), цитомегаловиру с ( CMV ), вирус ветряной ос лы/опоясывающего лишая ( VZV ) и вирус Эпштейна — Барр ( EBV )], четыре — от лошади, четыре — от коров, два — от св иней [вирус псевдобешенства ( PSV ) и цитомегалови рус свиней], два — от ку р (герпесвирус болезни Марека ( MDV ) и вирус инфекционного ларингоринотр ахеита]. Герпесвирусы крайне разн ообразны по биологическим свой ствам. Некоторые и з них имеют довольно широкий спектр хо зяев, они оч ень эффективно размножаются, быстро разрушая зар ажаемые ими клетки ( HSV -1, HSV -2, PSV ). Другие, как EBV , имеют более узкий спектр хоз яев. Некоторые гер песвирусы размножаются довольн о медленно, и в этом случае они обладают менее выра женным цитопатическим действием ( CMV ). Имеются Герпесвирусы ( MDV , герпесвирус Люкке лягу шек [95]), способны е вызывать злокачественные опухоли. Одним из наиб олее характерных свойств герпесвирусов является их способность оставаться в латентном состоянии в хозяине на п ротяжении всей его жизни, в котором они размножаются, вызывая иммунодефи цитные состояния, аналогичные вирусу ВИЧ. Механизм, обеспечивающий лате нтность герпесвирусов, определяется действием специальных вирусных ге нов, а также ассоциацией вирусов с клетками подход ящего типа [257]. Классификация Представители сем. Herpesviridae разбиты на основе и х био логических свойств из три подсемейства— аль фа, бета и гамма ( Alphaherpes - virinae , Betaherpesvirinae , Gammaherpesvirinae ) [190]. Также проводились исс ледования по группировке вирусов по родам на осно ве нуклеотид ных .последовательностей вирусных ге номов и серологической специфичности генных продукто в [260, 267] i Alprraherpesvirinae Члены этого подсемейства характеризуются широким спектром хозяев, относительно коротким репродуктивным циклом, быстрым распространением по клеточной культуре, эффектив ным разрушением зараженных клеток и способностью существо вать в латентной форме, преимущественно, в нервных окончаниях ганглиях. В это подсемейство входит род Simplexvirtis ( HSV -1, HSV -2, вирус мамиллита крупного р огатого скота) и род Poikilovirus [ PSV , VZV и вирус герпеса лошадей типа 1 ( EHV -1)]. Betaherpesvirinae Для вирусов этого подсемейства характерен ограниченный спектр хозяев. Репродуктив н ый цикл идет долго, и заражение распространяется по культу ре клеток медленно. Зараженные клетки часто увеличиваются в размере (цитомегалия), легко возникает и поддержи вается последующая инфекция в культуре. Вирус мож ет поддержи ваться в латентной форме в секреторны х железах, лимфорети-кулярных клетках, почках и других тканях. В состав эт ого под семейства входит род Cytomegatovirus ( CMV ) и род Muromega lovirus (цитомегаловирус мышей). Gammaherpesvirinae Спектр хозяев, экспериментально устанавливаемый для вирусо в этого подсемейства, ограничивается животными тех же семейств или отрядов, из которых выделен природный вирус. In vitro все вирусы этого подсемейст ва способны реплицироваться в лимфобластоидных клетках, некоторые из н их могут вызы вать литическую инфекцию в эпителио идных клетках и фибробластах. Вирусы этой группы специфичны либо к Т-, либ о к В-лимфоцитам. В лимфоцитах инфекционный процесс ино гда останавливается на прелитической или литичес кой стадии, т. е. продуктивное потомство отсутствуе т. Латентный вирус часто об наруживается в лимфоид ной ткани. В это подсемейство входят три рода: Lymphocryptovirus (например, EBV ), Thetalymphocryp tovirus (на пример, MDV ) и Rhadinovirus (например, герпесвиру сы обезьян Ateles и Saimiri ). Вот пожалуй все современны е данные о классификации вирусов этого типа. Герпесвирусы не удается гру ппировать ни по морфологии ви риона, ни по общим при знакам, характерным для их репродук тивного цикла . Существенные различия между ними обнаружи ваются при анализе структур ы их генома, специфических осо бенностей репродук тивного цикла и действия вирусов на клетки. Структура вириона Вирион вируса герпеса сост оит из четырех структурных эле ментов: 1. сердцевины; 2. окружаю щего сердцевину икосадельгаэдрического капсида; 3. асимметрич н о распределенного вокруг капсида электроноплотного мате риала,, обозначаемого как тегумент; и наружной мембраны, или оболочки, окружающей капсид и тегумент (рис. 1). Сердцевина зрелого вири она имеет тороидальную форму и содержит вирусную ДНК [84, 107, 211]. У некоторых герпесвиру сов этот тороид ка к бы подвешен на белковом веретене из воло кон, зак репленных на внутренней стороне капсида и проходящих через отверстие тороида. Точное расположение ДНК вдоль торо ида неизвестно. Рис. 1. Электронные микрофотографии нуклеокапсидо в и вирионов HSV . У всех герпесвирусов к апсид обладает рядом общих струк турных признако в: он имеет 100 нм в диаметре и состоит из 162 капсомеров. Пентамерные капсомеры в вершинах икосадельтаэдра детально не охаракте ризованы. Размеры гексамерных капсомеров составляют 9,5x12,5 нм в продольном разрезе; от поверхности капсомера вдоль длинной о си проходит канал диа метром 4 нм [329]. Тегумент, который предло жили так назвать американские учёные Ройзман и Фер лонг [262], находится между капсидом и оболочкой, практически не виден на тонких срезах, но при негативном окраши вании вы глядит как волокнистый материал [204, 205, 277, 329]. Толщина тегумента варьирует в зависимости от местонахождения вирио на внутри зараженной клетки; она больше в вирионах , скапли вающихся в цитоплазматических вакуолях, и меньше в вирио нах, сосредоточенных в перинуклеар ном пространстве [74]. Имеющиеся данные указывают, чт о количество материала тегу мента определяется в ирусом, а не клеткой-хозяином [194], а его распределени е чаще всего носит асимметричный характер. Электронно-микроскопич еское изучение тонких срезов пока зало, что наружн ая оболочка вируса имеет трехслойный вид [62]; по-види мому, она формируется из участков модифици рованных кл еточных мембран [4, 67, 205]. Присутствие липидов установ лено путем прямого химического анализа вирионов [4, 16], а также следует из чувствительности вирионов к липидным растворителям и детергентам [100, 293, 297]. Оболочка вируса герпеса содержит многочисленные выст упы — «шипы» (пепломе ры); по сравнению с другими ви русами, имеющими липидную оболочку, у герпесвирус ов этих «шипов» больше, но они короче по длине [329] . Для HSV сборка пустых капсидов, не со держащих ДНК,— явление редкое [262, 314]. Размер вириона у герпесвирусов ко леблется от 120 до 300 нм. Эти вариаци и частично обусловле ны разной толщиной тегумента . Другой причиной вариаций раз меров является сост ояние оболочки. Неповрежденная оболочка вируса н епроницаема и обеспечивает поддержание квазисферической формы вириона. Если оболочка повреждена, то она пропускает внутрь негативный краситель, и вирион выглядит как яичница- глазунья, причем его диаметр больше, чем д иаметр интактного вириона. Вирусная ДНК. ДНК, выделенная из вири онов вируса герпеса, представляет собой линейную двухцепочечную молекулу. Выделенная ДНК во множе стве мест имеет одноцепочечные разрывы и пробелы. Если такую ДНК денатурир овать щелочью [77, 150, 331] или формамидом , то образуются ее фрагменты. Согласно ряду сообщений, упа кованная ДНК содержит в своем составе рибонуклеот иды [24, 112], но их присутствием нельзя полностью объясн ить степень фрагментации ДНК. ДНК разных герпесвирусо в различаются по молекулярной массе и составу осн ований. Молекулярные массы варьируют примерно от 80-10 6 до 150-10 6 . Вариации молекуляр ной массы ДНК для каждого конкретного вида вирусов мини мальны. Многие вирусные ДНК содер жат на концах и в середине цепи повторяющиеся последователь ности. В связи с разным числом этих повторов различия в м оле кулярной массе ДНК могут в некоторых случаях д остигать 20 kb . У ДНК HSV после нескольких п ассажей вне организма человека обнаружились вари ации в молекулярной массе, достигающие 2 x 10 -6 . У штамма HSV -1 ( HFEM ) посл е многочисленных пасса жей вне организма человек а наблюдали делецию в 4 kb . Состав оснований ДНК гер песвирусов в моль-процентах (гуанин+цитозин-п ap ) колеблется от 32 до 74. Кро ме того, на блюдаются вариации в степени гомогенности н уклеотидной по следовательности. Неоднородность популяции молекул ДНК по составу оснований может быть весьма незначительной (напри мер, у HSV ), но может быть и очень высокой (наприме р, в ДНК герпесвирусов обезьян Saimiri и Ateles ]. Организация нуклеотид ной последовательности Одним из наиболее инте ресных свойств ДНК герпесвирусов можно считать организацию нуклеотидн ой последова тельности. По этому признаку все изуч енные к настоящему вре мени ДНК герпесвирусов под разделяются в основном на пять типов. Они схематич ески «оказаны на рис. 2 . Рис. 2. Схема организации генома у пяти типов вирусов Herpesviridae . Ген омы типа А, В, С, D и Е представлены соответств енно герпесвирусом ко шачьего сомика ( CCV ), герпесвирусом саймири ( HVS ), вирусом Эпштейна — Барр ( EBV ), вирусом псевдобешенства ( PSV ) и вирусом простого герпеса ( HSV ). Горизонтальными линиями обозначены уникальные или последовательност и. Повторы длиннее 1000 b р, если о ни не являются кон цевыми, показаны в виде прямоуг ольников. Стрелки внутри прямоугольника позволяют различать прямые и и нвертированные повторы. Если подряд следует неск олько серий крупных повторов, они обозначаются буквами (например, повторы b к с в ДНК HSV ). Длинными вертикальными чер точками обозначе ны концевые последовательности , известные для геномов типа В, С, D и Е. В се они относятся к группе прямых повторов. Для гено мов типа Е концевые повторы обозначены как а-после доватсльности; они представлены в виде инвертирован ных повторов во внутренней части генома. Цифры указывают зна чения моле кулярной массы (в миллионах дальтон). Ци фры под вертикальными черточка ми указывают моле кулярную массу, приходящуюся на один концевой повтор. Размеры полной последовательности могут варьировать от одн ого штамма к другому. Геномы типа А, В к С существуют только в одной ориен тации (в ви де одного изомера). В D - и Е-геномах последовательно сти, заключенные меж ду инвертированными повтора ми, могут быть инвертированы, что дает два изомера для D -геномов и четыре изомера для Е-геномов. Хотя первым герпесвиру сом, для ДНК которого стала известна полная нуклео тидная последо вательность, был EBV , функциональное значение ор ганизации последовательности ДНК лучше выяснено на примере вируса HSV , поэтому на последовательности ДНК именно этого вируса мы остановимся более подробно. а) ДНК HSV удобно рассматривать как мо лекулу, состоящую из двух ковалентно связанных ко мпонентов, длинного L -компо нента и короткого S -компонента, на долю которых п риходится 82 и 18% вирусной ДНК соответственно. Каждый компонент состо ит в основном из уникальных последовательностей ( U L и U s ), фланкированных инвертированными повторами. Это з аключение основано на том, что при отжиге каждой из интактных одиноч ных цепей образуются две одноце почечные петли неодинаковой длины, соединенные о трезком двухцепочечной ДНК [282]. б) Инвертированные пос ледовательности, находящиеся по обе стороны фраг мента U L , обозначают ab и ba ; кажд ая из них содержит по 6% всей ДНК. Инвертированные по следовательно сти по обе стороны Us обозначают а'с' и са: на долю каждой из них приходится 4,3% в сей ДНК. На основании измерений длины двухцепочеч ных участков, образующихся при самоотжиге интакт ных цепей, и результатов изучения процесса частичной денатура ции был сделан вывод о том, что они отличаются по составу о сно ваний от участков ab и b 'а' [315]. в) После отщепления одноцепочечных участков на двух кон цах под действием экзонуклеазы ДНК HSV можно перевести пу тем самоотжига в кольцевую форму [93, 281]. Концевые участки, ставшие одноцепочечными и поэтому способные замк нуть ДНК в кольцо при отжиге, обозначают как альф а-последовательности [315]. Для получения кольцевой Д НК оптимально отщепление экзонуклеазой 400— 800 нук леотидов [315]; эта оценка, по лученная для HSVl -( F ), находится в хорошем согл асии с цифрой 500 bp , полученной в ходе прямого опре деления последовательности ДНК [202]. Длина альфа-после довательности варьирует от одного штамма к другому [52, 176, 311, 319]. Эти вариации частично обусловлены числом танд емных повторов, формирующих альфа-последовательн ость. Так, например, последовательность а вируса HSV -1 ( F ) состоит из прямого повтора 20 bp ( DRl ); уник альной последовательности из 65 bp ( U b ); отрезка из 12 bp ( DR 2), повт оренного от 19 до 23 раз; отрезка из 37 bp ( DR 4), повторенного от 2 до 3 раз; уни кальной последовательности из 58 bp ( U c ) и второй копии DR 1 (рис.3). Рис. 3. Сравнение нуклео тидных последовательностей фрагмента ДНК на участке, соединяющем L - и S -компоненты HSV -1. Верхняя горизонтальная ли ния схематически отражает организацию последовательности ДНК HSV -1. Да лее приведены нуклеотидные последовательности части участ ка Ъ'', всего участка а и части участка с. Цифры 1, 2 и 3 соотв етствуют штаммам HSV -1 ( F ) (201], 17 [52] и US [52]. Пробелами вы делены позиции, в которых наблюдает ся дивергенци я последовательностей. г) Большинство штаммов HSV -1 содержат на конце S -компо нента одну альфа-после довательность, тогда как на отрезке, соеди няющем L - и S -компоненты, и на конце L -компонента их числа может варьировать [176, 319], Следующие друг за другом а-по следовательности имеют общий DRl -участок [202]. Участок DR 1 на L -конце содержит 18 bp , т. е. имеет выступающий из цепи неспаренный З'-нуклеотид, за которым следует учас ток из 18 bp . Концевой DR 1 в составе уникальной альфа-последовательности на S -конц е также содержит .