Реферат: Актинобациллезная гемофилезная - текст реферата. Скачать бесплатно.
Банк рефератов, курсовых и дипломных работ. Много и бесплатно. # | Правила оформления работ | Добавить в избранное
 
 
   
Меню Меню Меню Меню Меню
   
Napishem.com Napishem.com Napishem.com

Реферат

Актинобациллезная гемофилезная

Банк рефератов / Сельское хозяйство и землепользование

Рубрики  Рубрики реферат банка

закрыть
Категория: Реферат
Язык реферата: Русский
Дата добавления:   
 
Скачать
Microsoft Word, 747 kb, скачать бесплатно
Заказать
Узнать стоимость написания уникального реферата

Узнайте стоимость написания уникальной работы

2 МИНИСТЕРСТВО ОБЩЕГО И ПРОФЕ ССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ Московский Государственный университет прикладной биотехнологии На правах рукопис и УДК 619.4 : 616.9 СКОРОДУМОВ Дмитрий Иванович АКТИНОБАЦИЛЛЁЗНАЯ (ГЕМОФИЛЁЗНАЯ) ПЛЕВРОПНЕВМОНИЯ И ГЕМОФИЛЁЗНЫЙ ПОЛИСЕРОЗИТ СВИНЕЙ ( ЭТИОЛОГИЯ, ЛАБОРАТ ОРНАЯ ДИАГНОСТИКА, ОСНОВЫ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ АКТИНОБАЦИЛЁЗНО Й ПЛЕВРОПНЕВМОНИИ ) 16.00.03. – ветеринарная микробио- логия, вирусология, эпи- зоотология и микология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени доктора ветеринарных наук Москва – 1997 1. 19 1 1. Общая характеристика работы Актуальност ь проблемы. Болезни свиней представляют о дну из значимых проблем ветеринарной науки и практики. Перевод свиновод- ства на промышленную технологию выявил значение ряда инфекционных бол езней, которые до этого оставались за пределами внимания специалистов. К этой категории бактериозов свиней можно отнести актинобациллёзную ( ге мофилёзную ) плевропневмонию и гемофилёзный полисерозит свиней ( Сидоро в М.А., 1987, 1988; J . Nikolet , 1976, 1983, 1986; Schultz R . A ., 1985; Schope R . E . et al , 1964; Sebunya T . N . K . et al , 1983; Rsing H . J ., 1979,1980, 1991; Rosendal S . et al , 1983; Nielsen R ., 1982,1995; Kielsten P . и.а., 1980, 1190, 1992, 1994; и другие) Актинобациллёзная ( гемофилёзная ) плевропневмония при обрела повсеместное распространение, наносит значительный экономичес кий ущерб, с большим трудом поддаётся лечению и специфической профилакт ике ( Beaudet R , et al , 1994; Byrd W . et al 1992; Fedorka – Grey P . S . et al ., 1990; Beskow P . et al .,1989; Bigbee H . C . et al , 1986; и др. ) Гемофилёзный полисерозит ( болезнь Глессера ) в связи с внедрением в тех нологию свиноводства использования СПФ – животных неожиданно проявил себя как заболевание, способное поражать все возрастные группы свиней, в отличие от сложившегося представления как о болезни, к которой чувстви тельны поросята- -отъёмыши, подвергшиеся воздействию стресс— фактор ов ( Amano H . et al ., 1987; Bachler J . F . et al ., 1974; и др. ). В России исследования по указанным вопросам были начаты в 1974г. ВНИИЭВ им. Я. Р. Коваленко под руководством профессора Сидорова М. А. Имевшиеся к этом у периоду публикации в отечественной литературе по биологии гемофильн ых бактерий, патогенных для свиней, были недостаточны для эффективной ла бораторной диагностики инфекций, вызываемых Actinobacillus ( Haemophilus ) A . pleuropneumoniae и H . parasuis . Разработки по диаг ностике и специфической профилактике перечисленных болезней практиче ски отсутствовали. Цели и задачи исследований. Изучить биологические свойства НАД— зависимых бактер ий, вызывающих генерализованные серозиты и фибринозно - -геморраг ическую плевропневмонию у свиней. На основе результатов таксономическ ого анализа разработать схему идентификации указанных возбудителей. И сследовать возможность специфической профилактики актинобациллёзно й плевропневмонии свиней. Для достижения сформулированных целей были п оставлены следующие задачи: 1. Собрать коллекцию штаммов Н АД--зависимых бактерий, ассоциирующихся с серозитами и фибринозно— гем оррагическими пневмониями свиней, провести сравнительное изучение их фенотипических и генотипических характеристик. Определить критерии их дифференциации от таксономически близких и сходных видов бактерий. 2. Изучить чувствительность к H . parasuis и A . pleuropneumoniae различных видов лабораторных животных с целью выбора лабораторной модели для диагност ики, выяснения вопросов пато— и иммуногенеза. 3. Исследовать патогенность A . pleuropneumoniae и H . parasuis для свиней. 4. Изучить методы серологичес кой идентификации выделенных культур H . parasuis и A . pleuropneumoniae и их серовариантную структуру. 5. Разработать и апробировать ускоренные методы обнаружения антигенов A . pleuropneumoniae . 6. Изучить возможность специф ической профилактики актинобациллезной плевропневмонии свиней при по мощи инактивированной вакцины. Научная новизна работы. Установлена этиологическа я роль H . parasuis в развитии генерал изованных серозитов и Actinobacillus ( Haemophilus ) pleuropneumoniae в заболевании свиней фибринозно — геморрагической плевропневмонией в условиях отечественных свиново дческих хозяйств промышленного типа. Эти нозологические единицы вперв ые диагностированы в свиноводческих хозяйствах России. Проведено комплексное изучение фенотипических и генотипических хара ктеристик НАД--зависимых бактерий, выделенных от свиней при указанной па тологии. Подтверждена принадлежность бактерий классифицируемых ранее как вид Haemophilus pleuropneumoniae к роду Actinobacillus . На основании нум ерического анализа фенотипических признаков НАД--зависимых культур со бранной коллекции выделены феноны, соответствующие видам H . parasuis , A . pleuropneumoniae и таксону «малая группа» и определены дифференцирующие признаки между указанными видам и и другими таксонами семейства Pasteurellaceae . Определены критерии дифференциации культур НАД-- независимого би овара A . pleuropneumoniae от сходных бакте рий. Экспериментально обоснованы методы серологической идентификации ку льтур A . pleuropneumoniae и H . parasuis , а также обнаружения антигенов A . pleuropneumoniae в тканевом материале. Определена серотиповая структура НАД--завис имых культур A . pleuropneumoniae и H . parasuis , выделяемых при соответствующей патологии свиней. Изучена патогенность A . pleuropneumoniae и H . parasuis для лабораторных животных и свиней. Показано значение гемолиз инов и экзотоксинов A . pleuropneumoniae для вирулент ности возбудителя и очерчена их роль в патогенезе актинобациллёзной пл европневмонии свиней. Дано научное обоснование методов лабораторной диагностики гемофилёз ов свиней и технологии изготовления инактивированной эмульгированной вакцины против актинобациллёзной плевропневмонии свиней ( авторское с видетельство № 907899 от 21.10.1981г. ) , доказана эффективность активной иммунизации против актинобациллезной плевропневмонии свиней в условиях неблагопо лучного хозяйства. Практическая ценность работы. Разработаны и используются в ветеринарных диагностиче ских лабораториях и свиноводческих хозяйствах: -- Временные методические указания по лабораторной диагностике гемофи лёзного полисерозита поросят. Рекомендованы МСХ СССР 17.10.1978г. № 116-18. -- Временные методические указания по лабораторной диагностике гемофи лёзного плевропневмонии свиней. Утверждены ГУВ МСХ СССР 16.04.1981г. -- Методические указания по диагностике гемофилёзов свиней. Утверждены ГУВ МСХ СССР 02.11.1985г. №115-6а. -- Методические указания на изготовление и применение коагглютинирующ его антительного диагностикума для экспресс – идентификации Гемофилю с плевропневмоние и индикации возбудителя в патологическом материале. Утверждены отделением ветеринарии РАСХН 16.02.1993г. Временная инструкция о мероприятиях по борьбе с гемофилёзами свиней. У тверждена ГУВ МСХ СССР. 02.11.1985г. № 115-6а. Разработаны и утверждены: - Инструкция по изготовлению и контролю вакцин против гемофилёзной пле вропневмонии свиней. Утверждена ГУВ МСХ СССР 11.07.1990г. Вакцина против гемофилёзной плевропневмонии свиней эмульгированная . Технические условия ТУ— 10-09-53-90. Утверждены ГУВ МСХ СССР 11.07.1990г. - Наставление по применению вакцины против гемофилёзной плевропневмо нии свиней. Утверждено ГУВ МСХ СССР 11.07.1990г. Основные положения, вынос имые на защиту: 1. Результаты комплексного из учения биологических свойств и таксономического положения возбудител ей актинобациллёзной плевропневмонии и гемофилёзного полисерозита св иней, критерии их дифференциации по фенотипическим свойствам от таксон омически и экологически родственных видов бактерий. 