подобный неопаренный З'-нуклеотид, за которым следует только 1 bp [202]. Наиболее простое объяснение таких нуклеотидных последовательностей состоит в том, что Д НК зрелого вируса HSV -1 образуется путем разрыва конкатемерной или кольцевой ДНК на участке, где соседние последователь ности соединены общим отрезком DR 1 [202]. д) L - и S -компоненты могут быть инвертир ованы друг относи тельно друга. Вследствие этого Д НК HSV состоит из четы рех изомеров, отличающихся только ориентацией L - и S -компонентов [54, 104]. По всей вероятности, эта инверсия обусловлена сайт специфической рекомбинацией в районе альфа-последов ательности, вызванной продуктами транс-действую щих вирусных генов [200— 203, 287]. В случае делеции внутренних инвертированных повторов образуется вирус [ HSV -1 ( F ) I 358], который размножа ется в клеточной культуре, но не имеет инвертированных фо рм ДНК [235]. Тот факт, что значительная часть упакован ной ДНК находится в кольцевой форме, позволяет пре дположить, что внут ренние инвертированные повторы и и нверсии могут играть опре деленную роль в процесс е упаковки линейной вирусной ДНК . Гомология Подробно исследована гомология между молекулами ДНК разных герпесвиру сов, а также гомология между вирусной ДНК и ДНК кле тки-хозяина. Эти области гомологии обнаруживаютс я у вирусов, сходных по организации ДНК, антигенной специфич ности и биологическим свойствам. Наприм ер, вирусы рода Simplexvirus ( HSV -1, HSV -2, вирус мамиллита крупного рогато го скота) содержат гомолог ичные участки, выявляющиеся даже при очень строги х условиях гибридизации [151, 299]. Подобного рода гомологичные участки найден ы у вирусов рода Lymphocryp tovirus ( EBV , герпесвирусы пави ана и шимпанзе) [85, 110]. Вме сте с тем у ДНК вирусов, прина длежащих разным родам, гомо логичные участки вооб ще или почти не обнаруживаются даже при весьма нес трогой гибридизации [19, 53, 178, 251]. Учёными обнаружена гомо логия между ДНК вируса герпеса и ДНК клеток хозяев . Наиболее полные данные получе ны для EBV [102, 103] и HSV -1 [226, 247]. Вариабельность ДНК герпесвирусов Обнаружено два вида вариаций в нуклеотидных последовательн остях ДНК-герпесвирусов. Это, прежде всего, вариации числа тан демных повторов. Так, на участке, соединяющем L - и S -компо ненты , и на конце L -компонента число альфа-последовательностей оказывается неодинак овым даже в потомстве, полученном из одной вирусно й бляшки [52, 176, 200, 202, 319]. Такие же вариа ции наблюдаются в та ндемных повторах EBV [90, 271]. ДНК HSV , обработанная рестрикционными эндонуклеэзами, содержит помимо концевых фрагментов и тех, что размещены между L - и S -компонентами, еще ряд фрагме нтов переменной длины напри мер, Baml - il В-, Е- и N -фрагменты ДНК и HSV -1) [311]. Хотя организация последовательности в этих вариабельных участк ах мало изучена, скорее всего, они содержат тандемн ые повторы, тем более что флуктуации длин этих участков, по-видимому, но сят обратимый характер. Вариации второго типа п роявляются в том, что в какой-то части молекул обна руживаются сайты рестрикции, которых нет в других молекулах. Соответствующий анализ показал, что два изолята HSV -1 или HSV -2, в ыделенные из разных источников, никогда не бывают абсолютно тождественными, если между ни ми нет эпидемиологической связ и [33, 261]. При размножении вируса в клеточной культуре распределение сайтов рестрикции приобретает бол ее постоянный характер. Вариации HSV , кото рые обнаруживаются при герпесе у людей, возможно, отра жают способ передачи вируса и его эпидемиологию. HSV способен ка кое-то время находиться в латентной форме. Если же он ак тиви руется, то он может переносить инфекцию. Поскольку вирус по стоянно сохраняется в популяц ии хозяина, он накапливает неле тальные мутации, ко торые далее передаются потомству. Измен чивость в распределении сайтов рестрикции используют при изу ч ении процессов передачи вируса и его поведения в популяции человека [31— 33, 174, 264]. Полипептиды, входящие в состав вириона. По имеющимся данным очищенные вирионы нескольких гер песвирусов содержат от 15 до 35 видов структурных белков [36, 57, 227, 293, 304]. На рис. 4 представлен радиоавтограф поли пептидов HSV -1 и HSV -2, эле ктрофоретически разделенных в де натурирующих условиях в полиакрилам идном геле. Рис. 4. Электрофореграмма полипептидов и гликополипептидов, присутст вующ их в очищенных вирионах HSV -1 ( F ) и HSV -2 ( G ). Вирионы выделены из клеток НЕр-2, которые после заражения были инкубированы с 14 С-глюкоз- амином ( g ) или с 35 S -метионином (аа). Среди полос, содержащих 35 3-метионин, точками отмечены полосы, с оответствующие главному капсидному белку (с мол. массой — 155К). Гибсон и Ро йзман [881 идентифицировали пять дру гих полипептидов в и нтервале мол. масс от 25К до 53К, присутствующих в нукл еокапсидах до их одевания в оболочку. На электрофореграмме их поло жение не указано: это сделать довольно трудно, посколь ку они мигрируют вместе с другими полипептидами. Больш ая часть полипептидов вириона и все гликополипсп тиды попадают в состав вириона к моменту завершения его оде вания в оболочку. Гликополипептиды HSV - I и HSV -2, имеющие одинаковые буквенные обозначения, родственны в антигенном отношении и к одируются ко- линеарными генами (см. обзор [291]). Кажущи еся молекулярные массы глико полипептидов наход ятся в интервале от 55— 60К для gD HSV -1 и HSV -2 до 130К для gC HSV -1 и HSV -2. Обратите внимание, что у gC HSV -1 ( gC -1) кажущ аяся молекулярная масса заметно выше, чем у gC HSV -2 ( gC -2). Дру г ие гомологи в HSV -1 и HSV -2 имеют близкие раз меры. Для gG гомологи в HSV -1 и HSV -2 не идентифицированы. Неболь шое количество радиоактивной метки, попавшей из 14 С-глюкозамина в немаркиро ванные полосы профиля HSV -2 ( G ), обус ловлены нейтрализацией меченых продуктов катаболизма 14 С-глюкозамина; неизвестно, являются ли эти полипептиды гликопротеинами [336, 337]. (По данным [36].) Вирионы HSV -1 и HSV -2 содержат на поверхности четыре основных гликопротеина, обозначаемые как gB ( VP 7— VP 8,5), gC ( VP 8), gD ( VP 17 и VP 18) HgE (УР12,3,и VP 12,6) [36,106,290, 291, 295]. Есть сообщение о существовании еще одного гликопротеина HSV -2, gG [266]. Гликопротеины gB , gC , gD и gE сульфа тированы [122]. В гликопротеин gE , являющийся Fc -рецептором [13, 222, 223], включается 3 Н-пальмитат, — по-видимому, в его составе имеются жирные кислоты [134]. В препаратах очищенно го вируса часто присутству ют предшественники вирионных бел ков, поэтому чис ло полос, которые дают в денатурирующих гелях глик озилированные полипептиды, увеличивается. Функция гли копротеина gC не ясна; известно только, что он обладает СЗ b -связывающей активностью [81]; мутанты, лишенные способн ости экспрессировать gC , остаются жизнеспособными [107, 115], но част о они дополнительно несут мутации syn -, вызывающие слияние зараженных клеток в поликариоциты [148, 186,255,270]. Гликопротеин gB , по в сей видимости, обеспечивает происходя щее на ранн их стадиях заражения слияние оболочки вируса с плазматической мембран ой [175, 273]. Функции гликопротеинов gD , gE и gG неизвестны. Капсид состоит по меньше мер е из шести полипептидов [88]. Пустые капсиды, меньше п о размерам , и в них недостает по край ней мере одного белка [88, 89], который .в ДНК-содержащих капси дах расположен на поверхности [26] и подвергается посттр анс ляционной модификации во время или сразу посл е образования оболочки. Размещение остальных бе лков вириона неизвестно; вероятно, они располагаю тся на внутренней стороне оболочки и связывают белки о болочки с тегументом. В очищенном вирусе присутствуют АТРаза и протеинкиназа [63, 171, 268]. Протеинкиназа активиру ется при разрушении оболочки неионными детергентами и о стает ся в составе капсидтегументных структур [171]. Репликация герпесвиру сов Схема репликации герпе с-вируса показана на рис. 5. Заражение начинается с прикрепления вируса к клеточным рецепторам. Вирус про являет большое сродство к клеткам слизистой оболочки эпителия. Вслед за этим происходит слияние оболочки вируса с плазма тической или эндосомной мембраной, и лишенный оболочки капсид переноси тся к порам в ядерной мембране, через ко торые ДНК в ируса попадает в ядро. Транскрипция и репликац ия вирусной ДНК, а также сборка капсидов происходят в ядре. Вирусная ДНК т ранскрибируется в ходе репродуктивного цикла кл еточной РНК-полимеразой II при участии на всех стадиях цикла ряда вирусных факторов. Си нтез продуктов вирусных генов строго регулируется; экспрессия вирусны х генов координирована и представляет собой последова тельно развернутый во времени каскад событий. Несколько бол ее 50 хорошо представленных генных продуктов образ уют по мень шей мере пять групп, отличающихся друг от друга по характеру регуляции синтеза на транск рипционном и посттранскрипцион ном уровне. Некоторые из генных прод уктов относятся к ферментам или ДНК-связывающим б елкам, непосредственно вовлеченным в син тез ДНК. Основная масса вирусной ДНК синтезируется по меха низму катящегося кольца. Одновременно могут происходить из о меризация и упаковка ДНК. Сборка вируса складывае тся из нескольких стадий: внутри уже сформировавш ихся капсидов упаковывается ДНК, вирусы созреваю т и выходят из клетки через плазматическую мембрану. Весь процесс может длиться от 12 ч для вируса псевдобешенства до более чем 70 ч для цитомегаловируса человека. Репл икация HSV требует ок оло 18 ч. Рис. 5. Схема репликативного цикла вируса простого герпеса. Начальные стадии зараж ения Относительно событий, пред шествующих транскрипции вирус ных генов, сведения весьма расплывчаты и фрагментарны. Учёные считают, события на начальных стадиях заражения происходят по следую щей схеме. Прикрепление Герпесвирусы прикрепляютс я к специфическим рецепторам на клеточной поверх ности, которые еще не идентифицированы. Все представле ния о специфичности клеток в этом отношении основы ваются на исследованиях, подобных тому, что лишь часть клеток человека (например, только В-лимфоцнты) содержат р ецепторы для EBV [140, 154, 159, 326]. Попытки найти клетки животных, не содержащие рецепторов для HSV , успеха не дали; тем не ме не е кроме человека «естественному» заражению этим вирусом подвержены то лько шимпанзе [193]. Ничего не известно и об ан тирецеп торах— тех компонентах поверхности вирусной частицы, которые связываются с рецепторами. Проникновение капсида в зараженную клетку Прикрепление вируса ак тивирует белок, находящийся на поверхности вируса и вызывающий слияние оболочки вируса с плазматической мембраной. Пред полагают [204], что происходит именно слияние оболочк и с плазматиче ской мембраной, а не фагоцитоз. Это с огласуется с обнаружением на клеточной поверхности Fc -рецепторов оболочки вириона , в том числе и в тех случаях, когда проникновение ви руса не приводит к экспрессии вирусных генов [221]. Присутствие в оболочке ви руса активируемого комп онента, вызывающего ее слияние с кле точной мембраной, подтверждается т акже тем, что температуро чувствительный мутант HSV -1 по гликопротеину В адсорбирует ся на клеточной поверхности, не прон икая внутрь клетки. Если после такой адсорбции хим ически индуцировать слияние оболоч ки вируса с плазматической мембран ой, происходит заражение и вирус дает потомство [273]. Утрата чувствительности к нейтрали зации, обусло вленная проникновением адсорбированного вируса в клетку, происходит о чень быстро [123]. Выход вирусной ДНК из ка псида После проникновения в клетку капсид транспортируется к порам в ядерной мембране, а затем под к онтролем вирусных факто ров вирусная ДНК выходит в нуклеоплазму. Капсид ы температу рочувствительного мутанта HSV -1 ( HFEM ) tsB 7 ска пливаются у ядерных пор, и выход вирусной ДНК наблю дается только после понижения температуры до пер миссивного уровня [12]. На ран них стадиях заражения вирусом дикого типа у ядерных пор легко обнаружив аются пустые капсиды. Следуя аналогии с заражени е м аденовирусом, можно предположить, что транспорт капсидов герпесвирусов к ядерным порам осуществляется при участии ц и тоскелета [47]. Родительская вирусная ДНК накаплив ается в ядре. Какие компоненты вирио на необходимы для репликации вируса в з араженных клетках? Трансфекция клеток инт актной вирусной ДНК приводит к формированию вирусного потомства [94, 164, 282]. Однако удельная инфекционность ви русной ДНК на много порядков ниже по сравнению с инфекцио н ностью вириона, и длится репродуктивный цикл дол ьше. Кроме того, нет уверенности в том, что трансфек ция клеток влечет за со бой ту же последовательнос ть событий, которая составляет репродуктивный ци кл при заражении клетки вирионом. Относительно ДНК остал ьных компонентов вири она, то они выполняют четыре функции: защищают ДНК от внешних воздействий, обле гчают проникновение в клетку и, кро ме того, способ ствуют отключению на ранних стадиях заражения си нтеза клеточных макромолекул [70, 214— 216, 253, 265, 306— 308]. Четве ртая функция связана с участием в процессе реплика ции вируса; этот вывод основан на действии одного из компонентов вириона, индуцирующего гены альфа— первую группу экспрессируемых вирусных генов [11, 238]. Поскольку это собы тие происходит в ядре, можно заключить, что в ядро вместе с ДНК проникают еще какие-то компоненты вириона. Бел ки, участ вующие в этом процессе, окончательно не идент ифицированы. Престон и Нота рианни [244] наблюдали ADP -рибозилирование к апсидного бел ка VP 23 [89, 293] в ядрах зараженных клеток и высказали пред пол ожение о транслокации в ядро этого белка. Согласно полученным данным , белок VP 23 либо сам является компо нентом находящей ся в вирионе протеинкиназы, либо действует на субстрат, фосфорилируемый или дефосфорилируемый этим фер ментом [171]. Экспрессия вирусных ге нов Транскрипция вирусной ДНК происходит в ядре, тогда как все вирусные белки , синтезируются в цитоплазме. Число синтезируемых полипептидов для HSV не превосходит 50 [45, 116, 208]. В клетках, подвергшихся продуктивному заражению HSV , регуляция экспрес сии вирусных генов имеет три характерных свойств а: а) белки HSV образую т по крайней мере пять координирование регулируемых г рупп— и в отношении необходимых условий их синте за, и в отношении кинетики синте за; б) абсолютная ск орость синтеза и количество каждого из белков мог ут варьировать; в) указанные группы белков синтези руются последователь но одна за другой, причем синтез носит каскадный ха рактер [116, 118— 120, 161, 230, 292]. Первыми экспрессируются аль фа-гены, кодирующие пять альфа-белков, с номерами 0, 4, 22, 27 и 47. Синтез этих полип ептидов достигает максимальной скорости через 2 — 4 ч после заражения, а затем скорость синтеза уме ньшается [118]. Функционирование альфа-бел ков служит необходимым условием для синтеза последующих по липептидов. Так, клетки, зараженные мутантами по гену альфа-4, при непермиссивной температуре накапливают только альфа-по липептиды [158, 245]. Механизм, посредством которого белок альфа-4 регу лиру ет экспрессию последующих генов, неизвестен. Мутанты по этому гену легко поддаются отбору, причем достаточно больша я часть гена альфа-4 оказывается затронутой темпер атурочувствитель ными мутациями [56, 158, 245]. Характерна я черта этих мутантов заключается в том, что при пе реводе зараженных ими клеток из пермиссивных усл овий в непермиссивные возобновляется синтез альф а-белков [241]. Среди альфа-генов мутациям подвержен только ген альфа-4. Однако в экспрессии генов HSV играют роль и другие альфа-г ены. Например, это относится к гену альфа-22. Мутанты HSV -1 ( R 325 и R 328), содержащие делецию этого г ена [237], размножаются так же эффективно, как и дикий т ип в перевиваемых клетках челове ка и приматов, но не размножаются в перевиваемых клетках грызунов и в растущих или покоящихся диплоидных клетках че ловека. В культуре покоящихся диплоидных клеток человека му танты с дел ецией гена альфа-2 неспособны переходить из одной клет ки в другую, что может быть связано с нарушением образования оболочки. Полипептиды групп бета-1 и бет а-2 достигают максимальной скорости синтеза приме рно через 5— 7 ч после заражения [118]. Группа бета-1, в ко торую, в частности, входят полипептиды бета-1-6 (компонент вирусной рибонуклеотидредуктазы) [127] и бета-1-8 (главный ДНК- связывающий белок), появляются уже на ранних стадиях з ара жения, и в прошлом их ошибочно включали в групп у альфа-белков. Они отличаются от альфа-белков тем, что для их синтеза необходимо присутствие функционирующего белка альф а-4. К полипептидам груп пы бета-2 относятся вирусная тимидинкиназа (ТК) и ДНК-полиме раза. Гамма-полипептиды подраздел яются на две группы— гамма-1 и гамма-2 — различающи еся по условиям синтеза: если полипептиды группы г амма-1 могут образовываться в отсутствие синтеза вирус ной ДНК, то для образования гамма-2-полипептидов необходима амплификация вирусной ДНК [41, 118, 121, 333]. Представите лем группы гамма-1 является белок гамма-1-5 — главный белок, из которого формируется капсид, а также гликопротеин В. Гликопротеин С является примером белков группы гамма-2. Следует подчеркнуть, что группа гамма-1 существенно отличается от бета-полипептидов: хотя синтез гамма-1-полипептидов идет и в отсутстви е вирусной ДНК, они образуются в значительно меньш их количествах, чем при нормальной продуктивной инфекции, тогда как синт ез бета-полипепти- дов нисколько не подавляется в п рисутствии ингибиторов син теза ДНК и идет нормал ьным образом в клетках, зараженных ДНК-мутантами п ри непермиссивных температурах. Транскрипция: структура мРНК HSV Транскрипция ДНК HSV осуществляется ферм ентом РНК-полимера зой II [42]. Вирусные РНК кэпируются, ме тилируются и поли аденилируются; иногда выявляютс я и неполиаденилированные РНК той же последовате льности, что и аденилированные [6, 9, 10, 285, 286, 303]. Внутреннее метилирование характерно для ранних, но не для поздних РНК [10]. мРНК HSV -1 могут разли чаться и по количеству, и п о стабильности [76, 79, 131, 285, 286]. Как правило, мРНК альфа-гено в более стабильны по сравнению с мРНК гамма-генов [333]. Вирусные мРНК могут сохраняться и по окончании трансляции [136, 161, 162]. Хотя мРНК, о которых здес ь идет речь, функционируют в клетках высших эукари от, лишь малая часть мРНК HSV -1 под вержена сплайсингу. Открыты гены, перекрывающиеся по 5'- или З'-концевой последовател ьности, но таких генов немного [99, 198, 316]. Обращает на себ я внимание наличие множествен ных сайтов инициац ии транскрипции отдельных генов HSV [82, 210,280,322,338]. Функции вирусных генов Функциональная орган изация генома г ерпесвирусов Об организации геномо в HSV -1 и HSV -2 известно доволь но много. З нания о функциональной орга низации геномов вируса HSV в основном опираются на четыре основных источника данных: ан ализ рекомбинантов HSV -1 и HSV -2 [187, 207, 208]; восстановление жизнеспособности мутантов путем трансфекции клеток инт акт ной мутантной ДНК и фрагментами ДНК, полученны ми при дей ствии рестрикционных эндонуклеаз на ге ном дикого типа [156, 158, 209, 224]; перенос доминантного или поддаю щегося регист рации маркера из одного генома в дру гой с помощью фрагмен тов, отщепленных эндонуклеа зами рестрикции [156, 160, 238, 270]; экспрессия генных продукт ов очищенной мРНК или фраг ментов ДНК в подходящей системе [41, 111, 166, 179, 237, 238]. Наиболее фундаментальный вы вод заключается в то м, что порядок экспрессии генов во времени не соотв етствует порядку их расположения в геноме. Приводимые ниже данные касаются организации и структуры генов HSV , но они отражают и некоторые общие черты генов герпес-вирусов. 