2. Методы серологической иден тификации культур A . pleuropneumoniae и обнаружени я антигенов возбудителя в тканевом материале. 3. Принципы изготовления и лаб ораторного контроля инактивированной вакцины против актинобациллёзн ой плевропневмонии свиней, результаты испытания эффективности вакцины в производственных условиях. Апробация работы. Материалы диссертации доложены на засед аниях учёного и методического советов Всероссийского научно-исследова тельского института экспериментальной ветеринарии им. Я. Р. Коваленко (1975-1983г.г.), учёного совета ветеринарно - санитарного факультета Московского Государственного университета прикладной биотехнологии ( 1984-1995г.г.), ветер инарной секции Научно- -технического совета Министерства сельского хозяйства СССР (23.11.1983г.), на сем инаре бактериологов республиканских ветеринарных лабораторий (г.Тбили си,1980г.), на семинаре бактериологов областных ветеринарных лабораторий РС ФСР (НПВЛ РСФСР, 1981г.), на совещании специалистов свиноводческих комплексо в СССР (г.Москва, ВДНХ, 1980г.), на научных конференциях ВНИИЭВ им. Я.Р. Коваленко (1993г.), МГАВМиБ им. К. И. Скрябина (1991,1996г.г.) По материалам диссертации опубликована 41 научная работа, методические указания и наставления; получены два авторских свидетель ства на изобретения. Опубликована в соавторстве с М.А.Сидоровым монография «Гемофилёзы животных» (М.,Колос,1986). Объём и структура диссертации. Диссертация изложена на 552 страницах машинописного текста и со стоит из выведения, двух глав обзора литературы, материалов и методов ис следований, двух глав собственных исследований, обсуждения результато в, выводов, практических предложений и приложения. Диссертация содержит 82 таблицы, 30 рисунков. Список литературы содержит 472 источника, в том числе 61 отечественных и 411 иностранных авторов. Собственные исследования. 1. Материалы и методы исследо ваний. Работа выполнена во ВНИИЭВ и м. Я. Р. Коваленко и МГУПБ в период 1974— 1995г.г. Выполненные исследования являл ись частью плановой научной тематики ВНИИЭВ и МГУПБ. Отдельные этапы исс ледований проведены совместно с Сидоровым М.А., Шубиным В.А., Гумбатовым Ю. К., Мицаевым Ш.Ш., Блему Ж., Силла Ф., Лаврентьевым Н.И., Романовой Л.Я., Субботины м В.В., Пруссак— Глотовым В.Э., Логиновым И.А., Корнелаевой Р.П. Ряд комплексных исследований проведен совместно с сотрудниками лабо ратории патологической анатомии ВНИИЭВ проф. Шубиным В.А., Татришвили И.К ., Андрышиным А.Н., лаборатории молекулярной биологии и биохимии ВНИИЭВ Ар тюхиным С.К. и Фоминым Б.А. В работе использовали 30 штаммов типовых культур бактерий семейства Pasteurellaceae : Actinobacillus ( Haemophilus ) pleuropneumoniae ( серовары 1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,12, ) , Pasteurella – haemolytica – подобные бактерии, гемофильные бактерии «малой группы», таксо на «С», H . influenzae , H . parainfluenzae , H . parasuis ( серовары А,В,С,Д ), P . multocida ( серовары А.В.Д ). Также использовали культуры S . aureus ( шт.№СТС 8530, 209 р.), S . epidermidis ( шт.АТСС14990), S . saprophyticus ( шт.2284 ИГ), В. megatherium ( шт. №654), B . subtilis , S . cholerasuis (шт.№370), S . typhimurium ( шт.№415). Подробному изучению включая нумерический анализ, подвергнут 141 штамм Н АД--зависимых эпизоотических культур бактерий, выделенных нами от свине й, и 160 штаммов подвергнуты серологической идентификации. Бактериологич ески или патологоанатомически исследованы материалы от более 2200 свиней. При изучении вопросов пато- и иммуногенеза использовали 157 свиней, 210 морск их свинок, 546 белых мышей. Для культивирования НАД--зависимых бактерий применяли «шоколадный» а гар, бульон и агар Левинталя, сывороточно- -дрожжевой агар и бульон, кровяной агар и бульон на основе МПБ, МПА, бульон а и агара Хоттингера. В качестве источников специфических ростовых факт оров использовали кристаллический гемин («Реахим»), НАД («Реахим»), дрожж евой экстракт, кровь различных видов животных, питающие культуры бактер ий («баккормилки»). Культивирование бактерий в жидких питательных среда х осуществляли в стационарных условиях и в режиме аэрирования (лаборато рный ферментер). Морфологические, тинкториальные, культуральные и ферме нтативные свойства бактерий исследовали общепринятыми методами. В дифференциально— диагностичес кие среды при определении ферментативной активности добавляли НАД и ге мин, а также использовали СИБ и ПВДЭ— диагностические наборы производс тва Горьковского ИЭМ. Особенности колоний изучали в косопадающем пучке света при помощи стереоскопического микроскопа МБС— 1, (Акатова Н.С.,1966). При проведении нумерического анализа у каждого исследованного штамм а бактерий определяли 57 физиологических признаков, показатели преобраз овывали в числовую форму, затем при помощи ЭВМ вычисляли коэффициент нес оответствия по формуле где: a - количество несовпадающих признаков, b - количество совпадающих положительных признаков, c - количество совпадающих отрицательных признако в. Полученную матрицу коэффиц иентов подвергали кластерному анализу с представлением конечных данны х в виде дендрограммы, отображающей распределение штаммов по кластерам ( фенонам ). Для генетической характеристики ( исследования проведены совместно с Артюхиным С.К. и Фоминым В.А. ) эпизоотических и референтных штаммов ДНК вы деляли по методу Marmur (1961 ) . Нуклеотидный состав определяли спектрофотометрически по те пловой денатурации с помощью спектрофотометра «Спекорд М-40». Меченые препараты ДНК получали с помощью реак ции НИК - трансляции ( Маниатис и соавт.,1985 ). Реакцию ДНК – ДНК гибридизации проводили по методу Денхардта ( 1966 ). Степень подобия нуклеоидных последов ательностей ДНК определяли, принимая за 100% радиоактивность гомологичес кой реакции. При изучении антигенной структуры бактерий использовали кроличьи ги периммунные сыворотки на цельные микробные клетки. Пробирочную и пласт инчатую РА ставили по Mittal K . и соавт. ( 1984 ), при постановке РА с 2 - меркаптоэтанолом ( 2МЭ ) серийные разведения сыворот ки делали в растворе с 0,1М -2МЭ. Эритроцитарные антигенные диагностикумы д ля РНГА готовили по методу Сидорова М.А. и Агаевой Э.М. Ставили РНГА и учиты вали результаты общепринятым способом. Антительные диагностикумы для реакции коагглютинации готовили по Mittal K . и соавт. ( 1987 ). Реакцию иммунофлуоресценции в двух ступенчатом варианте про водили с использованием коммерческих меченых ФИТЦ, антикроличьих сыво роток и люминесцентного микроскопа МЛ - 2. Реакцию ставили в классическом варианте, при исследовании свиных сыво роток крови – по Nicolet J . (1971 ) с добавлением в комплемент сыворотки крови крупного рогатого скота. При оценке вирулентности бактериальных культур определяли по Риду и Менну. Остаточную токсичност ь инактивированных вакцин определяли, используя тест прироста живой ма ссы мышей. При определении специфической активности экспериментальных вакцин рассчитывали , индекс и коэффициент эффективно сти препарата ( Безденежных И.С., Леонтьева Л.Г.,1969 ). Цифровой материал обрабатывали, используя общепринятые методы матем атической статистики ( Ашмарин И.П., Воробьёв А.А., 1962; Терентьев П.В., Ростова Н. С.,1977 ). 2. Результаты исследований. 2.1. Свойства возбудителей, та ксономическое положение и разработка лабораторной диагностики актино бациллёзной (гемофилёзной) плевропневмонии и гемофилёзного полисероз ита свиней . 2.1.1. Питательные среды и культивирование A . pleuropneumoniae и H . parasuis . Конструирование питательных сред для культивирования A . pleuropneumoniae и H . parasuis предполагает учёт потребности данных видов в НАД. Минимальный уровень зоны оптимума у обоих видов бактерий близок и с оставляет 1,8 - 3,6 НАД в 1 среды. Верхний пороговый уровень имее т видовые и штаммовые различия, причём он ниже у H . parasuis (15,62 – 31,25 мкг / ), чем у A . pleuropneumoniae (250мкг / ) и, в свою очередь, он меньше в пределах вида H . parasuis у свежевыделенных эпизоотических штам мов, нежели у адаптированных музейных культур. Полученные данные позвол или обоснованно конструировать питательные среды свиноводства учётом возможных штаммовых потребностей в НАД. Из естественных источников НАД наиболее доступен и эффективен дрожжевой экстракт. Переживающие живот ные ткани также содержат достаточное для роста V - зависимых бактерий количество НАД. Н аиболее удобно в этом случае использовать кровяной сгусток на агаре Цин ссера или сывороточном агаре. Испытание различных видов питающих культур бактерий как продуцентов НАД показало, сто ростовой фактор экскретируют в достаточных количеств ах интенсивно растущие виды бактерий (эшерихии, сапрофитные бациллы, ста филококки), которые обеспечивают зону от 16,8 ± 0,89 мм до 31,6 ± 1,14мм в зависимости от вида бактерий и типа питатель ной среды. Однако, при использовании культур стафилококков, установили, что некот орые из них ингибируют сателлитный рост A . pleuropneumoniae . Мы не обнаружили описание подобного феномена, хотя он известен у P . multjcida . Но в литературе есть сообщения о н аличии гиалуроновой кислоты в составе капсулы некоторых штаммов A . pleuropneumoniae . Следовательно, причиной ингибиции ро ста может быть синтез культурой стафилококка гиалуронидазы. Мы также не исключаем вероятность образования продуцентом НАД соединений типа НАД -азы. В любом случае, питающая культура бактерий должна быть предварител ьно проверена по указанному критерию. Определение НАД - зависимости – важный этап в идентификации A . pleuropneumoniae (1-й биовар) и H . parasuis . Наши данные о том, что референтные и эпизоотические культуры A . pleuropneumoniae периодически могут утрачивать НАД- зависимость, причём эт о касается любого штамма 1-го биовара. Явление НАД -зависимости может быть восстановлено у культур, утративших это свойство, путём культивировани я на «обеднённой» питательной среде с локальным источником НАД. Следова тельно на обычных питательных средах животного происхождения культуры , потерявшие НАД зависимость, утилизируют какие-то предшественники НАД, отсутствующие, например, в глюкозо-казеиновом агаре. На последней питате льной среде их рост возможен только в присутствии НАД, зависимость от ко торого они приобретают вновь. Результаты исследований по изучению НАД - зависимости гемофильных бак терий позволили нам дать оценку и рекомендовать для практических целей сочетание питательных сред, позволяющих в условиях диагностической ла боратории тестировать V - и Х - зависимость. Исследования показали отсутствие СО2 - зависимости у изученных культу р H . parasuis и A . pleuropneumoniae , а также не удалось обнаружить существенных различий в частоте изо ляции культур из патологического материала в условиях обычной атмосфе ры и повышенного содержания СО2 . Оба вида бактерий показали сильную зави симость от наличия в питательной среде сыворотки крови. У H . parasuis эта потребность выражена сильнее, чем у A . pleuropneumoniae . При отсутствии в питательном субстрате сыворотки крови о ба вида бактерий быстро диссоциируют. Количественные показатели, характеризующие рост A . pleuropneumoniae и H . parasuis в жидкой питательн ой среде (бульон Хоттингера, 120мг % аминного азота, рН 7,6,5,% сыворотки крови кру пного рогатого скота, 10% дрожжевого экстракта), свидетельствуют о более ин тенсивном росте первого вида, в частности, период генерации соответстве нно составил 40,8 и 67 минут, удельная скорость роста 1,008 и 0,622, прирост бактериаль ных клеток за 1 час культивирования 0,44 и 0,27 log . Оценка питательных сред для первичной изоляции культур H . parasuis и A . pleuropneumoniae (1-й биовар) показа ла, что для этой цели могут быть использованы агар и бульон Левинталя, «шо коладный» агар, сывороточно-дрожжевой бульон и агар, сывороточный и кров яной агар, с локальными источниками V - ростового фактора. Предпочтительнее использ ование прозрачных питательных сред, позволяющих получать более полную информацию об особенностях колонии. Использование сред с локальными ис точниками НАД даёт важную информацию на первом этапе бактериологическ ого исследования о НАД -зависимости, а в случае кровяного агара - также о г емолитической активности бактерий. Применение питающих бактерий как и сточника НАД требует отвивки культур в течении 24-48 часов из-за быстрой их г ибели под влиянием метаболитов «баккормилок». Подращивание материала в течении 6-8 часов в сывороточно - дрожжевом бульоне, содержащем бацитраци н, с последующим рассевом на среды увеличивает вероятность выделения ку льтур НАД--зависимых бактерий. Для поддержания культур H . parasuis и A . pleuropneumoniae при текущей работе в наибольшей степени подходят оптимальные плотные питательные среды с заливкой культур вазелиновым маслом при те мпературе хранения 5-8 С. Наиболее длительно сохраняют жизнеспособность (6-7 недель) культу ры, выращенные в сгустках крови и сохраняемые в замороженном состоянии. 2.1.2. Методы и результаты идентификации НАД--зависимых бак терий, выделенных от свиней, по культурально - морфологическим, фермента тивным и генетическим свойствам. Исследование ферментативных свойств НАД – и гемин – з ависимых культур бактерий проводили на рутинных дифференциально-диагн остических средах с добавлением ростовых факторов, а также на жидких сре дах Гисса в микрообъёмах и диагностических системах ПБДЭ и СИБ Горьковс кого НИЭМ. Максимальное совпадение результатов было по лучено на общепринятых средах, в ПБДЭ и микрообъёмах. Таксономическое положение 165 культур НАД--зависимых бактерий, выделенн ых от клинически здоровых свиней, а также животных с явлениями фибриозно -геморрагической плевропневмонии или генерализованных серозитов, было исследовано при помощи нумерического анализа. В качестве опорных в данн ую коллекцию культур были включены типовые штаммы Haemophilus ( Actinobacillus ) pleuropneumoniae , H . parasuis , H . parainfluenzae , H . influenzae , A . ligieresii , A . suis . У каждого исследова нного штамма были определены 57 фенотипических признаков, характеризующ их их культуральные и ферментативные свойства. Все полученные данные бы ли преобразованы в числовую форму, подвергнуты нумерическому анализу с виноводства конечным представлением полученных результатов в виде ден дрограммы. Анализ дендрограммы показал, что все культуры