1. альфа-гены располагаютс я вблизи концов L - и S -компонентов [1, 139, 179, 208, 210, 246, 320, 322]. Гены а0 и а4 находятся в со ставе инвертированных повторов L - и S -компонентов соответст венно, так что в геноме дикого типа они представлены дв умя ко пиями. Но достаточно и одной копии: мутант H 3 V -1 (1358) с де лецией большей части внутреннег о инвертированного повтора сохраняет жизнеспособность [235]. ts -мутантов по гену а0 не обнаружено, а у мутантов по гену a 4 экспрессия ts -фенотипа свя зана с мутациями в обеих копи ях [158]. Ген а27 расположен вблизи внутреннего инверти рованного повтора L - компонента. Гены а22 и а47 частично занимают область и нвертированных повторов S -компонента. Из пяти альфа-ген ов только гены а22 и а47 дают мРНК, подвергающиеся спл айсингу; возможно, они пере крываются с другими ген ами [1, 179, 181, 321, 322]. альфа-гены в кольцевой ДНК образуют два кластера: в состав первого входят гены 27, 0, 4 и 22, а в состав второго — гены 47, 4 и 0. Несмотря на такую кластеризацию, каждый альфа-ген име ет свою промоторно- регуляторную область и собств енные сайты инициации и терми нации транскрипции [179— 182 J . 2. Гены бета и гамма рассеяны по L - и S -компонентам. Учёным у далось обнаружить только два кластера функциональных генов, но их реальная роль пока неясна. Так, бета-ген ы, кодирующие ДНК-полимеразу и ДНК-связывающий б елок, располагаются вблизи начальной точки репли кации ДНК в L -компон енте , тогда как несколько гамма-генов, кодирующих мембранные белки, располагаются в пределах уник альных последовательно стей S -компонента [167, 266, 270, 323]. Хотя извес тно несколько случаев перекрывания генов на 3- или 5- концах [58, 254, 322], у герпесвирусов примеров такого рода перекрывания, равно ка к и примеров сплайсинга генов [316], намного меньше по сравне нию с аденовирусами и паповавирусами. 3. Среди генов герпесвирусов наиболее полно исследован ген ТК HSV -1 — в основном благодаря лег кости обнаружения соот ветствующей ферментативн ой активности даже на фоне активно сти фермента хо зяина. Структурные характеристики гена ТК типич ны и для генов вируса герпеса, и для генов, экспрессируе мых в клетках высших эукариот. Ген ТК содержит 5'-концевую промоторно-регуляторную нетранскрибируемую област ь; транс крибируемую, но нетранслируемую 5-последов ательность; транс крибируемые и транслируемые по следовательности; З'-концевую транскрибируемую н етраслируемую область и З'-последователь ность, н еобходимую для полиаденилирования транскрипта. Из структурных свойств гена ТК два представляют особый инте рес. Во-первых, имеются два сайта инициации транскрипции — обнаружены мРНК, синтез которых инициируется с того и друго го сайта [55, 243, 338]. Роль этих сайтов в экспрессии гена пр и инфекции пока неясна. Другой интересной особе нностью является структура 5'-кон цевой нетранскри бируемой области. Мак-Найг с соавторами [195— 197] иде нтифицировали в пределах 150-нуклеотидной об ласти влево от сайта инициации (сайта кэпирозания) «прокси мальный» цис-действующий сайт и два «дисталъных» сайта, ко торые играют важную роль при конститутивной экспр ессии гена ТК и, вероятно, служат знаками пунктуаци и и являются участ ками связывания РНК-полимераз и вспомогательных факторов [338]. Цис-сайты со сходной функцией, необязательно идентич ные по последова тельности, по-видимому, присутствуют и в обла стях расположения других генов. Синтез и процессинг герпесных белков Герпесные белки синтезируются, по-видимому, и на свободных, и на связанных полисомах. Большинство белков, исследо ванных к настоящему времени, подвергается после с интеза интенсивному процессингу [27, 65, 88, 122, 230, 290]. Процессинг в ключает в себя разрывы цепи, фосфорилирование, сул ьфатирование, гликозилирование и т. п. Во многих случаях модификация стр уктуры белка сопровождается переносом белка через мембраны [191]. Имею щиеся данные о процессинге белков и его связи с их функ циони рованием будут подробно изложены в разделе, посвященном свойствам и функциям вирусных белков , а также в разделе, по священном вирусным гликопро теинам. Процессинг может идти н е только потому, что он нужен вирусу, — он может быть обу словлен сходством вирусных белков с природными с убстратами клеточных ферментов. Напри мер, гликопротеины HSV -1 и HSV -2 в клетках африканских зеле ных мартышек Vero расщ епляются протеолитическим ферментом хозяина, тог да как в клетках НЕр-2 этого фермента или совсем нет, или он отщепляет меньший фрагмент, чем протеаза в клет ках Vero [228, 229]. Хотя размножение вируса идет в клетках Vero не менее интенсивно, чем в кл етках НЕр-2, было показано,. что протеолитический фе рмент в клетках Vero от щепляет эпитоп на поверхности гликопротеина В, св язывающий одно из нейтра лизующих моноклинальны х антител [228, 229]. Свойства и функции гер песных белков Идентификация новой ф ункции, обнаруживаемой в заражен ной вирусом клет ке, или идентификация нового белка, выпол няющего ту или иную функцию, обычно основана на сочетании б иохимических и генетических методов. К сожалению, несмотря на объединенные усилия многих лабораторий, в настоящее врем я функции многих белков герпесвирусов остаются м алоизученными. Что касается альфа-белк ов, то условно-летальные мутанты найде ны только п о гену а4 [56, 156, 241, 245]. У HSV -1 бе лок а4 в де натурирующем полиакриламидном геле дае т три полосы, обозна чаемые 4а, 4Ь и 4с. В клетках, зараженных вирусом дикого т ипа, быстрее всех мигрирующий компонент 4а имеет кажущуюся мол. массу 160К и после импульсного радиоактивного мечения легк о обнаруживается в цитоплазме [230, 328]. Это единственны й ком понент, который накапливается при непермисс ивной температуре в клетках, зараженных некоторы ми мутантами по гену а4 [158]. Два других компонента, при сутствующие в полосах 4 b и 4с, име ют кажущиеся мол. массы 163К и 170К и накапливаются в ядре [230, 328]. Накопление медленно мигр ирующих компонентов сов падает по времени с транс локацией белка в ядро и включением; в белок добавле нного в среду неорганического 32 Р [69, 230]. Осо бенно интересно, что в ходе реп родуктивного цикла импульсная метка 33 Р может быть введена в состав а4-белков спустя замет ное время после прекращения синтеза этих белков. Это свиде тельствует об обмене фосфата между средой и белком в процессе заражения [328]. По данным Престона и Нотарианни [244], в изолированных ядрах а4 может подвергаться аденозилрибозили рованию. Пока трудно оценить, какое это может иметь значение, поскольку неизвестно, протекает ли эта р еакция при размноже нии вируса. Но именно таким ад енозилрибозилированием мож но объяснить включен ие в a 4 добавленного в среду неорганиче ского 32 Р [230], следует отметить, что ассоциация и диссоциация фосфата с белком характерны для а4, а22 и а27 [328], но тольк о для компонента 4с удалось наблюдать аденозилриб озилирование in vitro . Есть сообщение, что а4 свя зывается с ДНК лишь в присутствии белков клетки-хозяина [75]. Хэй Р. и Хэй Дж . [101] наблю дали миграцию альфа-белков в ядро и их про чное связывание с кле точным хроматином. Функции нескольких бета- белков связаны с синте зом вирусной ДНК. Белок бета 8 имеет мол. массу — 120К- Он обла дает сродством к одн оцепочечной ДНК [248], причем связывание с ней носит к ооперативный характер [269]. Мутанты с поврежде ниями в этом гене неспособны синтезировать вирусную ДНК при непермиссивной температуре [41, 91]. Среди других бета-белков сле дует назвать ТК [152], ДНК-полимеразу [239], ДНКазу [113, 146, 147, 206, 209, 242] и рибонуклеотидредуктазу [40, 126,. 127, 236]. Хотя все эти ферменты ду блируют функции клеточных фер ментов, по ряду свой ств они отличаются от последних. Вирусная ТК, например, характеризуется намного более широким набором субстратов по срав нению с соответствующим клеточным фермен том. Хот я ТК рассматривается как пиримидиндезоксикиназа, в действительности она фосфорилирует и пуринпентозиды, и шир о кий набор нуклеозидных аналогов, которые клеточ ная киназа эф фективно не фосфорилирует [132, 153, 155]. Эта особе нность ви русной ТК послужила основой для широког о использования нук леозидных аналогов при изуче нии экспериментальной и естест венной герпетической инфекции. Присутствие гена ТК существен но для нор мального размножения вируса при экспериментальной инфекции [72, 310], но не в клеточной культуре [152]. Это обстоятельство было использовано в ходе проводимого в посл ед ние годы изучения структуры генома HSV [235, 237, 238]. Мутан ты с повреждениями в гене ТК подразделяются на несколько групп. Некоторые из них теряют способность синтези ровать -функционирующую ТК, тогда как другие произ водят слишком малые количества фермента или производят фермент с более уз кой субстратной специфичностью, который не фос форилирует аналоги, используемые в целях отбора [50, 72, 240, 305]. Некото рые герпесвирусы (например, EBV , CMV ) не имеют своей специ фической ТК. ДНК-полимер аз а и рибонук леотидредуктаза тоже отличаются от соответствую щих клеточных ферментов. ДНК-полимераза п ослужил а объектом особенно многочисленных исследований вследствие ее необычайной чувствительности к ряду соединений, таких, как фосфоноацетат и фосфоноформиат. Описаны темпе ра турочувствительные мутанты HSV по ДНК-полимеразе [39, 250], некоторые из них устойчивы по отношению к ряду лекарственных препаратов, в том числе к фосфоноацетату [133, 249] и анал огам .нуклеозидов (например, ацикловиру) [46], ингибир ующим виру сы дикого типа. бета-полипептиды участ вуют в отключении синтеза альфа-белков и клеточны х белков и в индукции гамма-генов [118, 120]. Большинство идентифици рованных к настоящему времени гамма -белков являю тся компонентами вириона: на долю гамма-белков при ходится около полови ны известных продуктов генов HSV . С труктурные белки были идентифицированы как компоненты, выделяемые вместе с вирионами и капсидам и. Однако определенно известна функция всего лишь нескольких структурных белков. Некоторые структурные белки, синтезиру е мые на поздних стадиях инфекции, функционируют н а ранних стадиях; один или несколько из таких струк турных белков способствуют освобождению вирусной ДНК из капсидов и про хож дению ее через ядерные поры [12], участвуют в проц ессе отклю чения синтеза клеточных белков сразу п осле заражения [71, 253] и индуцируют экспрессию альфа-г енов [11, 238]. Применение генетическ их методов для идентификации функц ии генных продуктов Ключевым моментом в распоз навании функций вируса герпеса и в определении расположения кодирующи х их генов на генетических картах является исполь зование температурочувствительных ts -мутантов. К настоящему вре мени идентифицировано более 30 комплементационных групп (см. [324]), — это уже само по себе выдающееся достижение, ес ли учесть трудности отбора, тестирования и разнесения мутан тов по комплементационным группам. ts -мутанты оказались не обычайно полезны для картирования генов. Тем не менее этот подход к установлению вирусных функций и картиро ванию соот ветствующих генов наталкивается на цел ый ряд трудностей. Во-первых, многие вирусн ые гены, не играют существенной роли для размножен ия вируса в клеточной культуре в неселективных условиях. К ним относятся ген ТК, по край ней мере один из генов гликопротеин ов ( gC ) и, возможно, ген компонента вириона, отвечающего за отключение клеточных синтезов. Несм отря на все попытки ввести условно-летальные мута ции по альфа-генам, положительного результата удалось добиться только д ля гена a 4 . Это свидетельствует либо о том, что мн огие из этих генов несущественны для размножения вируса в клеточ ной культуре, либо о том, что участк и генов, важные для их функции, очень малы. Менее пра вдоподобное объяснение заклю чается в том, что поч ти все мутации такого рода оказываются: безусловн о-летальными. Как бы то ни было, выяснить функции этих генов путем констру ирования условно-летальных мутантов не удалось. Во-вторых, условно-леталь ные мутанты (например, ts -мутан ты), полученные неспецифическими мут агенными воздействиями, часто содержат большое ч исло молчащих нелетальных мутаций как по существ енным, так и по несущественным генам. Это не вызыва ет особых проблем, если можно сопоставить функции ге на , затронутого ts -мутацией при п ермиссивных и непермиссивных температурах. Напри мер, неспособность к синтезу вирусной ДНК при непе рмиссивной температуре легко обнаруживается даже в присутствии молчащих мутаций, которые меняют характер синт е за белков и при пермиссивных, и при непермиссивных те мперату рах. Проблема становится намного более се рьезной, хотя ее часто игнорируют, когда такое сопо ставление оказывается невозмож ным: например, так ие ситуации возникают, когда нужно прове рить способно сть ts -мутантов к латентному с уществованию в ге номе животного, температура тел а которого непермиссивна для роста таких мутанто в. В-третьих, влияние побоч ных нелетальных мутаций можно в принципе устранить, если использовать с айт-специфический му тагенез. Так, одним из способо в введения специфической мута ции является транс фекция клеток интактной вирусной ДНК ди кого типа вместе с фрагментом ДНК, содержащим мутантный ген, в результате чего этот ген включается в геном потомства ви руса. Известны случаи, когда геном вируса после такой трансфе к- ции содержал ts -повреждения генов в отдаленных сайтах. Это свидетельствует о возможности рекомбинации введенных фраг ментов с короткими, частично гомологичными нуклеотид ными участками, в результате чего нуклеотидная по следовательность в соответствующих сайтах измен яется. П ри этом возможно как возникновение, так и у трата мутации. В-четвертых, возможность использования ts -мут антов частич но зависит от эффективности их высев ания при пермиссивных и непермиссивных температу рах. Мутанты, дающие большую раз ницу в эффективности в ысевания вируса при пермиссивных и непермиссивны х температурах, могут иметь несколько точечных му таций. Хотя присутствие множественных мутаций в одном и том же гене не должно оказывать влияния на картирование гена .и идентификацию его функции, из-за него могут возн икать труд ности при картировании функциональных доменов генного про дукта. Пост и Ройзман [237] предложи ли способ, с помощью кото рого можно идентифициров ать гены, не существенные для раз множения вируса в клеточной культуре. Э тот способ, основанный на использовании селектив ного маркера (например, ТК), заключается в следующем. Путем трансфекции кл еток интактной ДНК дикого типа и фрагментом, содер жащим делению по гену ТК, .авторы получали потомств о вируса HSV -1 с делеци ей гена ТК (ТК). Далее, для проверки того, является ли какой-либо ген существенным для размножения в кле точной культуре, клетки трансфицировали геномной ДНК ТК-вируса и фрагментом, в котором в тестируемы й ген вставлен нормальный ген ТК. Если потомство, отобр анное по ТК + -фенотипу, несет вставле нный ТК-фрагмент в соответствующей части вирусно го генома, то это свидетельствует о том, что обрыв тестируемого гена не вл ечет за собой нарушения существенной функции. В качестве следующего эта па можно удалить весь этот ген или его часть путем совмест ной трансфекции клеток интактной ДНК, сод ержащей ТК-встав ку, и фрагментом, содержащим делец ию в исследуемом гене, с последующим отбором ТК-потомст ва. Таким способом сконст руировали вирусы, содерж ащие делецию по гену а22 и провели отбор вирусов, лиш енных внутренних инвертированных повторов, в состав которых входили ге ны а0 и а4 [235, 237]. Очевидно, эта процедура применима лишь к нес ущественным генам, которые не перекрываются с сущ ественными. Другой полезный прием з аключается во введе нии в клетки экспрессируемых векторов, содержащих индивиду альные вирусные гены по д контролем природных или искусствен ных промото ров. Примером служит ген ТК, который вводили под ко нтролем собственного и под контролем множества других ви русных и клеточных промоторов [28, 166, 192, 327]. Помимо ге на ТК HSV -1 существует ряд других легко экспрессируемых ви русных генов, которые мо жно вводить в клетки эукариот, в част ности несколь ко генов гликопротеинов [22, 191, 272]. С помощью подобного рода экспрессируемых векторов, несущих в себе сиг нал амплификации ДНК и энхансерные последователь ности, усиливающие транскрипцию генов герпесвирусов, можно получить множество сведений о функциях вирусных генов и под готовить путь к конструированию стабильных мутантов, содер жащих делеции специфических генов. Регуляция экспрессии герпесных генов Сложный характер размножения герпесвирусов и наблюдае мая наряду с этим воспроизводимость хода этого процес са навели на мысль о строгой регуляции всех происхо дящих при этом событий [256]. Механизм регуляции репликации вирусов остается интереснейшей областью исследован ий. Регуляция экспрессии ге нов герпесви русов работает по принципу каскада. В случае HSV он сводитс я к тому, что продукты альфа-генов вызывают индукцию бе та-генов, про дукты бета-генов выключают экспресси ю альфа-генов и индуцируют экс прессию гамма-генов, а продукты гамма-генов выключают экспрессию бета - генов и сразу же вслед за началом нового раунда заражения индуцируют экспрессию альфа-генов [11, 12, 118, 120, 238]. Количество генных продуктов при этом регули руется независимо и про цесс регуляции охватывает как транскрипционный, так и посттранскрипци онный уровни. Отдельные стороны регуляции репликации HSV могут служить ориентирами в изучении общих механизмов репликации: 1. Включение генов HSV содержит в себе три элемента: ви рус-специфический транс-действующий сигнальный белок (или несколько белков); цис-действующие регуляторные и промоторные последовательности и ферменты, необх одимые для осуществления транскрипции. 2. Транс-действующий фактор, необходимый для инду кции альфа-генов, по-видимому, заложен в одном или н ескольких структур ных белках вируса. Этот вывод с ледует из того, что химерные гены, состоящие из ст руктурной части гена ТК HSV -1, слитой с альфа-промоторными регулято рными областями HSV -1, после того как они встроены в геном клетки и придаю т ей ТК + -фенотип, ин дуцируются в условиях, которые препятствуют синтезу бел ков, кодируемых суперинфицирующим вирусом [11, 238]. Все альфа-гены содержат два набора общих последовате льностей в регулятор ных областях. Наибольшее вн имание привлекают (гуанин+цитозин)-инвертированные повторы, рас сеянные в виде многих копий возле гена а27 и выше сайта нача ла транскрипции альфа-генов [181]. В меньшем числе пре дставлены относительно (аденин+тимин) -богатые пос ледовательности, присутствую щие в регуляторных областях альфа-генов в одной или нескольких копия х [181— 183]. П оследовательности, содержащие (А+Т)-богаты й гомолог, наделяют конструкции из промотора и стр уктурной час ти гена ТК способностью подвергаться регуляции подобно альфа-ге ну; ( G + C ) -богатые области определяют конститутивный уровень экспрессии генов. Природу и функцию транс-действующего сиг нала, а также его способность к взаимодействию с регуляторной посл едовательностью и (или) с каким-либо клеточным фактором еще предстоит выяснить. 3. По крайней мере одним из транс-действующих белко в, не обходимых для синтеза бета- и гамма-белков в х оде инфекции и для ам плификации синтеза бета- и ге мма-белков под контролем встроенных в клеточный г еном вирусных генов, является белок а4. Это под твер ждается хотя бы тем, что бета-гены, не экспрессируемые интакт ной ДНК при заражении в отсутствие функционирующего а4-белка [55, 157, 172, 241], в то же время экспрессируются, ког да присутствуют в клетке в виде резидентных, или «врем енных» генов [238, 327]. Какая регуляция свойственна бета -генам: положи тельная, отрицательная или та и друга я? Ответа на этот вопрос пока нет. Клетки, несущие ре зидентные бета-гены (напри мер, ТК), обычно как раз и отбираются по экспрессии этих генов и поэтому могут быть использованы д ля отбора клеток, экспрессирующих бета-гены в отсутствие продукта гена а 4. Б елок а4 служит мощным индуктором, который может м одифи цировать продукты клеточных генов и взаимод ействовать с регу ляторными последовательностям и ДНК, а в случае, когда наблю дается индукция ранних генов аденовируса, б елок а4 выполняет функцию продукта аденовирусного гена Е1А. Это мнение вызы вает возражение по следующим четырем причинам: ранние гены аденовир уса могут экспрессироваться и в отсутствие продукта гена El А. [21, 212]; мутации по гену Е1А не являются условно- летальными в отличие от мутаций по гену а4 HSV [21, 137]; отсутст вие специ фичности индуцированных генов не воспроизводится в реципрок ных экспериментах [ 11]; нет ника ких убедительных объ яснений тому, что продукты ге нов вируса герпеса индуцируют только гены, введен ные в клетку путем трасфекции, и не индуци руют природн ые хромосомные гены. Очевидно, ответы на постав ле нные вопросы приблизят выяснение истинного механизма дей ствия гена a 4 . 4. Пока мало данных о продукте транс-де йствующего гена, ни о цис-действующих последовательностях ДНК, вовлечен ных в индукцию гамма-генов. Сообщалось, что химерны е гены, полу ченные путем слияния регулятора гамма -1-5-промотора с геном ТК, на основе которых получена линия клеток с ТК + -фенотипо м, ведут себя точно так же, как и истинные бета-гены [55]. В то же время вставка в ДНК HSV -1 гамма-2-промотора с 5'-конца в подходящей ориентации относительно структурной части гена ТК превращает этот ген в гамма-ген в том плане, что индукция ТК блокируется фос фоноацетат ом — ингибитором синтеза вирусной ДНК . Индукция п риродной бета-ТК не ингибирует ся, а лишь усиливает ся фосфоноацетатом [170]. 5. Данные о посттранскрипционном конт роле основаны на сообщениях о регуляции процесса транспорта, вирусных транскриптов в цитоплазму [138, 139, 161]. С тепень генетичес кой сложности РНК, накапли вающейся в ядрах клеток , зараженных HSV в прис утствии цик логексимида и поддерживаемых в среде, содержащей циклогек симид, существенно выше, чем в цитоплазме. 6. Представления о регуляции на уровне трансляции основаны на нескольких опытах. Особо с ледует отметить, что и по давление синтеза белков х озяина структурными компонентами вириона сразу п осле заражения [70, 214, 253], и подавление син теза продуктов альфа-генов появляю щимися позднее вирусными фак торами [69, 118] относятся к трансляционным событиям— они происходят даже п ри физической или химической энуклеации клеток. В ажный факт установлен в работах Рида и Френкеля [253]: он заключается в том, что структурные компоненты ви риона оказывают ингибирующее действие на синтез и клеточны х, и альфа-белков, поскольку мутанты, вирионы котор ых неспособны отключать клеточные гены, образуют продукты альфа -генов в боль шем количестве, чем вирусы дикого типа. Высказано п редполо жение, что мРНК генов, отключаемых по мере перехода от экс прессии альфа -гено в к экспрессии бета- и далее гамма-генов, остаются связан ными с полисомами. Синтез вирусной ДНК, сб орка и выход вируса из заражен ной клетки Репликация вирусной ДНК Отличительной особенностью герпесвирусов, которой нет ни у каких других ядерных ДНК-содержащих вирусов, явл яется не обычно большое число кодируемых ими ферм ентов, вовлеченных в синтез молекулы ДНК. Хотя посл едовательность событий при репликации вирусной Д НК в общих чертах известна, многие детали этого процесса еще предстоит и зучить. В клетках, зараженных HSV , синтез вирусной ДНК обнаруживается п римерно через 3 ч после заражения и продолжается по меньшей мере 9— 12 ч [263, 265]. ДНК синтезируется в ядре, но о кинетике синтеза ДНК судить трудно из-за возраст ания пула дезоксинуклеозидтрифосфатов, достигаю щего насыщения на ранних стадиях заражения. Поэто му, если измерять скорость синтеза вирусной ДНК путем исполь зования меченых дезоксинуклеозидов, она оказывается макси мальной уже на относительно ранних стадиях инфекц ии, В клетках, зараженных HSV -1, репликации лодвергается лишь небольшая часть всей ДНК родительс кого ви руса. Радиоактивно-меченая ДНК не содержит свободных концов, т. е. она имеет либо кольцевую, либ о конкатемерную («голова-к-хвосту») форму [129, 130]. Меченые предшественники вк лючают ся в молекулы, осаждающиеся с большей скоро стью, чем интакт ная двухцепочечная ДНК. В щелочном градиенте плотности са харозы полосы меченой ДНК в основном обнаружива ются в по зициях, характерных для небольших одноце почечных фрагмен тов. Сразу же после начала синтез а вирусной ДНК в полосах, соответствующих по полож ению в градиенте вирусной ДНК, об наруживается род ительская ДНК, а также кольцевые и разветв ленные л инейные формы. Далее по ходу репродуктивного цикла эти формы ДНК сменяются крупными, быстро седиментирующими к лубками ДНК- Имеющиеся данные указывают, что ДНК гер- пе свирусов, по крайней мере на поздних стадиях: инфекции, реп лицируется по механизму катящегося кольца [17, 129]. Первые данные о положен ии начальной точки репликации ДНК в геноме HSV были получены при изучен ии структуры де фектных геномов [80, 275]. Позднее в качес тве начальных точек репликации стали рассматривать те последовательно сти, которые должны входить в состав фрагмента ДНК HSV и обеспечивать его амплификацию в пермиссивных клетках, подвергш ихся транс фекции этим фрагментом вместе с интакт ной вирусной ДНК в роли помощника [201, 313]. Если принять это определение, то HSV -1 и, вероятно, HSV -2 содержат три начальные точки репли кации ДНК. Две из них поп адают в инвертированную с-последо-вательность S -компонента [8, 176, 201, 301, 302, 313], тогда ка к третья находится в середине L -компонента вблизи генов, коди рующих главный ДНК-связывающи й белок (|38) и ДНК-полиме разу [78, 177, 289]. Секвенирование начала р епликации S -компоне нта [210, 302, 320] свидетельствует о том, что все функции нач а ла репликации сосредоточены в отрезке ДНК длино й 90 b р, в со став котор ого входит почти идеально палиндромная АТ-богатая последовательность длиной 45 b р. Поскольк у участки начала реп ликации в составе S -компонента содержатся внутр и повторов, можно ожидать, что они идентичны. Относительно нуклеотидной последовательности н ачала репликации в составе L -компонента известно очень немного, од нако никакой гомологии фрагментов, содержащих на чальные точки репликации в S - и L -комп онентах, не обнаружено. Практически ничего не изве стно о том, как функ ционируют эти участки. Особенно важно установить, функциони руют ли какие-то из них или все они непосредственно в процессе репликации ви русной ДНК и насколько они эквивалентны или подчинены друг другу. В неко торых случаях петли в реплицирующейся ДНК HSV не совпадают с расположе нием начальных точек репликации [15]. Начальные точки репликации в составе S -компонента рас полагаются выше сайтов инициации транскрипции альфа -генов 4, 22 и 47 [1, 179, 322] и в то же время отличаются от главных после довательностей, регулир ующих экспрессию этих генов [43, 181 — 183, 201]. Созревание (процессинг) ДНК и сборка вирионов Сборка вирионов герпесв ирусов состоит из следующих стадий. 1 стадия. Сборка пустых ка псидов, накапливающихся в ядре. 2 стадия. Новосинтезированная вирусная ДНК процес сируется и упа ковывается в уже сформировавшиеся пустые капсиды. Созрева ние, или процессинг, включает в себя разрыв вирус ной ДНК, не имевшей свободных концов, — кольцевой или конкатемерной; возможна также инверсия L - и S -компонентов (характерная для HSV ). Д ля разрыва и уп аковки ДНК необходима вирусная альфа – последовательность [176]; упаковы вается правильно нарезанн ая ДНК, разрыв при нарезании прихо ходится на альфа -последовательность и альфа -последовательность необ хо дима для размножения дефектных геномов [302 ]. Согласно упрощенной модели, ос нованной на структуре кон цов ДНК HSV -1, разрыв молекул-предшественников с образова нием нужных для упаковки фрагментов стандартной длины п ро исходит во второй дистальной последовательно сти DR 1 на конце S -компонента, причем эта последовательность DR 1 — общая для двух соседних альфа – последовательностей [200]. 