объединяются в единый ма ссив при уровне сходства 75,02%, после чего они подразделяются на два больших фенона: один с уровнем сходства 81,87%, включающий типовые штаммы A . lignieresii , A . suis , Haemophilus , ( Actinobacillus ), pleuropneumoniae и типовой шта мм «малой группы» (фенон «А»), второй с уровнем подобия 81,997% включает типовы е штаммы H . influenzae , H . parainfluenzae и H . parasuis (фенон «Н»). Из фенона «А», объединяющего культуры актинобацилл на уровне подобия 91,23%, выделяется фенон №1, включающ ий виды A . lignieresii и A . suis , и на уровне сходства 95,00% выделяется фенон №2, объ единяющий эпизоотические культуры вокруг типового штамма «малой групп ы». При уровне подобия 89,48% формируется фенон №3, объединяющий эпизоотическ ие штаммы вокруг типовых культур Haemophilus ( Actinobacillus ) pleuropneumoniae . В феноне «Н» на уровне сходства 81,997% выделяется фенон №4- - H . influenzae , на уровне 87,63% - фенон №5, объединяющий штаммы H . parainfluenzae и на уровне подоб ия 89,60% вокруг типовых штаммов H . parasuis концентрируется другая группа эпизоотических штаммов - -фенон №6. Следовательно, массив эпизоотических штаммов дифференцируется на тр и фенотипические группы, соответствующие видам Haemophilus ( Actinobacillus ) pleuropneumoniae , H . parasuis и «малой группе» гемофильных бактерий. Пол ученные данные свидетельствуют о тяготении культур Haemophilus pleuropneumoniae не к роду Haemophilus , а к роду Actinobacillus . С целью уточнения таксономического положения эпизоотических штаммов , классифицированных по фенотипическим свойствам как Haemophilus (Actinobacillus) pleuropneumoniae, НАД--зависимых бактерий, обоз начаемых как Pasteurella-haemolytica- подобные бак терии, был определён нуклеотидный состав и уровень гомологии ДНК культу р этих групп свиноводства представителями рода Haemophilus (H.parasuis, шт. J 95- таксон «С»), Pasteurella (P.multocida), Actinobacillus (A.suis), а также с типовыми культурами Haemophilus (Actinobacillus) pleuropneumoniae. Результаты показали, что все исследованные штаммы по ГЦ - составу образуют довольно однородную группу свиноводства крайними зна чениями 39,8 - 43,2 ( =41,3 0,2). Такие значения вполне соответствуют приводимы м в Руководстве Берги для семейства Pasteurellaceae. Несколько более высокий ГЦ состава обнаружен у P.haemolytica - подобных бактерий (42,5 0,5) по сравнению с типовыми штаммам и A.pleuropneumoniae, (40,7 0,5). Эпизоотические штаммы Haemophilus (Actinobacillus) pleuropneumoniae имели показатель 41,2 0,1 мол% ГЦ. Уровень гомологии ДНК внутри группы P.haemolytica - подобных штаммов составил 100%; ДНК бактерий этой группы (шт.2288 / 77) имела гомологию с ДНК типовых штамм ов A.pleuropneumoniae - 75%; с ДНК A.suis - 33%, с ДНК P.multocida и H.parasuis не более 9%; с ДНК эп изоотических штаммов Haemophilus (Actinobacillus) pleuropneumoniae - 75— 83%. Эпизоотические штаммы Haemophilus (Actinobacillu s) pleuropneumoniae по данным гибридизации ДНК образуют генетически вз аимосвязанную группу с уровнем подобия нуклеотидных последовательнос тей – 75-100%. В то же время бактерии эт ой группы тесно связаны с типовыми штаммами Haemophilus (Actinobacillus) pleuropneumoniae (78-98%), на уровне 33-38% гомологичных нуклеоидных пос ледовательностей с ДНК A.suis , и тольк о на уровне гомологии ДНК 5-9% с H.parasuis и 3-10% c P.multocida. При интерпретации полученных результатов мы исходили и з критериев генетического анализа, предложенных Медниковым и соавт.(1974), с огласно которым культуры P.haemolytica - по добных бактерий не имеющие НАД— зависимости, могут рассматриваться ка к биовар Haemophilus (Actinobacillus) pleuropneumoniae. В целом эпи зоотические штаммы, выделенные при фибринозно - геморрагических пневмо ниях, P.haemolytica - подобные бактерии и тип овые штаммы Haemophilus (Actinobacillus) pleuropneumoniae предста ют как видовая общность с заметной внутривидовой гетерогенностью. Подо бный внутривидовой уровень гетерогенности не исключает выделения допо лнительных внутривидовых таксонов, кроме НАД— зависимого и - независим ого биоваров. Полученные данные свидетельствуют, что культуры A.pleuropneumoniae, обозначаемые в 9-м издании Руководст ва по систематике бактерий Берги как видов рода Haemophilus, не относятся к нему, а также штамм J95 (таксон «С»), упоминаемый в числе видов ро да Haemophilus, по данным гибридизации так же не относится к роду Haemophilus. На основании результатов нумерического анализа, с учётом частоты встр ечаемости тех или иных положительных ферментативных реакций, для идент ификации НАД--зависимых бактерий, выделяемых при пневмониях и генерализ ованных серозитах свиней, рекомендованы в качестве основных дифференц иальных признаков (кроме культуральных): НАД— зависимость, образование уреазы, щелочной фосфатазы, гемолизина, кислоты из ксилозы, маннита и ман нозы. Остальные ферментативные признаки можно рассматривать как допол нительные. Потеря культурами A.pleuropneumoniae НАД— з ависимости и признание существования НАД— независимого биовара этого вида бактерий делает неприемлемой схему идентификации, предлагаемую д ля НАД--зависимых культур. Неизбежно расширяется число бактериальных ви дов, от которых необходимо дифференцировать НАД - независимые культуры A.pleuropneumoniae. Ситуация осложняется тем, ч то сходные патологоанатомические изменения в лёгких могут вызвать дру гие виды бактерий. В опытах экспериментального (интраназального) зараже ния свиней сходные изменения в легких были обнаружены при инокуляции ку льтур A.pleuropneumoniae НАД— зависимого и - не зависимого биоваров, A.suis и бактери й «малой группы». Данное обстоятельство увеличивает значение бактерио логического исследования в диагностике болезни. Сравнительное изучени е физиологических свойств A.pleuropneumoniae (1 и 2 биовары), A.suis, P.multocida и B.bronchiseptica как видов сходных и достаточно часто обнаруживаемых при пневмониях свиней позволило нам отобрать для их диф ференциации следующий минимальный набор признаков: липкость колоний и вязкость бульона, наличие капсулы и жгутиков, гемолитическая и уреазная активность, образование щелочной фосфатазы, индола, кислоты из маннита, сорбита, салицина, мелибиозы, утилизации цитратов. 2.1.3. Патогенные свойств а A.pleuropneumoniae . Исследовали патогенность д анного вида бактерий для лабораторных животных и свиней. При испытаниях различных способов заражения морских свинок культура ми A.pleuropneumoniae животные этого вида оказ ались наиболее чувствительны культур интраназальной инокуляции (ЛД 50 =125млн.м.к.), менее чувствительны – к внутрибр юшинному (ЛД 50 =1,585 млрд.м.к.) и малочувствительн ы к подкожному заражению. Сравнительная оценка вирулентности девяти шт аммов A.pleuropneumoniae при интраназальном с пособе инокуляции по критерию объёма поражённой лёгочной ткани показа ла наибольшую вирулентность культур 1,4,5 сероваров и существенно меньшую у культуры серовара 3; культуры серовара 2 показали штаммовые различия. Па тологоанатомические изменения при интраназальном заражении морских с винок характеризовались развитием фиброзно-геморрагической пневмони и. В отличие от морских свинок белые мыши оказались более чувствительны к внутрибрюшинному заражению: ЛД 50 составила для культуры изменения в лёгких у заражённых мышей характеризовались развитием геморрагической пневм онии. Отличительной особенностью явилось практически полное отсутстви е отложений фибрина на плевре и перикарде. В целом прослеживается видовы е отличия изменений в лёгких при актинобациллёзной пневмонии: в воспали тельном экссудате максимальное количество фибрина отмечается у свиней , меньше - у морских свинок и практически отсутствует у мышей. Полученные результаты свидетельствуют, что морские свинки и белые мыш и могут быть использованы в качестве лабораторной модели при изучении в ирулентности штаммов возбудителя, вопросов пато - и иммуногенеза. Испытание различных способов заражения 2-2,5 - месячных свиней показало и х чувствительность к интраназальному и трахеальному способам введения возбудителя при устойчивости к подкожной инокуляции культур. Заболева ние удалось также воспроизвести контактным путем. При интраназальном и трахеальном заражении (доза ) инкубационный период составил 3 - 6 часов, контактном - 72 часа. При всех способах заражения однотипные измен ения в виде фибринозно - геморрагической пневмонии отмечали в лёгких. Эт о свидетельствует, что естественными входными воротами возбудителя яв ляются дыхательные пути. При оценке патогенности для свиней культур возбудителя различных сер оваров (сер. 1,2,3,4,5) установили, что колебания вирулентности больше отражают штаммовые различия или состояние культуры на момент исследования, чем с еровариантную принадлежность. Только культура серовара 3 в опытах на сви ньях и лабораторных животных закономерно показывала меньшую вирулентн ость, чем штаммы других сероваров. Титрация культуры эпизоотического шт амма возбудителя на свиньях (интраназальное заражение) показала ЛД 50 на уровне м.к. На результаты заражения свиней влияет возраст культуры бактерий. При и нтраназальном заражении свиней одинаковой дозой 6 - и 18 - часовых культур ( ) инкубационный период, соответственно, составил 3 и 7 часов, сред нее время от заражения до гибели животных – 48,5 и 103 часа, количества леталь ных исходов – 100% и 50%, объём поражённой лёгочной ткани - 70% и 47,5%, что свидетельс твует о разной вирулентности культуры одного штамма на различных стади ях развития популяции. Помимо свойств заражающей культуры возбудителя на течение и исход бол езни влияют факторы внешней среды. В эксперименте показано значение фак торов микроклимата. Двенадцать заражённых одной культурой свиней соде ржали в условиях микроклимата, соответствующего зоогигиеническим норм ам, (группа А) и свиноводства отклонениями (группа Б). В группах А и Б соответ ственно всего пало 66,6% и 100% свиней, из них в течении 24 часов – 33,3% и 66,6%. Среднее вр емя от заражения до гибели в группах составило 67,5 и 27,3 часа. Объём поражённо й лёгочной ткани - 32,2 12,1% и 59,5 5,9%. Разли чия по последнему показателю в группах А и Б статистически достоверны (р 0,01). В опытах экспериментального воспроизведения актинобациллёзной пнев монии на морских свинках, свиньях, а также при исследовании животных, пав ших в условиях неблагополучного хозяйства, исследована диссеминация в озбудителя. При летальном исходе у свиней наиболее часто культуры возбудителя изо лировали из поражённых участков лёгочной паренхимы (100%), бронхиальных и с редостенных лимфатических узлов (63,33 - 100%), реже – из печени, селезёнки, почек , костного мозга, крови, головного мозга. Полученные данные определяют ха рактер материала, отбираемого для бактериологического исследования. Исследования экспериментально заражённых морских свинок (интраназал ьная инокуляция) показало, что изменения в лёгких в виде очаговой гипере мии в зоне ветвлений крупных и средних бронхов развиваются уже через час после инокуляции культуры. Возбудитель на это стадии реизолировали из л ёгочной ткани, бронхов, трахеи. Через три часа в лёгких развивались типич ные изменения. На этой стадии в 25% случаев культуры возбудителя реизолиро вали из крови и паренхиматозных органов. По истечении 6 часов изменения в лёгких получили полное развитие. Таким образом, бактериемия и диссемина ция возбудителя происходит на фоне уже имеющихся изменений в лёгких. Наблюдение за экспериментально заражёнными больными свиньями в усло виях неблагополучного хозяйства позволяют выделить три варианта течен ия болезни: сверхострое, острое и подострое. При сверхостром течении на ф оне жёсткого респираторного синдрома летальный исход наступает в тече нии 6-24 часов. В грудной полости, где расположены поражённые доли лёгкого, о бнаруживали 150-300 см 3 красновато й жидкости, изменённая доля лёгкого увеличена в объёме, ткань на разрезе тёмно-красного цвета, интерлобулярные септы отёчны, консистенция пораж ённой ткани плотная, с разреза стекает красноватая жидкость, бронхи и тр ахея заполнены аналогичной пенистой жидкостью. Отложения фибрина на пу льмональной и костальной плевре отсутствуют. У животных с острым течением болезни отмечен прогрессирующий респира торный синдром с повышением температуры до 40,6— 41 C , завершающийся летальным исходом в течении 6— 7 суток. У павших с виней в грудной полости находили до 200 см 3 красноватой жидкости с хлопьями фибрина. Поражённые лёгкие т ёмно-красные, плотные, ломкие, с выраженным отёком междольковой соединит ельной ткани. Костальная и лёгочная плевра покрыты плёнками фибрина. У свиней с подострым течением регистрировали симптомы пневмонии, лихо радку ремитирующего типа, плохую поедаемость корма. Поражённые доли лёг ких увеличены, бугристые, плотные, неравномерно окрашены: участки тёмно- красного, серо-коричневого, грязно-бурого цвета. Через 15-20 дней в лёгочной т кани обнаруживали очаги уплотнения, окружённые соединительной тканью. Отложения фибрина на лёгочной и костальной плевре пронизаны соедините льной тканью. Гистологические изменения в лёгких на начальной стадии болезни могут быть охарактеризованы как бактериальный токсический шок (Гистологичес кие исследования проведены д.в.н. Шубиным В.А.) Типичным для органопатолог ии бактериального шока считается парез и стаз артериол, мелких артерий, набухание и фибриноидный некроз стенок. Присоединение внутрисосудисто го свёртывания крови придаёт шоку необратимый характер и приводит куль тур возникновению некрозов ткани. Дальнейшие изменения развиваются на указанном фоне. На 2-3 сутки начинается инфильтрация поражённых тканей мо нонуклеарными клетками, в основном лимфоцитами, при отсутствии или мало м количестве нейтрофилов, эти клетки формируют своеобразный демаркаци онный вал. Позднее в поражённых тканях развиваются некротические очаги, подвергающиеся инкапсуляции. В зависимости от течения болезни и сроков гибели животного обнаруживается та или иная стадия патологического пр оцесса. Подтверждением вывода о ведущей роли токсинов в патогенезе актинобац иллёзной плевропневмонии являются следующие результаты наших исследо ваний. Установлено, сто в периодической аэрируемой культуре возбудител ь в первые три часа культивирования синтезирует термолабильные, чувств ительные к трипсину гемолизин и экзотоксин. Динамика их накопления и ина ктивации в культуральной жидкости, содержащей гемолизин и экзотоксин, в ызывает у морских свинок в лёгких изменения типичные для актинобациллё зной пневмонии. По нашему мнению, 6-8- часовые агаровые и 3- часовые бульонные аэрируемые культуры в физиологическом отношении близки, поскольку нах одятся в начальной стадии логарифмического роста. Поэтому мы считаем, чт о на первом этапе развития изменений в лёгких определяющую роль играют г емолизин и экзотоксин. По нашему мнению, 6-8- часовые агаровые культуры воз будителя содержат не некоторое количество в связанном виде гемолизина и экзотоксина, что определяет большую вирулентность молодых культур. 