3 стадия. Сформировавшиеся в ядре ДНК-содержащие ка псиды при крепляются к модифицированным внутренн им ламеллам ядерной мембраны, из которых формируе тся оболочка вируса. Относительно места, где вирионы герпесвирусов п окрыва ются оболочкой, нет единого мнения. Почти в се исследователи согласны, что начальная стадия э того процесса протекает на внутренних ламеллах. В месте с тем многие авторы наблюдали капсиды на мо дифицированных участках цитоплазматических ме мбран в момент их одевания (или раздевания) и отсюда сде лали вывод, что оболочка вируса формируется в цитоплазме. Стэкпоул [298] выдвинул идею, согласно которой капсиды оде ваются в оболоч ку на внутренних ламеллах, на внешних ламел лах вы ходят из оболочки и снова одеваются, когда попадают в эндоплазматический ретикулум; выход вируса в межклеточное пространство либо сопровождается новым одеванием вируса уже на плазматической мембране, либо представляет собой про цесс слияния пузырьков, несущих в себе одетый в оболочку вирус, с плазматической мембраной. Большое число частиц, одеваем ых в оболочку в цитоплазме,— достаточно серьезны й факт, с кото рым нельзя не считаться. Следует отметить, что на тонких срезах формирование оболоч ки вокруг капсида на ядерной мембране наблюдается исключи тельно редко; видимо, процесс одевания кап сида в оболочку про текает очень быстро. Поскольку каждый капсид, одевающийся в оболочку в цитоплазм е, должен пройти через процесс одевания и раздеван ия в ходе переноса через ядерную мембрану, несовпаде н ие числа капсидов, одеваемых в оболочку на ядерных и цито плазматических мембранах, может объясняться либо тем, что скорость одевания капсида на ядерных мембранах мн ого выше, чем на цитоплазматических, либо тем, что к апсиды, скапливающиеся на цитоплазматических мембранах представляют собой капсиды, теряющие оболочку, или капси ды, одевание которых было прервано. Таким образом, прин ципи ально важный вопрос о том, являются ли полуод етые цитоплаз матические капсиды промежуточными продуктами процесса оде вания или просто дефектн ыми структурами, частично утративши ми оболочку, п ока остается без ответа. Интересно, что полуоде ты е цитоплазматические капсиды преобладают в линиях непре рывно делящихся клеток и сравнительно редки в первичных ди плоидных клетках человека. Выход вируса из клетки В цитоплазме интактные одетые вирусные частицы обычно находятся в везикулах, окруженных мембранами [51, 123]. Это вполне естественно, поскольку структуры, окруженн ые слоем гли копротеинов, вряд ли могут быть стабил ьны в незащищенном ви де в цитоплазме. На нескольких электронных микроф отографиях были видны трубчатые структуры; возмо жно, в некоторых клет ках рассматриваемые структу ры представляют собой цистерны цитоплазматического ретикулума, соедин енные с плазматической мембраной [277]. Высказывалось предположение, что вы ход ви руса из клетки идет по механизму, близкому к обратному фаго цитозу , — имеется в виду направление движения,,а не его меха ника. Как предполагают Джонсон и Спеар [134] на основании опытов с использованием монензина, вирионы секретируютс я че рез аппарат Гольджи, следуя по тому же пути, что и секретвруе- мые растворимые белки [135]. Роль вирусных гликоп ротеинов в процессах сборки, приобретения инфек ционной активности и выхода вируса из зараженны х клеток В клетках, зараженных HSV , все идентифициров анные к на стоящему времени вирусные мембранные б елки оказались глико зилированы. В то же время в кле тках, зараженных EBV и дру гими герпесвирусами, найден негликозилирова нный мембранный белок. Согласно имеющимся данн ым, биосинтез гликопротеинов герпесвирусов в общих чертах идет так же, к ак и биосинтез глико зилированных белков эукариот ических клеток [34, 291]. Негликозилированные предшественники мембранных бе лков герпесви русов синтезируются на полисомах, с вязанных с шероховатым эндоплазматическим ретик улумом. Процесс гликозилирования включает в себя и трансляционные, и пос ттрансляционные модификации . Так, N -гликозилирование инициируе тся переносом ранее сформировавшихся гликанов ( глюкоза-3-манноза- N -(а це тилглюкозамин) 2 ) с долихолфосфатного липидного переносчика на остатки аспарагипа в составе последовательности Asn — X — Thr / Ser новосинтезированного полип ептида (на месте X мо жет стоять любая аминокислота) [173, 188, 309]. После этого ол иго сахаридные цепи по мере прохождения через апп арат Гольджи укорачиваются глюкозидазами, манноз идазами, что приво дит к образованию полиманнозил ьных цепей, часто называемых высокоманнозными гл иканами [125, 296]. Эти гликаны под дей ствием гликозилтр ансфераз чаще всего превращаются в гликаны сложн ого типа, содержащие пентасахаридный ствол (манноза за) 3 — ( N -ацетилглюкозамин) 2 ] и ряд боковых ответвлений, имеющих состав: сиаловая кислота — галактоза — глюк озамин. Фукоза в тех случаях, когда она присутствуе т, присоединяется к уже сформированным цепям 124]. O -гликозилирование наблю дается реже [35, 134, 213, 220, 283]; оно инициируется перено сом N -ацетилгалакто замина на гидроксильную группу треонина или сери на, после чего в аппарате Гольджи добавляются еще галак тозамин, N -ацетилглюкозамин, фукоза и сиаловая кислота [20]. Степень гликозилирования и конкретная структура сложных гликанов зависят от конформации белка вблизи сайт а гликозили рования, поскольку от этого зависит до ступность белка фермен там, участвующим в процесс инге. Конформационными характе ристиками белка м ожет объясняться и гетерогенность гликанов, прис оединенных к данному белку. Информация о структуре гликанов HSV собрана в обзорах [34, 291]. Известно, что в составе гликопротеинов, ко дируемых HSV -1, найдены и высокоманнозные N -связанные, и О-связанные, и сложные гетерогенные гл иканы. N -гликозилирование необходимо для инфекционно сти вируса. Это следует из того, что туникамицин, блокирующий N -гликозилирование, препятствует одеванию вируса в оболочку [225, 231, 232]. Пре вращение высокоманнозных гликанов в гли каны сложного типа необходимо для выхода вируса из зараженной к летки, но не для самой инфекционности [35, 134, 160, 279]. Индуцируемое HSV слияние клеток тоже требует усло вий, благоприятствующих формированию сложн ых гликанов, но в этом случае неясно, должны ли слож ные гликаны входить в со став вирусных гликопроте инов, присутствовать на поверхности зараженных клеток или на поверхнос ти как зараженных, так if тех незараженных клеток, с которыми сл иваются зараженные при формировании поликариоци тов. Судьба зараженной клет ки Клетки, продуктивно з аражаемые герпесвирусами, не выжи вают. Почти с сам ого начала репродуктивного цикла зараженные клет ки подвергаются крупным структурным и биохимическим изменениям, в конце концов приводящим к их разрушению. Структурные изменения заражённой вирусом герпеса клетки. Как описано в обзоре [262], самые ранние изме нения происходят с ядрышком клетки; оно увеличивается в разм ере, сме щается ближе к ядерной мембране и в конце к онцов распадается на фрагменты. Параллельно прои сходит маргинация клеточных хромосом, а на более п оздних стадиях заражения наблюдаются искажение ф ормы ядра и его сегментация. Такого рода искаже ни я и появление разного рода «выростов» ранее ошибочно прини мали за амитотическое деление [142, 278]. Маргинация хромосом не всегда сопровождается их разрывами, о которых сооб щали многочисленные исследователи, но они возмож ны [262]. Для поздних стадий заражения характерно изменени е вида, клеточных мембран, в особенности ядерных. На вну тренней по верхности мембраны (обращенной к нукле оплазме или цитоплазме, но не к просвету между внутренними и внешними ла меллами или к просвету цистерн эндоплазматическо го ретикулума) проис ходит накопление материала и формирование утолщений вдоль мембраны. В конце ко нцов утолщенные участки ядерной мембра ны сливаю тся и накладываются один на другой, создавая впечат ление редупликации мембран. Метаболизм клеточных макромолекул Для клеток, зараженных герпесвирусами, характерно быстрое в ыключение метаболизма собственных макромолекул уже на ранней стадии заражения. Например, прекращается синтез кле точной ДНК, как это наблюдается при заражении виру сом псев добешенства [18,144], HSV [5,263], EHV -1 [219] и EBV [86, 217]. Очень быстро падает такж е синтез клеточных белков- [265, 306, 307] и одновременно пре кращается их гликозилирова ние[106, 109, 295]. Влияние заражения вирусом герпеса на метаболизм клеточной РНК представляется более разнообразны м [262]. Спад синтеза РНК относится не ко всем видам РНК . Синтез 4 S - PHK ингиби руется сильнее, чем синтез РНК, более крупных чем 28 S . Хотя с интез рибосомной РНК почти полностью подавляется, синтез и метилирование 45 S -предшественника рибосомной РНК продол жается [317]. Синтез нерибосомных РНК тоже продолжается, но в син тезе белков эти РНК не используются [317]. Роль продуктов вирусны х генов в подавлении метаболизм а клеточных макромолекул Имеющиеся данные, отно сящиеся к экспрессии клеточных функций в заражен ной клетке, в основном касаются синтеза кле точных белков в клетках, зараженных HSV . Из этих данных сле дует, что отключение синтеза белков проте кает по меньшей мере в две стадии. Первая стадия проте кает при участии структурных ви русных белков и не требует син теза новых белков. Н апример, отключение синтеза клеточных белков при заражении HSV наблюд ается в клетках, подвергших ся физической или хими ческой энуклеации [69]; способность к -такому отключению сохраняется у виру са, очищенного в гради енте плотности, но утрачивается, если очищенный ви рус подверг ся тепловой инактивации или нейтрализации антителами. Откл ю чение клеточного синтеза идет намного быстрее и эффективнее при заражении HSV -2 по сравнению с HSV -1; это побудило ис следователей к поиску с помощью рекомбинантов HSV -1 XHSV -2 генет ического локуса, обеспечивающего ускорение процесса от ключения при заражении вирусом HSV -2 [71]. Вероятно, самым сильным св идетельством в пользу существования структурных компонентов, отключающих синтез клеточных белков, послужило выделение vhs -мутантов (от англ. virion host shutoff ) HSV , не спо собных отключать клеточный синтез полипептидов [253]. Вторая стадия наступает после того, как начинается синтез новых белков [69, 118, 120, 214, 216, 284]. Отключение клеточного синтеза совпадае т по времени с синтезом (3-белков, но не исклю чена так же возможность, что оно все же определяется продукта ми гамма, а не бета-генов. Механизм, с помощью котор ого HSV различает син тез вирусных и клеточных белков и отключает последний, неизвестен. Экспе риментально доказано, что в клетках, трансформиро ванных вирусом лейкоза пос ле его индукции димети лсульфоксидом, деградация глобиновой мРНК сопряж ена с синтезом белков HSV , тогда как распад кле точных полисом по сле заражения от него не зависит [214— 216]. Рид и Френке ль [253] предположили, что на ранних стадиях от ключение синтеза белков комп онентами вириона происходит без заметной дискриминации между синтезом вирусных и клеточных белков; они обнаружили, что в клетках, зараженных vhs -мутан тами, синтез альфа-белков тоже ус иливается. Это может означать, что на первой стадии действуют вирусные факторы, подавляющие синтез л юбых белков, и лишь на более поздней стадии появляют ся продукты вирусных генов, способные к дифференцированном у подавлению синтеза клеточных, но не вирусных белков. Физиоло гическая роль ранней стадии подавления с интеза белков остается неясной; дело еще в том, что в природных условиях заражение клеток происходит при очень низком отношении числа вирусных частиц к чи слу клеток, тогда как для экспериментального изуче ния подавления вириона компонентами синтеза клеточных бел ков используют множественность заражения порядк а >500 вирионов на клетку. Вообще говоря, наблюдавш иеся до сих пор изменения кле точного метаболизма большей частью представляют собой круп ные наруш ения метаболизма макромолекул; возможно, что они отражают вызванные вир усом специфические изменения функции определенн ых макромолекул. Одним из них, возможно, является о бусловленное вирусом усиление фосфорилирования одного из двух полипептидов, ассоциированных с малыми субчастицами ри босом [70, 149]. Сообщалось также, что один из стабильных к ле точных белков с мол. массой ~ 130К после заражения т еряет способность связываться с ДНК и что утрата э той способности сопряжена с действием поздних бе та- или гамма- генов HSV [3]. Пока трудно сказать, какое значение могут иметь все эти наблюдени я, но они открывают новые возможности для отбора му тантов, с по мощью которых в дальнейшем может проясниться значение для репродукции вируса происходящих при заражении мо дификаций. Вызванные вирусом изме нения клеточных мембран Первые подозрения о модифи кации герпесвирусами клеточных мембран возникли после того, как были обнаружены мутанты вируса В обезьяны, а также PSV и HSV , которые отличались от ви русов дикого типа по их воздействию на клетки. Если вирусы дикого типа обычно приводят к округлению и агрегации клеток, то мутантные вирусы вызывают сл ияние клеток в поликариоци ты [255]. На основании этих наблюдений возникла идея о том, что герпесвирусы меняю т структуру и антигенные свойства кле точных мемб ран; и действительно, в дальнейшем 'были получены прямы е данные об изменении антигенной специфичности цито плазматических и плазматических мембран зараженных клеток [263, 274] и о присутствии в них вирусных гликопротеинов [108, 109, 295]. Наши знания относительн о созревания, метаболизма и функ ционирования вир усных гликопротеинов пока не позволяют су дить о т ом, зачем нужно присутствие вирусных гликопротеинов на поверхности зараженной клетки; случайное ли это явление, обусловленное естественным перемещением связанн ых с мембра нами белков, или это выработанная в ход е эволюции защита ви руса от нейтрализации антите лами при его переносе из клетки в клетку. Как бы то н и было, у зараженной клетки изменяется ан тигенная специфичность, и она становится мишенью для разру шающего действия иммунной системы. Существует группа мутац ий syn -, обусловливающих измене ния в характер е взаимодействия плазматических мембран зара же нных клеток, что отражается на их «социальном поведении»; на генетических картах они оказались распределены по неско ль ким генетически независимым участкам генома HSV . Лишь одна из них локализована в области гена, кодирующего гликопро теин [186, 270], хотя можно полагать, что все они расположе ны в ге нах, кодирующих белки, способные связывать ся с мембранами. Множественность генетических ло кусов, мутации которых вызы вают слияние зараженн ых клеток, может отражать то обстоя тельство, что в ирусные мембранные белки образуют многокомпо не нтные комплексы, и мутация, затрагивающая любой из компо нентов комплекса, может изменять структуру и функцию всего комплекса в целом [270]. Важное значение могут им еть и вторичные проявления изме нений в клеточных мембранах. В частности, в нескольких рабо тах [141,317,335] с ообщалось об утечке макромолекул из клеток после их заражения вирусами PSV и HSV . При изучении клеток, зараженных вирусом псевдобешенства [141, 335], было сделано заключение, что эта утечка вызвана продуктами виру сных генов, появляющимися через 4 ч после заражения . Повышенная утечка макромолекул должна сопровож даться изменением в распреде лении электролитов, а также проникновение м в клетку молекул, для которых прежде она была неп роницаема. Изменение в рас пределении электролитов должно отразиться н а значении транс мембранного потенциала [83]. Возмож ность усиленного притока молекул извне была пока зана в опы тах с использованием бензгидразона — ингибитора гликозилирования в клетках, зараженных HSV [312]. Действие ингибитора легко обнар уживается по тому, что в его присутствии мутанты syn - уже не вызывают слияния клеток. Пока найден лишь один му тант, устойчивый к эт ому ингибитору, причем эта устойчивость в одних кл етках проявляется, а в других нет. Особенно обращают на себя внимание свойственные этому мутанту задержка или сн ижение скорости синтеза продуктов гамма-генов; это согласуется с ги пот езой о том, что ингибитор проникает в клетки, зараженные чувствительным к нему вирусом, но при наличии мутаций, при водящих к задержке или снижению скорости синтеза м ембран ных белков, его приток в клетку оказывается затруднен и глико зилирование вирусных гликопрот еинов идет обычным образом [312]. Замедление и последующее прекращение синтеза белков в за раженной клетке м ожно, по крайней мере частично, объяснить модификацией клеточных мембра н, вызывающей утечку макромолекул и изменение концентрации электролит ов. Однако, учиты вая то обстоятельство, что изучен ие метаболизма макромоле кул на ранних стадиях за ражения обычно проводят в условиях, когда на клетку при ходится более 500 вирионов и оболочки этих вирионов после проникновения вирусов оказываются в составе плазматической мембраны [221], встает вопрос, не связан ли дисбаланс электролитов с подобного рода сосредоточе нием ви русных оболочек в отдельных участках плаз матической мембра ны, и не этим ли объясняется подавле ние синтеза клеточных и ви русных белков, которое обычно приписывают действию компо нентов вирион а. ЛИТЕРАТУРА . 