2.1.4. Патогенные свойств а H.parasuis. Исс ледовали чувствительность в возбудителю морских свинок, белых мышей, по росят-отъёмышей. ЛД 50 культуры H.parasuis штамм №1 для морских свинок при интраназальном заражении составила 354 млн.м.к., внутрибрюшинном - 594 млн.м.к., подкожном - 1,414 млд.м.к.. При все х способах заражения с различной частотой обнаруживали развитие сероз но-фибринозного плеврита, перитонита, реже перикардита. После интраназа льной инокуляции у 100% животных отмечали развитие катаральной пневмонии. У павших животных культуры возбудителя наиболее часто выделяли из пора жённых серозных оболочек и реже - из паренхиматозных органов. ЛД 50 культуры H.parasuis при внутрибрюшинном введении штамма серовара С составил а , , , . Белые мыши, как и морские свинки были более чувствительны к внутрибрюшинному (ЛД 50 =1,414 млрд.м.к.) и интраназальному (ЛД 50 =1,549 млрд.м.к.) способам заражения при устойчивости к подкожному введе нию культуры. Патологоанатомические изменения у мышей и морских свинок были однотипны. С нашей точки зрения, морских свинок можно рассматривать как наиболее удобную модель для биопробы и изучения пато - и иммуногенеза инфекции, вы зываемой H.parasuis. В опытах на поросятах-отъёмышах показано, что гемофилёзный полисерози т может быть воспроизведён при интраназальном, трахеальном, внутрибрюш инным и внутривенном введении культуры H.parasuis. Учитывая экологию возбудителя, можно констатировать, что ест ественными входными воротами инфекции являются дыхательные пути. При т рахеальном заражении первые клинические симптомы в виде угнетения и по вышения температуры тела отмечаются через 6-8 часов, позднее (20-24 часа) у абсо лютного большинства животных развивается катаральная пневмония. В 75% сл учаев уже на этой стадии развивается серозно-фибринозный плеврит и в 50% сл учаев - перитонит, что свидетельствует о высоких инвазивных свойствах во збудителя. У животных, убитых через 24 часа после заражения, на фоне описан ных патологоанатомических изменений культуры возбудителя были выделе ны в 100% случаев из лёгких и бронхиальных лимфатических узлов и в 25% случаев - из крови. В более поздние сроки существенных изменений в характере патол огоанатомических изменений не наступало, за исключением резорбции экс судата из полостей и появления у отдельных животных симптомов поражени я суставов конечностей и головного мозга. Гистологические исследовани я (выполнены д.в.н., профессором Шубиным В.А.) позволяют охарактеризовать и зменения у экспериментально заражённых и естественно больных свиней к ак септико-токсический процесс с поражением серозных покровов, паренхи матозных органов, лимфатических узлов и центральной нервной системы. Исследования показали, что типичные патоморфологические изменения м огут вызвать как капсулообразующие, так и бескапсульные формы возбудит еля при большей вирулентности первых. По нашим данным изменения в лёгких, плевре, перикарде и перитонеуме асс оциируются с локализацией в них возбудителя. Частота изоляции культур H.parasuis из тканей и органов зависит от характера болезни и давности процесса. При остром течении в результате э кспериментального (трахеального) заражения через 48-72 часа из лёгких культ уры возбудителя выделили в 100% случаев, плевры - 75%, перитонеума и перикарда -25%, бронхиальных лимфатических узлов - 100%, селезёнки - 50%, крови - 25% случаев. При бактериологическом исследовании поросят, павших с картиной острого по лисерозита, в естественных условиях культуры возбудителя выделили из л ёгких у 42,85%, перикарда - 92,2%, плевры - 71,42%, печени - 57,14%, селезёнки - 66,66% животных. В более отдалённые сроки после экспериментального заражения и от животных, пав ших в естественных условиях с картиной подострого полисерозита, возбуд итель выделяли реже и преимущественно из плевры, лёгких, перикарда, пери тонеума и средостенных лимфоузлов. Анализ возрастной заболеваемости поросят гемофилёзным полисерозито м показал, что пик отхода приходится на возраст 35-60 дней. Появление отхода п оросят с явлениями гемофилёзного полисерозита совпадает со снижением титра колостральных антител к H.parasuis (серовар Д), увеличением уровня колонизации возбудителя в респира торном тракте. Согласно полученным данным, H.parasuis является достаточно обычным компонентом нормальной мик рофлоры слизистых путей и на фоне описанных изменений, наряду с другими этиологическими агентами, участвует в возникновении пневмоний у порос ят данной возрастной группы и ряде случаев это сопровождается развитие м септической стадии с поражением серозных оболочек, суставов и головно го мозга. 2.1.5.Обоснование критериев отбора материала для бактери ологического исследования на актинобациллёзную пневмонию и гемофилёз ный полисерозит. Гемофилёзный полисерозит. Данные о диссеминации возбудителя свидете льствуют о наибольшей частоте его выделения из поражённых серозных обо лочек, серозно-фибринозного экссудата. Выделение чистой культуры возбу дителя наиболее вероятно при исследовании пунктата из поражённых суст авов и перикарда. В замороженном патологическом материале H.parasuis сохраняет жизнеспособность до 30 суток ( режим хранения -18 С ). Актинобациллёзная плевропневмония. Независимо от характера течения болезни возбудитель закономерно обнаруживается в поражённой ткани лёг ких и регионарных лимфатических узлах, что определяет характер материа ла, отбираемого для бактериологического исследования. В патологическо м материале, заключённом в водно-глицериновую смесь ( температура хране ния 4 --6 С), возбудите ль сохраняет жизнеспособность в течение 15 суток, в замороженном тканево м материале – до 45 суток. 2.1.6. Серологическая идентификация культур H.parasuis A.pleuropneumoniae. 2.1.6.1. Методы и результаты с ерологической идентификации культур H.parasuis. Ис пользовали кроличьи гипериммунные сыворотки против типовых штаммов се роваров А, В, С, Д. Дифференциация сероваров H.parasuis в пробирочной РА показала её малую специфичность. Более эффективной для у казанной цели оказалась РСК с растворимыми антигенами. Исследование в РСК с типовыми сыворотками 46 эпизоотических культур H.parasuis, выделенных при генерализован ных серозитах, позволило 47,82% культур отнести к известным сероварам Бакос а. Штаммы серовара А составили 15,2%, В - 17,39%, С - 2,17%, Д-13,04%. В группе штаммов, выделенны х из лёгких при пневмониях (18шт), культуры серовара А составили 16,6%, В - 11,1%, С - 5,56%, Д -33,3%, нетипируемые -33,3%. В числе культур, выделенных из носовой слизи клиничес ки здоровых свиней (14 шт.), 35,7% отнесены к серовару А, 14,2% -- к серовару Д, не удалос ь типировать 50% штаммов. В целом по всей группе из 78 штаммов H.parasuis было отнесено к серовару А - 19,23%, В - 12,82%, С - 2,56%, Д - 17,95%, нетипируемые культуры с оставили 47,44%. Исследование нетипируемых культур в РСК свиноводства атисыворотками против изоляторов этой же категории показало наличие ещё трёх серологи ческих вариантов и часть культур осталась за пределами этих групп. Получ енные данные позволяют заключить, что необходимо расширение числа серо варов на базе схемы Бакоса, либо требуется создание новой схемы серовари антной дифференциации с новыми типовыми штаммами. Анализ серотиповой структуры культур, выделенных в пределах одного хо зяйства показал ассоциацию с генерализованными серозитами свиней H.parasuis различной серовариантной принад лежности. 2.1.6.2. Методы и результаты серологической идентификации культур A.pleuropneumoniae. Для серовариантной дифференциации культур A.pleuropneumoniae испытывали РА пробирочную, РА с 2-МЭ, Р А на стекле, РНГА, РНГА с 2-МЭ, РКА пробирочную на стекле, двухступенчатую РИ Ф. При внутривидовой дифференциации в различных серологических реакци ях типовых культур A.pleuropneumoniae (серовар ы 1,2,3,4,5,6,7,8, 10,12) установлены перекрёстные реакции между сероварами 3,6 и 8, 2 и 3, 1 и 2, 4 и 7. Исследование двухсторонних антигенных связей в большинстве случаев п озволяет определить серовариантную принадлежность культур. Из группы ускоренных серологических реакций для серологической идентификации н аиболее перспективна РКА с растворимыми антигенами. При серологической идентификации 82 эпизоотических НАД--зависимых куль тур бактерий, выделенных при фиброзно-геморрагических пневмониях свин ей и классифицированных как A.pleuropneumoniae отнесены к серовару 2 -12,9%, 3 -14,53%, 4 -8,53%, 6 -3,65%, бактериям «малой группы» -7,31%. Больш ую группу штаммов серологически идентифицировать не удалось. Культуры последней группы имели антигенное родство с сероварами 3,6,8,10, но при исслед овании в перекрёстной РА с адсорбцией были не идентичны им. 2.1.7. Результаты изучения широты распространения серова ров A.pleuropneumoniae на основании серологи ческих исследований. Была предпринята попытка дать оценку циркуляции различ ных сероваров A.pleuropneumoniae в свиноводче ских хозяйствах одной из областей центральной России по результатам се рологических исследований. В РНГА исследовали 639 сывороток крови свиней из десяти хозяйств. Установлено преобладание антител к сероварам 1,4,6,3,2,12. Пр и бактериологическом исследовании в данном регионе культур сероваров 1 и 12 не выделяли. Причины такой ситуации требуют дальнейшего изучения. В сы воротках крови некоторых серопозитивных свиней удалось выявить нейтра лизующие антитела к гемолизинам A.pleuropneumoniae , что свидетельствует о наличии определённого иммунитета к A.pleuropneumoniae. 2.1.8. Разработка и апробация ус коренных серологических методов обнаружения антигенов A.pleuropneumoniae в патологическом материале. Для обнаружения антигенов A.pleuropneumoniae непосредственно в тканевом материале были испытан ы реакции коагглютинации (РКА) и двухступенчатой иммунофлуоресценции (Р ИФ). Опыты показали, что РКА может быть использована для видовой и серотипо вой идентификации A.pleuropneumoniae . Серотип овую специфичность результатов РКА удаётся повысить путём уменьшения дозы сыворотки для сенсибилизации носителя и использования в реакции р астворимых капсульных антигенов. Более активные видовые диагностикумы удалось сконструировать при использовании поливалентных сывороток, п олученных от кроликов, иммунизированных не моноантигенами, а смесью ант игенов A.pleuropneumoniae различных сероваров . Использование РКА как метода видовой идентификации потребовало выясн ения межвидовых антигенных связей A.pleuropneumoniae. Изучали антигенное родство данного вида бактерий с A.suis, A.lignieresii, P.multocida ( А,В,Д), H.parasuis (A,B,C, Д), B.bronchiseptica, S.cholerasuis, S.tiphimurium. Наиболее выраженное антигенное родство установлено с A.suis и A.lignieresii, наличие которых в исследуемом материале может обусловить ложноп оложительные результаты РКА. Серовариантную дифференциацию типовых культур A.pleuropneumoniae проводили в РИФ с предельными развед ениями антисывороток первой ступени, обеспечивающими свечение клеток свиноводства гомологичными реагентами на четыре креста. Обнаружили пе рекрёстные реакции сероваров 1 и 2, 2,3 и 6, 3,2,6 и 8, 4 и 7, 10 и 12. Таким образом, надёжной с еровариантной дифференциации в ряде случаев добиться не удалось. Слабы е перекрёстные реакции интенсивностью на два креста получены с культур ами A.suis, A.lignieresii. Не отмечено перекрёст ных реакций с P.multocida ( А,В,Д), H.parasuis ( А,В,С,Д), E.coll, S.cholerasuis и S.tiphimurium. При изучении специфичности РКА как метода обнаружения антигенов возбудителя в органах и тканях исследовали супернатанты тка невых (лёгочных) гомогенатов клинически здоровых свиней, морских свинок и получили неспецифические замедленные положительные реакции. Для уст ранения неспецифической аглютинации стафилококковые антительные диа гностикумы дополнительно обрабатывали нормальной кроличьей сыворотк ой, увеличивали концентрацию альбумина в диагностикуме, прогревали исс ледуемый материал при 100 С (10,60 мин.) 120 С (15 мин.). Эффективной оказалась термическая обработка материала. Необходим ость прогревания исследуемого материала заставила рассмотреть влияни е этого фактора на антигены возбудителя. Известно, что клетки A.pleuropneumoniae содержат специфические термостаби льные и – лабильные антигены ( K.Mittal et al., 1987) . Изучение этого вопроса показало, что по термостабильности антиге нов культуры можно подразделить на группу термоустойчивых (сер.2,3,6,8,10) и тер молабильных (сер.1,7, штамм 202). У культур последней группы при кипячении (60 мин .) снижалась активность антигенов в серологических реакциях, особенно ан тигенов серовара 1 (шт.ССМ5869). Прогревание антигенов A.pleuropneumoniae при 100 С в течении 10 минут на серологической активности а нтигенов возбудителя, кроме серовара 1 не сказывается. Возможность выявления антигенов возбудителя в тканевом материале (лё гкие), при помощи РКА и РИФ первоначально изучали на морских свинках, белы х мышах и свиньях, заражённых культурами A.pleuropneumoniae , а также A.suis и гемофи льными бактериями «малой группы». Результаты исследований показали совпадение данных бактериологии РИ Ф и РКА. Слабые положительные реакции были получены с тканевым материало м, содержащим A.suis. При исследовании лёгочной ткани от 78 свиней с явлениями пневмонии из 29 м атериалов были выделены микоплазмы, из 15 -стафилококки или стрептококки, изменений 16 - P.multocida , из 2 - P.multocida и гемофильные бактерии «малой группы» , из 7 - гемофильные бактерии «малой группы», из 9 - S.cholerasuis. При наличии в патологическом материале P.multocida в двух случаях были получены позитивн ые результаты РКА с диагностикумом против штамма №202 («малая группа»), не п одтверждённые данными бактериологии. В остальных случаях при исследов ании материалов, содержащих указанные выше гетерологичные виды бактер ий результаты РКА и РИФ были отрицательными. В девяти случаях изоляции к ультур «малой группы» данные бактериологических исследований, РКА и РИ Ф совпали. Полученные данные позволяют оценить РКА и РИФ как достаточно специфич еские и чувствительные методы обнаружения антигенов A.pleuropneumoniae . Преимуществом РКА является возможность исследования длительно х ранившегося материала и выявления растворимых антигенов. 