1. Anderson К . P., Costa R., Holland L., Wagner E. (1980). Characterization of HSV-1 RNA present in the absence of de novo protein synthesis, J. Virol., 34, 9— 27. 2. Armstrong J. A., Pereira H. G., Andrewes С . И . (1961). Observations of the virus of infectious bovine rhinotracheitis and its affinity with the herpesvi- rus group, Virology, 14, 276— 285. 3. Arsenakis M., Roizman B. (1984). A post a gene turns off the capacity of host protein to bind DNA in cells infected with herpes simplex virus I, J. Virol., 49, 813— 818. 4. Asher Y., Heller M., Becker Y. (1969). Incorporation of lipids into herpes simplex virus particles, J. Gen. Virol., 4, 65— 76. 5. Aurelian L., Roizman B. (1965). Abortive infection of canine cells by herpes simplex virus. II. The alternative suppression of synthesis of interferon and vira'l constituents, J. Mol. BioL, U, 539— 548. 6. Bachenheimer S. L., Roizman B. (1972). Ribonucleic acid synthesis in cells infected with herpes simplex virus. VI. Polyadenylic acid sequences in viral messenger ribonucleic acid, J. Virol., 10, 875— 879. 7. Barahona H. H., Melendez L. V., King N. W., Daniel M. D., Fraser C. E. O., Prevtlle A. E. (1973). Herpesvirus aotus type 2: A new viral agent from owl monkeys (Aotus trivirgatus), J. Infect. Dis., 127, 171 — 178. 8. Barnett J. W., Eppstein D. A., Chan H. W. (1983). Class I defective herpes simplex virus DNA as a molecular cloning vehicle in eucaryotic cells, J. Vi rol., 48, 384— 395. 9. Bartkoski M. J., Jr., Roizman B. (1976). RNA synthesis in cells infected with herpes simplex virus. XIII. Differences in the mcthylation patterns of viral RNA during the reproductive cycle, J. Virol., 20, 583— 588. 10. Bartkoski M. J., Jr., Roizman B. (1978). Regulation of herpesvirus macro molecular synthesis. VII. Inhibition of internal melhylation of mRNA late in infection, Virology, 85, 146— 156. 10. Batterson W., Roizman B. (1983). Characterization of the herpes simplex virion-associated factor responsible for the induction of a genes, J. Viral., 46,371— 377. 11. Batterson W., Furlong D., Roizman B. (1983). Molecular genetics of herpes simplex virus. VII. Further characterization of a ts mutant defective in release of viral DNA and in other stages of viral reproductive cycle, J. VI rol., 45. 397— 407. 12. Baucke R. В ., Spear P. G. (1979). Membrane proteins specified by herpes simplex virus. V. Identification of an Fc-bmdmg glycoprotein, J. Virol., 32, 779— 789. 13. Bayliss G. J., Marsden H. S., Hay J. (1975). Herpes simplex virus: DNA- binding proteins in infected cells and in the virus structure, Virology, 68, 124— 134. 14. Becker Y., Dym H., Sarou I. (1968). Herpes simplex virus DNA, Virology, 36, 184— 192. 15. Ben-Porat Т ., Kaplan A. S. (1971). Phospholipid matabolism of hcrpesvi rus-infected and uninfected rabbit kidney cells, Virology, 45, 252— 264. 57. Ben-Porat Т ., Tokazewski S. (1977). Replication of herpesvirus DNA. II. Sedimentation characteristics of newly synthesized DNA, Virology, 79, 292— 301. 18. Ben-Porat Т ., Rakusanova Т ., Kaplan A. S. (1971). Early functions of the genome of herpes virus. II. Inhibition of the formation of cell-specific poly somes, Virology, 46, 890— 899. 19. Ben-Porat Т ., Veach R. A., Ihara S. (1983). Localization of the regions of homology between the genomes of herpes simplex virus type 1 and pseudo rabies virus. Virology, 127, 194— 204. 20. Berger E. C., Buddecke E., Kamerting J. P., Kobala A., Paulson J. C., Vliegenthart J. F. C. (1982). Structure, biosynthesis and functions of gl ycopro tein glycans, Experientia, 38, 1129— 1162. 21. Berk A. J., Lee F., Harrison Т ., Williams J., Sharp P. A. (1979). Pre-eariy adenovirus 5 gene product regulates synthesis of early viral messenger RNAs, Cell, 17, 935— 944. 22. Berman P. W., Dowbenko D., Lasky L., Simonsen С . С . (1983). Detection of antibodies to herpes simplex virus with a continuous cell line expressing cloned glycoprotein D, Science, 222, 524— 527. 23. Beyer T. A., Sadler J. E., Rearick J. L, Paulson. J. C., Hill R. L. (1981). Glycosyltransferases and their use in assessing oligosaccharide structure and structure-function relationship, Adv. Enzymol., 52, 123— 175. 24. Biswal N., Murray B. K., Benyes h-Melnick M. (1974). Ribonucleotides in newly synthesized DNA of herpes simplex virus, Virology, 61, 87— 99. 25. Braun D. K., Batterson W., Roizman B. (1984). Identification and genetic mapping of a herpes simplex virus capsid protein which binds DNA, J. Virol., 50, 645— 648. 26. Braun D, K.., Roizman В ., Pereira L. (1984). Characterization of posttrans lational products of herpes simplex virus gene 35 proteins binding to the surface of full but not empty capsids, J. Virol, 49, 142— 153. 27. Braun D., Pereira L., Norrild В ., Roizman B. (1983). Application of denatu red, electrophoretically separated, and immobilized lysates of herpes simplex virus-infected cells for the detection of monoclonal antibodies and for stu dies of the properties of viral proteins, J. Virol., 46, 103— 112. 28. Brinster R. L., Chen H. Y., Warren R., Sarthy A., Palmiter R. D. (1982). Regulation of metallothionein-thymidine kinase fusion plasmids injected into mouse eggs, Nature, 296, 39— 42. 29. Buchman Т . G., Roizman В . (1978). Anatomy of bovine mammillitis DNA. I. Restriction endonuclease maps of four populations of molecules that differ in the relative orientation of their long and short components, J. Virol., 25, 395— 407. 30. Buchman T. G., Roizman B. (1978)- Anatomy of bovine mammillitis DNA. II. Size and arrangements of the deoxynucleotide sequence, J. Virol., 27, 239— 254. 31. Buchman T. G., Roizman В ., Nahmias A. J. (1979). Exogenous genital rein fection with herpes simplex virus 2 demonstrated by restriction endonuclease fingerprinting of viral DNA, J. Infect. Dis., 140, 295— 304. 32. Buchman T. G., Roizman В ., Adams C., Stover H. (1978). Restriction endo nuclease fingerprinting of herpes simplex DNA: A novel epidemiology tool applied to a nosocomial outbreak, J. Infect. Dis., 138, 488— 498. 33. Buchman T. G., Simpson Т ., Nosal C., Roizman В ., Nahmias A. J. (1980). The structure of herpes simplex virus DNA and its application to molecular epidemiology, Ann. NY Acad. Sci., 354, 279— 290. 34. Compadelli-Fiume G., Serafini-Cessi F. (1984), Processing of the oligosac- charide chains of herpes simplex virus type 1 glycoproteins. In: Herpesviru ses, Vol. 3, ed. by B. Roizman, Plenum Press, New York. 35. Campadelli-Fiume G., Poletti L., Dall'Olio F., Serafini-Cessi F. (1982). Infectivity and glycoprotein processing of herpes simplex virus type 1 grown in a ricine-resistant cell line deficient in W-acetylglucosaminyl transferase L J. Virol., 43, 1061— 1071. 36. Cassai E. A'., Sartniento M., Spear P. G. (1975). Comparison of the virion proteins specified by herpes simplex virus type 1 and 2, J. Virol., 16, 1327— 1331. 37. Cebrian /., Bucchini D., Sheldrick P. (1983). Endless viral DNA in cells infected with channel catfish virus, J. Virol., 46, 405— 412. 38. Cebrian J., Kaschka-Dieric h C., Berthelot N., Sheldrick P. (1982). Inverted repeat nucleotide sequences in the genomes of Marek disease virus and the herpesvirus of the turkey, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 79, 555— 558. 39. Chartrand P., Crumpacker C. S., Schaffer P. A., Wilkie N. M. (1980). Phy sical and genetic analysis of the herpes simplex virus DNA polymerase locus, Virology, 103, 311— 325. 40. Cohen J. C,, Henry B. E., Randall C. C. O'Callaghan D. J. (1977). Ribonuc leotide reductase activity in hydroxyurea resistant herpesvirus replication, Proc. Soc. Exp. Biol. Med., 155, 395— 399. 41. Conley A. F., Knipe D. M., Jones P. C., Roizman B. (1981). Molecular gene tics of herpes simplex virus. VII. Characterization of a tempe rature-sensitive mutants produced by in vitro mutagenesis and defective in DNA synthesis and accumulation of 4 polypeptides, J. Virol., 37, 191— 206. 42. Constanzo F., Campadelli-Fiume G., Foa-Tomas L., Cassai E. (1977). Evi dence that herpes simplex virus DNA is transcribed by cellular RNA poly merase II. J. Virol., 21, 996— 1001. 43. Cordingley M. G., Campbell M. E. M., Preston C. M. (1983). Functionalanalysis of a herpes simplex virus type 1 promoter: Identification of far upstream regulatory sequences, Nucleic Acids Res., 11, 2347— 2365. 44. Costa R. H., Devi B. G., Anderson K. P., Gaylord B. H., Wagner E. K. (1981). Characterization of a major late herpes simplex-virus type 1 mRNA, J. Virol., 38, 483— 496. 45. Courtney R. L, Powell K. L. (1975). Immunological and biochemical charac terization of polypeptides induced by herpes simplex virus type 1 and 2. In: Oncogenesis and Herpesviruscs, Vol. II, ed. by G. dehe ct al., p. 63, International Agency for Research on Cancer, Lyon, France. 46. Crumpacker C. S., Chartrand P., Subak-Sharpe L H., Wilkie N. M. (1980). Resistance of herpes simplex virus to acycloguanosine-genetic and physical analysis, Virology, 105, 171— 184. 47. Dales S., Chardonnet У . (1973). Early events in the interaction of adenovi ruses with HeLa cells. IV. Association with raicrotubules and the nuclear pore complex during vectorial movement of the inoculum, Virology, 56, 465— 483 48. Daniel M. D., Melendez L. V., King N. W., Barahona H. H., Fraser С . Е . 0., Garcia F. G., Silva D. (1973). Isolation and characterization of a new virus from owl monkeys: Herpesvirus aotus type 3, Am. J. Phys. Anthropol., 38, 497— 500. 49. Daniel M. D., Mel endez L. V., King N. W., Fraser C. E. O., Barahona H. H., Hung R. D., Garcia F. G. (1971). Herpesvirus aotus: A latent herpesvirus from owl monkeys (Aotus trivirgatus) — Isolation and characterization, Proc. Soc. Exp. Biol. Med., 138, 835— 845. 50. Darby G., Field H. Л , Salisbury S. A. (1981). Altered substrate specificity of herpes simplex virus thymidine kinase confers acyclovir resistance, Natu re, 289, 81— 83. 51. Darlington R. W., Moss L. H., Ill (1969). The envelope of herpesvirus, Proc. Med. Virol., 11, 16— 45. 52. Davison, A. L, Wilkie N. M. (1981). Nucleotide sequences of the joint between the L and S segments of herpes simplex virus type 1 and 2, J. Gen. Virol., 55, 315— 331. 53. Davison A. J., Wilkie N. M. (1983). Location and orientation of homologous sequences in the genomes of. five herpes viruses, J. Gen. Virol., 64, 1927— 1941. 54. Delias H., Clements J. B. (1976). A partial denaturation map of herpes simplex virus type 1 DNA: Evidence for inversions of the unique DNA regions, J. Gen. Virol., 33, 125— 133. 55. Dennis D., Smiley I. R. (1984). Transactivation of a late herpes simplex virus promoter, Mol. Cell. Biol., 4. 544— 551. 56. Dixon R. A. F., Schaffer P. A. (1980). Fine structure mapping and functional analysis of temperature-sensitive mutants in the gene encoding the herpes simplex virus type 1 immediate early protein VP175, J. Virol., 36, 189— 203. 57. Dolyniuk M., Pritchett R., Kieff E. (1976). Proteins of Epstein-Barr virus. I. Analysis of the polypeptides of purified enveloped Epstein-Barr virus, J. Virol., 17, 935— 949. 58. Draper K. G., Frink R. J., Wagner E. K. (1982). Detailed characterization of an apparently unspliced | herpes s implex virus type 1 gene mapping in the interior of another, J. Virol., 44, 1123— 1128. 59. Dumas A. M., Geelen J. L. M. C., Marts W., Van der Noordaa J. (1980). Infectivity and molecular weight of varicella-zoster virus DNA, J. Gen. Virol., 47, 233— 235. 60. Ebeling A., Keil G., Nowak В ., Fleckenstein В ., Berthelot N., Sheldrick P. (1983). Genome structure and virion polypeptides of the primate herpes virus— herpesvirus aotus type 1 and 3. Comparison with human cytome galovirus, J. Virol., 45, 715— 726. 61. Edson C. M. Thorley-Lawson D. A. (1983). Synthesis and processng of the three major envelope glycoproteins of Epstein-Barr virus, J. Virol., 46, 547— 556. 62 Epstein M. A. (1962). Observations on the mode of release of herpes virus from injected HeLa cells, J. Cell. Biol., 12, 589— 597. 63. Epstein M. A., Holt S. J. (1963). Adenosine triphosphatase activity at the surface of mature extracellular herpes virus, Nature, 198, 509— 510. 64. Epstein M. A., Henle W., Achong B. G., Barr У . М . (1965). Morphological and biological studies on a virus in cultured lymphoblasts from Burkitt's lymphoma, J. Exp. Med., 121, 761— 770. 65. Erickson J. S., Kaplan A. S. (1973). Synthesis of proteins in cells infected with herpesvirus. IX. Sulfated proteins, Virology, 55, 94— 102. 66. Folk L., Deinhardt F,, Nonoyama M,, Wolfe L. G., Bergholz C., Lapin В ., Yakouleva L,, Agrba V., Hente G., Henle W. (1976). Properties of a baboon lymphotropic herpesvirus related to Epstein-Barr virus, Int. J. Cancer, 18, 798— 807. 67. Falke D., Siegert R,, Vogell W. (1959). Elektronenmikroskopische Beiunde zur Frage der Doppelmembranbildimg des Herpes-simplex-virus, Arch. es. Virusforsch, 9, 484— 496. 68. Feldman L. Т ., Imperials M. J., Nevins J. R. (1982). Activation of early adenovirus transcription by the herpesvirus immediate early gene: Evidence for a common cellular control factor, Proc. Natl. Acad, Sci. USA, 79, 4952— 4956. 69. Fenwick M., Roizman B. (1977). Regulation of herpesvirus macromolecular synthesis. VI. Synthesis and modification of viral polypeptides in enucleated cells, J. Virol., 22, 720— 725. 70. Fenwick M. L., Walker M. f. (1978). Suppression of the synthesis of cellu lar macromolecules by herpes simplex virus, J. Gen. Virol., 41, 37— 51. 71. Fenwick M., Morse L. S., Roizman B. (1979). Anatomy of herpes simplex virus DNA. XI. Apparent clustering of functions effecting rapid inhibition of host DNA and protein synthesis, J. Virol., 29, 825— 827. 72. Field H. J., Wildy P. (1978). The patbogenicity of thymidine kinase-defi cient mutants of herpes simplex virus in mice, J. Hyg. (Lond.), 81, 267— 277. 73. Fleckenstein В ., Bornkamm G. W. f Mulder C., Werner F.-J., Daniel M. D., Falk L, A,, Delius H. (1978). Herpesvirus ateles DNA and its homology with herpesvirus saimiri nucleic acid, J. Virol., 25, 361— 373. 74. Fong C. K. Y., Tenser R. В ., Hsiung G. D., Gross P. A. (1973). Ultrastruc tural studies of the envelopment and release of guinea pig herpes-like virus in cultured cells, Virology, 52, 468— 477. 75. Freeman M. J., Powell K. L. (1982). DNA-binding properties of a herpes simplex virus immediate early protein, J. Virol., 44, 1084— 1087. 76. Frenket N., Roizman B. (1972). Ribonucleic acid synthesis in cells infected with herpes simplex virus: Control of transcription and of RNA abundance, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 69, 2654— 2659. 77. Frenket N.. Roizman B. (1972). Separation of the herpesvirus deoxyribonuc leic acid on sedimentation in alkaline gradients, J. Virol., 10, 565— 572. 78. Frenkel N., Locker H., Vlazny D. A. (1980). Studies of defective herpes simplex viruses, Ann. NY Acad. Sci., 354, 347— 370. 79. Frenkel N., Silverstein N. S., Cassai E., Roizman B, (1973). RNA synthesis in cells infected with herpes simplex virus. VII. Control of transcription and of transcript abundancies of unique and common sequences of herpes sim plex 1 and 2, J. Virol., 11, 886— 892. 80. Frenkel N., Locker H., Batterson W., Hay ward G., Roizman B. (1976). Anatomy of herpes simplex DNA. VI. Defective DNA originates from the S component, J. Virol., 20, 527— 531. 81. Friedman H. M., Cohen G. H., Eisenberg R. J., Seidel C. A., Cines D. B. (1984). Glycoprotein С of HSV-1 functions as a C3B receptor on infected endothelial cells, Nature, 309, 633— 635. 82. Frink R. J., Anderson K. P., Wagner E. K. (1981). Herpes simplex virus type 1 HindlH fragment L encodes spliced and complementary mRNA spe cies, J. Virol., 39, 559— 572. 83. Fritz M. E., Nahmias A. J. (1972). Reversed polarity in transmembrane potentials of cells infected with herpesviruses, Proc. Soc. Exp. Bio!. Med., 139, 1159— 1161. 84. Furlong D., Swift H,, Roizman B. (1972). Arrangement of herpesvirus deoxy ribonucleic acid in the core, J. Virol., 10, 1071— 1074. 85. Gerber P., Pritchett R. F., Kieff E D. (1976). Antigens and DNA of a chim panzee agent related to Epstein-Barr virus, J. Virol., 19, 1090— 1099. 86. Gergely L., Klein G., Ernberg I. (1971). Host cell macromolecular synthe sis in cells containing EBV-induced early antigens. Studies by combined immunofluorescence and radioautography, Virology, 45, 2— 29. 87. Gibbs E. P. J., Rweyemamu M. M. (1977). Bovine herpesviruses, Vet. Bull., 47, 417— 425. -88. Gibson W., Roizman B. (1972). Proteins specified by herpes simplex virus. VIII. Characterization and composition of multiple capsid forms of subtypes 1 and 2, J. Virol., 10, 1044— 1052. 89. Gibson W., Roizman B. (1974). Proteins specified by herpes simplex virus. X. Staining and radiolabeling properties of B-capsid and virion proteins in polyacrylamide gels, J. Virol., 13, 155— 165. 90. Given D., Kieff E. (1978). DNA of Epstein-Barr virus. IV. Linkage map of restriction endonuclease fragments of the B95-8 and W91 strains of Epstein- Barr virus, J. Virol., 28, 524— 542. 91. Godowski P. J., Knipe D. M. (1983). Mutations in the major DNA-binding protein gene of herpes simplex virus type 1 results in increased levels of viral gene expression, J. Virol., 47, 478— 486. 92. Goodheart C., Plummer G. (1974). The densities of herpes viral DNAs. In: Progress in Medical Virology, Vol. 19, ed. by J. L., Melnick, p. 324, S. Kar ger, Basel, Switzerland. 93. Grafstrom R. H., Alwine J. C, Steinhart W. L., Hilt C. W., Hyman R. W. (1975). The terminal repetition of herpes simplex virus DNA, Virology, 67, 144— 157. 94. Graham F. L., Velihaisen G., Wilkie N. M. (1973). Infectious herpesvirus DNA, Nature (Lond.), 245, 265— 266. 95. Gravell M. (1971), Viruses and renal carcinoma of Rana pipiens. X. Compa rison of herpes-type viruses associated with Lucke tumor-bearing frogs, Virology, 43, 730— 733. 96. Green M. R., Treisman R., Maniatis T. (1983). Transcriptional activation of cloned human ^-globin genes by viral immediate early gene products, Cell, 35, 137— 148. 97. Gruter W. (1924). Das Herpesvirus, seine aetiologische und klinische Bedeutung, Muench Med. Wochenschr., 71, 1058— 1060. 98. Gustafsohn D. P. (1970). Pseudorabies. In: Diseases of Swine, 3rd ed., edi ted by H. W. Dunne, pp. 337— 355, Iowa State University Press. 99. Hall L. M., Draper K. G., Fluck R. J., Carter R. H., Wagner E. K. (1982). Herpes simplex virus mRNA species mapping in EcoRI fragment I, J. Virol., 43, 594— 607. 100. Hampariati V. V., Hllleman M. R., Ketler A. (1963). Contributions to charac terization and classification of animal viruses, Proc. Soc. Exp. Biol. Med., 112, 1040— 1052. 101. Hay R. T., Hay J. (1980). Properties of herpesvirusinduced «immediate early» polypeptides. Virology, 104, 230— 234. 102. Hay ward S. D., Lazarowitz S. G., Hayward G. S. (1982). Organization of the Epstein-Barr virus DNA molecule: II. Fine mapping of the boundaries of the internal repeat cluster of B95-8 and identification of additional small tandem repeats adjacent to the HR-1 deletion, J. Virol., 43, 201— 213. 103. Hayward S. D., Nogee L., Hayward G. S. (1980). Organization of repeated regions within the Epstein-Barr virus DNA molecule, J. Virol., 33, 507— 521. 104. Hayward G. S., Jacob R. J., Wadswortfi S. C., Roizman B. (1975). Anatomy of herpes simplex virus DNA: Evidence for four populations of molecules that differ in the relative orientations of their long and short segments, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 72, 4243— 4247. 105. Hayward G. S., Reyes G. R., Gavis E. R., McKnight S. L (1981). Identifi cation, cloning, and sequencing of HSV thymidine kinase genes. In: Her pesvirus DNA: Developments in Molecular Virology, Vol. 1, ed. by Y. Becker r pp. 271— 306, Martinus, Nijhoff, Boston. 106. Heine J. W., Roizman B. (1973). Proteins specified by herpes simplex virus. IX. Contiguity of host and viral proteins in the plasma membrane of infected cells, J. Virol., 11, 810— 813. 107. Heine J. W., Honess R. W. f Cassai E., Roizman B. (1974). Proteins specified by herpes simplex virus. XII. The virion polypeptides of type 1 strains, J, Virol., 14, 640— 651. 108. Heine U. I. (1974). Intranuclear viruses. In: The Cell Nucleus, ed. By Busch, p. 489, Academic Press, New York. 109. Heller M., Dambaugh T., Kieff E. (1981). Epstein-Barr virus DNA- IX. Va riation among viral DNAs from producer and nonproducer infected cells, J. Virol., 38, 632— 648. 110. Heller M., Gerber P., Kieff E. (1982). DNA of lierpesvirus PAN, a third member of the Epstein-Barr virus-herpesvirus papio group, J. Virol., 41, 931— 939. 111. Herz C., Roizman B. (1983). The a promoter regulator-ovalbumin chimeric gene resident in human cells is regulated like the authentic aA gene after infection with herpes simplex virus 1 mutants in cc4 gene, Cell, 33, 145— 151. 112. fiirsch I., Vonka V. (1974). Ribonuclcotidcs liked to DNA of herpes simplex, type 1, J. Virol., 13, 1162— 1168. 113. Hoffman P. /., Cheng Y. (1978). The deoxyribonuclease induced after infec tion of KB cells by herpes simplex virus type 1 or 2, J. Biol. Chem., 253,. 3557— 3562. 114. Hoffman P. J., Cheng Y. (1979). DNAse induced after infection of KB ceils by herpes simplex virus type 1 or type2, J. Virol., 32, 449— 457. 115. Hoggan M. D., Roizman B. (1959). The isolation and properties of a variant of herpes simplex producing multinucleated giant cells in monolayer cultu res in the presence of antibody, Am. J. Hyg., 70, 208— 219. 116. Honess R. W., Roizman B. (1973). Proteins specified by herpes simplex vi rus. XI. Identification and relative molar rates of synthesis of structural and non-structural herpesvirus polypeptides in infected cells, J. Virol., 12, 1346— 1365. 117. Honess R. W., Roizman B. (1974). The regulation of herpes simplex virus. protein synthesis. In: The Mechanisms of Virus Disease, ed. by W. S. Robin son and C. F. Fox, pp. 455— 492, W. A. Benjamin, Menlo Park, Calif. 118. Honess R. W., Roizman B. (1974). Regulation of herpesvirus macromolecu lar synthesis. I. Cascade regulation of the synthesis of three group of viral proteins, J. Virol., 14, 8— 19. 119. Honess R. W., Roizman B. (1975). Proteins specified by herpes simplex-virus. XIII. Glycosylation of viral polypeptides, J. Virol., 16, 1308— 1326. 120. Honess R. W., Roizman B. (1975). Regulation of herpesvirus macromolecu lar synthesis: Sequential transition of polypeptide synthesis requires func tional viral polypeptides, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 72, 1276— 1280. 121. Hones R, W., Watson D. H. (1977). Herpes simplex virus resistance and sensitivity to phosphonoacetic acid, J. Virol., 21, 584— 600. 122. Hope R. G., Marsden H. S. (1983). Processing of glycoprotcins induced by herpes simplex virus type 1: Sulphation and nature of the oligosaccharide linkages, J. Gen. Virol., 64, 1943— 1953. 123. Huang A. S., Wagner R, R, (1964). Penetration of herpes simplex virus into human epidermoid cells, Proc. Soc. Exp. Biol. Mcd., 116, 863— 869. 124. Hubbard S. C,, Ivatt R. J, (1981). Synthesis and processing of asparagine- linked oligosaccharides, Annu. Rev. Biochem., 50, 555— 583. 125. Hunt L. A., Etchison J. R., Summers D. F. (1978). Oligosaccharide chains are trimmed during synthesis of the envelope glycoprotein of vesicular sto matitis virus, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 75, 754— 758. 126. Huszar D., Bacchetti S. (1981). Partial purification and characterization of the ribonucleotide reductase induced by herpes simplex virus infection of mammalian cells, J. Virol., 37, 580— 588. 127. Huszar D., Bacchetti S. (1983). Is ribonucleotide reductase the transfor ming function of herpes simplex virus 2? Nature, 302, 76— 79. 128. lltis J. P., Oakes J. E., Hyman R. W., Rapp F. (1977). Comparison of the DNAs of varicella-zoster viruses isolated from clinical cases of varicella and herpes zoster, Virology, 82, 345— 352. 129. Jacob R, J., Roizman B. (1977). Anatomy of herpes simplex virus DNA. VIII. Properties of the replicating DNA, J. Virol., 23, 394— 411. 130. Jacob R, J., Morse L. S., Roizman B. (1979). Anatomy of herpes simplex virus DNA. XIII. Accumulation of head to tail concatemers in nuclei of infected cells and their role in the generation of the four isomeric arrange ments of viral DNA, J. Virol., 29, 448— 457. 131. Jacquemont B., Roizman B. (1975). Ribonucleic acid synthesis in cells infec ted with herpes simplex virus: Characterization of viral high molecular weight nuclear RNA, J. Gen, Virol., 29, 155— 165. 132. Jamieson A, T., Subak-Sharpe J. H. (1974). Biochemical studies on the her pes simplex virus-specified deoxypyrimidine kinase activity, J, Gen. Virol., 24, 481— 492. 133. Jofre J. T., Schaffer P. A., Parris D. S. (1977). Genetics o! resistance to phosphonoacetic acid in strain K.OS of herpes simplex type 1, J. Virol., 23, 833— 836. 134. Johnson D. C., Spear P. Q. (1982). Monensin inhibits the processing of herpes simplex virus glycoproteins, their transport to the cell surface, and the egress of virions from infected cells, J. Virol., 43, 1102— 1112. 135. Johnson D. C., Spear P. G. (1983). 0-Linked oligosaccharides are attached to herpes simplex virus glycoproteins in the gold! apparatus, Cell, 32, 987— 997. 136. Johnson D. C., Spear P. G. (1984). Evidence for translational regulation of herpes simplex virus type I gD expression, J. Virol., 51, 389— 394. 137. Jones N,, Shenk T. (1979). An adenovirus 5 early gene product funktion regulates expression of other early viral genes, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 76, 3665— 3669. 138. Jones P., Roizman B. (1979). Regulation of herpesvirus macromolecular synthesis. IX. The transcription program consists of three phases during which both extent of transcription and accumulation of RNA in the cyto plasm are regulated, J. Virol., 31, 299— 314. 139. Jones P. C. , Hayward G. S., Roizman B. (1977). Anatomy of herpes simplex virus DNA. VI. a RNA is homologous to noncontiguous sites in both L and S components of viral DNA, J. Virol., 21, 268— 276. 140. Jensson V., Wells A., Klin G. (1982). Receptors for the complement C3d component and the Epstein-Barr virus are quantitatively coexpressed on a series of B-cell lines and their derived somatic cell hybrids, Cell. Immunol., 72, 263— 276. 141. Kamiya T., Ben-Porat T., Kaplan A. S. (1965). Control of certain aspects of the infective process by progeny viral DNA, Virology, 26, 577— 589. 142. Kaplan A. S., Ben-Porat T. (1959). The effect of pseudorabies virus on the nucleic acid metabolism and on the nuclei of rabbit kidney cells, Virology, 8, 352— 366. 143. Kaplan A. S., Ben-Porat T. (1960). The incorporation of CH-labeied nucleosi des into rabbit kidney cells infected with pseudorabies virus, Virology, 11, 12— 17. 144. Kaplan A. S., Ben-Porat T. (1963). The pattern of viral and cellular DNA synthesis in pseudorabies virus infected cells in the logarithmic phase of growth, Virology, 19, 205— 214. 145. Kawamura H., King D. /., ^ndersora D. P. (1969). A herpesvirus isolated from kidney cell culture of normal turkeys, Avian Dis., 13, 853— 863. 146. Keir H. M. (1968). Virus-induced enzymes in mammalian cells infected with DNA-viruses. In: The Molecula Biology of Viruses, ed. by L. V. Crawford and M. G. P. Stoker, pp. 67— 99, Cambridge University Press, Cambridge. 147. Keir H. M., Gold E. (1963). Deoxyribonucleic acid nucleotidyltransferase and deoxyribonuclease from cultured cells infected with herpes simplex virus, Biochim. Biophys. Acta, 72, 263— 276. 148. Keller J, M., Spear P. G., Roizman B. (1970). The proteins specified by her pes simplex virus. III. Viruses differing in their effects on the social beha vior of infected cells specify different membrane glycoproteins, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 65, 865— 869. 149. Kennnedy I. M., Stevely W. S., Leader D. P. (1981). Phosphory lation of ribosomal proteins in hamster fibreblasts infected with pseudorabies virus or herpes simplex virus, J. Virol., 39, 359— 366. 150. Kieff E. D., Bachenheimer S. L., Roizman B. (1971). Size, composition and structure of the DNA of subtypes 1 and 2 herpes simplex virus, J. Virol., 8,. 125— 129. 151. Kieff E. D., Hoyer B., Bachenheimer S. L., Roizman B. (1972). Genetic relatedncss of type 1 and type 2 herpes simplex virus, J. Virol., 9, 738— 745, 152. Kit S., Dubbs D. R. (1963). Acquisition of thymidine kinase activity by herpes simplex infected mouse fibroblast cells, Biochem. Biophys. Res. Com mun., 11, 55 — 59. 153. Kit S., Dubbs D. R. (1965). Properties of deoxythymidine kinase partially purified from noninfected and virus-infected mouse fibroblast cell, Virology, 26, 16— 27. 154. Klein G., Yefenof E., Falk K., Westmati A. (1978). Relationship between Epstein-Barr virus (EBV) production and the loss of the EBV receptor/ complement receptor complex in a series of sublines derived from the same original Burkitt's lymphoma, Int. J. Cancer, 21, 552— 560. 155. Klemperer H. G., Haynes G. R,, Sheddon W. I. H., Watson D. H. (1967). A virus-specific thymidine kinase in BHK 21 cells infected with herpes simplex virus, Virology, 3), 120— 128. [56. Knipe D. M., Ruyechan W. T., Roizman B. (1979). Molecular genetics of herpes simplex virus. III. Fine mapping of a genetic locus determining resis tance to phosphonoacetate by two methods of marker transfer, J. Virol., 29, 698— 704. 157. Knipe D, M., Ruyechan W. T., Honess R. W., Roizman B. (1979). Molecular genetics of herpes simplex virus. IV. The terminal a sequences of the L and S components are obligatorily identical and constitute a part of the structural gene mapping predominantly in the S component, Proc. Nat,.. Acad. Sci. USA, 76, 4534— 4538. 158. Knipe D. M., Ruyechan W. T., Roizman B., Halliburton L W. (1978). Mole cular genetics of herpes simplex virus. Demonstration of regions of obliga tory and non-obligatory identity in diploid regions of the genome by sequen ce replacement and insertion, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 75, 3896— 3900. 159. Koide N,, Wells A., Vols ky D., Shapiro /., Klein G. (1981). The detection of Epstein-Barr virus receptors utilizing radiolabelled virus, J. Gen. Virol., 54, 191— 195. 160. Kousoulas K. G., Pellett P. E., Pereira L., Roizman B. (1984). Mutations affecting conformation or sequence of neutralizing epitopes identified by reactivity of viable plaques segregate from syn and is domains of HSV-l(F) gB gene, Virology, 135, 379— 394. 161. Kozak M., Roizman B. (1974). Regulation of herpesvirus macromolecular synthesis: Nuclear retention of non-translated viral RNA sequences Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 71, 4322— 4326.
1Архитектура и строительство
2Астрономия, авиация, космонавтика
 
3Безопасность жизнедеятельности
4Биология
 
5Военная кафедра, гражданская оборона
 
6География, экономическая география
7Геология и геодезия
8Государственное регулирование и налоги
 
9Естествознание
 
10Журналистика
 
11Законодательство и право
12Адвокатура
13Административное право
14Арбитражное процессуальное право
15Банковское право
16Государство и право
17Гражданское право и процесс
18Жилищное право
19Законодательство зарубежных стран
20Земельное право
21Конституционное право
22Конституционное право зарубежных стран
23Международное право
24Муниципальное право
25Налоговое право
26Римское право
27Семейное право
28Таможенное право
29Трудовое право
30Уголовное право и процесс
31Финансовое право
32Хозяйственное право
33Экологическое право
34Юриспруденция
 
35Иностранные языки
36Информатика, информационные технологии
37Базы данных
38Компьютерные сети
39Программирование
40Искусство и культура
41Краеведение
42Культурология
43Музыка
44История
45Биографии
46Историческая личность
47Литература
 
48Маркетинг и реклама
49Математика
50Медицина и здоровье
51Менеджмент
52Антикризисное управление
53Делопроизводство и документооборот
54Логистика
 
55Педагогика
56Политология
57Правоохранительные органы
58Криминалистика и криминология
59Прочее
60Психология
61Юридическая психология
 
62Радиоэлектроника
63Религия
 
64Сельское хозяйство и землепользование
65Социология
66Страхование
 
67Технологии
68Материаловедение
69Машиностроение
70Металлургия
71Транспорт
72Туризм
 
73Физика
74Физкультура и спорт
75Философия
 
76Химия
 
77Экология, охрана природы
78Экономика и финансы
79Анализ хозяйственной деятельности
80Банковское дело и кредитование
81Биржевое дело
82Бухгалтерский учет и аудит
83История экономических учений
84Международные отношения
85Предпринимательство, бизнес, микроэкономика
86Финансы
87Ценные бумаги и фондовый рынок
88Экономика предприятия
89Экономико-математическое моделирование
90Экономическая теория

 Анекдоты - это почти как рефераты, только короткие и смешные Следующий
Деньги помогают переступить через все законы, кроме законов физики.
Anekdot.ru

Узнайте стоимость курсовой, диплома, реферата на заказ.

Обратите внимание, курсовая по биологии "Герпес-вирусы и их репликация", также как и все другие рефераты, курсовые, дипломные и другие работы вы можете скачать бесплатно.

Смотрите также:


Банк рефератов - РефератБанк.ру
© РефератБанк, 2002 - 2016
Рейтинг@Mail.ru