2.2. Разработка и испытание экспериментальных образцов инактивированной вакцины против актинобациллёзной плевропневмонии с виней. Возрастная заболеваемость свиней актинобациллёзной п левропневмонией диктует необходимость вакцинации просят-отъёмышей и п роблема реактогенности препарата актуальна. Исследование остаточной т оксичности инактивированных цельноклеточных суспензий A.pleuropneumoniae в тесте прироста массы мышей показал о высокие её уровни. Из испытанных способов инактивации наиболее эффект ивным оказалась обработка формальдегидом (0,2%) с последующей выдержкой ба ктериальных взвесей при 4-6 С в течении 30-45 суток. Различия сравниваемых показателей по этом у препарату, а также инактивированных 0,1% формальдегида и тиомерсалом был и достоверны, на уровне значимости от Р 0,01 – до Р 0,05 (в зависимости от сроков хранения). Полученные данные был и учтены в технологии изготовления инактивированной эмульгированной в акцины. Испытание вакцины такого типа на 21,38 – 40 - дневных поросятах и супор осных свиноматках показало её безвредность. В качестве лабораторных моделей для испытания специфической активно сти инактивированной вакцины были испытаны морские свинки живой массо й 200— 250г и белые мыши живой массой 14-16г. Мышей вакцинировали подкожно, двукр атно с интервалом 10 суток в дозе с последующим определением ЛД 50 заражающей культуры на вакцинированных и конт рольных животных («внутрибрюшинная модель»). ЛД 50 культуры, установленная на вакцинированных животных пятикратно, превышала тот же показатель, полученный на контрольных животных. Морских свинок акционировали однократно различными дозами вакцины с последующим интраназальном заражении гомологичной культурой в дозе («лёгочная модель»). Подобный мет одический подход позволил определить ИМД 50 вакцины. По нашему мнению, «лёгочная модель» предпочтительнее, поскольк у этот метод соответствует естественным входным воротам возбудителя и нфекции. С другой стороны, об эффективности иммунизации можно дополните льно судить по наличию поражений в лёгких их массивности. Определённую и нформацию дают показатели серологического ответа - между объёмом пораж ённой лёгочной ткани и среднегрупповыми титрами антител (РСК) установле на функциональная обратная зависимость Исследовали влияние типа адъюванта на иммунологическу ю эффективность инактивированной вакцины. В качестве адъювантов испол ьзовали гидрат окиси алюминия и масляный адъювант на основе лёгкого мин ерального масла. Эмульгированной вакциной привили 315 поросят (полсектор а) в неблагополучном по актинобациллёзной плевропневмонии хозяйстве, 317 свиней этого же сектора служили контролем. Гидроокись -алюминиевую вакц ину ввели 647 поросятам, контролем служили 652 животных. Наблюдение за животн ыми вели в течении 86 дней, заболевание свиней актинобациллёзной плевроп невмонией наблюдали во всех группах. Индекс и коэффициент эффективност и эмульгированной вакцины в этом опыте составил соответственно 7,95 и 8,42%. Ан алогичные показатели в группе свиней привитых РОА вакциной были соотве тственно 3,12 и 67,98%, что свидетельствует о большей эффективности эмульгиров анной вакцины. При конструировании инактивированной вакцины, исходя из полученных да нных о накоплении в культуральной жидкости экзотоксина, гемолизина и ка псульной субстанции, исследовали влияние растворимых антигенов бульон ных культур на её иммуногенность. В опыте на белых была определена ИМД 50 эмульгированной вакцины приготовленной на основе бульонных культур и отмытых клетках возбудителя. ИМД 50 вакцины первого типа составила микробных клеток, у вакцины второ го типа ИМД 50 не удалось рассчитать, так как п роцент защиты при избранных дозах вакцины не превысил 36,36%. Следовательно, включение растворимых компонентов реакторных культур возбудителя в со став инактивированных вакцин необходимо. При отработке оптимальной схемы иммунизации свиней инактивированной эмульгированной вакциной исследовали влияние кратности её введения н а уровень иммунитета у свиней. В одном случае свиньям (8 голов) вводили вакцины однократно, в другом случ ае – дробно 1 и2 интервалом 10 суток (8 голо в). Свиней заразили через 20 дней после вакцинации интраназально в дозе Установлено, что среди свиней, вакцинированных двукратно, лета льных исходов не было. Из числа привитых однократно погибло 50% животных. М ежду животными этих групп также выявлена достоверная разница по высоте титров антител (РА). Исходя изменений полученных данных можно заключить, что результаты серологических реакций могут служить косвенным группов ым показателем формирования иммунитета. Исследовали влияние суммарной дозы антигена при двукратной (интервал - 15 суток) вакцинации свиней эмульгированной вакциной на состояние иммун итета. Установлено, что среди привитых различными дозами вакцины свиней (16 голов) при контрольном интраназальном заражении летальных исходов не было, в конт роле погибло 50% животных. Среди животных, привитых вакциной в суммарных до зах 10,6,4 и 2 , объём поражённой лёгочной ткани в ср еднем по группам соответственно составил 5,25 6,70, 5,94 8,01, 5,69 10,24, 10,50 8,57%. У контрольн ых свиней было поражено 25,1% лёгочной ткани. Различия в титрах комплементс вязывающих антител у вакцинированных животных перечисленных групп пер ед заражением были статистически не достоверны, также не достоверны раз личия по объёму поражённой лёгочной ткани. Свиноводства учётом заболев аемости, количества летальных исходов и объёма поражённой лёгочной тка ни мы считаем оптимальной дозу вакцины 4 , введённую по схеме 1+3 . Исследовали сроки формирования и длительность иммунитета у свиней, пр ивитых однократных эмульгированной вакциной в дозе 5 с контрольным интраназальным зараже нием через 10, 30 и 60 дней после иммунизации. Исходя из уровня защиты вакцинир ованных животных указанных групп и площади поражённой лёгочной ткани, б лизкие показатели состояния иммунитета имели свиньи через 10 и 30 дней со с нижением к 60 дню после вакцинации. Между показателями защиты (%) и площади п оражения лёгочной ткани выявлена обратная функциональная зависимость ( r= -1) . Значительная заболеваемость свиней актинобациллёзной плевропневмонией в первый период откорма в н еблагополучном хозяйстве, с учётом полученных данных, свидетельствует о необходимости ревакцинации свиней в период передачи на откорм. Определение иммуногенности вакцины в опытах на белых мышах в процессе хранения при 4-6 С по казало, что в интервале 1-11 месяцев ИМД 50 препа рата колебалась в пределах микробных клеток, что позволяет говорить о малом изменении активности препарата в указанные сроки. С учётом результатов испытания различных типов инактивированных вак цин на лабораторных животных и свиньях была проведена апробация экспер иментальных образцов вакцин против актинобациллёзной плевропневмони и свиней в производственных условиях. Первоначально эмульгированная вакцина была испытана на безвредность и иммунологическую эффективность на ограниченном контингенте свиней различного возраста в хозяйстве, неблагополучном по актинобациллёзной плевропневмонии свиней. В последующем в этом же хозяйстве проводилась п оголовная вакцинация животных по следующей схеме: внутримышечно свино маткам за 20-25 дней до ожидаемого опороса в дозе 1 , аналогичную дозу вводи ли ремонтным свинкам, поросят вакцинировали в дозе 1 в возрасте 35 - 40 дне й. В пер иод проведённых исследований вакцинации было подвергнуто 1677,4 тысячи сви ней. Исследования показали, что до начала вакцинации падёж свиней с диагноз ом актинобациллёзной плевропневмонии составил 30,22% от общего количества павших животных, при частичной вакцинации поголовья -12,28%, при полной вакци нации - 8,89%. Между уровнем вакцинации и падёжом свиней от актинобациллёзно й плевропневмонии установлена достаточно сильная обратная связь ( r= -0,71) . Применение вакцины обеспечило сни жение отхода свиней по причине актинобациллёзной плевропневмонии, в за висимости от анализируемого периода в 3 - 5 раз и увеличение живой массы по росят на 7,42 - 8,29 кг при передаче на отк орм. Частота терапевтического вмешательства ветеринарного персонала в группах вакцинированных поросят была в 2,11 раза реже, чем среди не вакцини рованных животных. Вывод ы 1. Исследование таксономиче ского положения эпизоотических штаммов НАД--зависимых бактерий, выделе нных при пневмониях и генерализованных серозитах свиней методом нумер ического анализа, позволило дифференцировать их по фенотипическим сво йствам на кластеры, соответствующие видам Actinobacillus (Haemophilus) pleuropneumoniae, Haemophilus parasuis и таксону гемофильных бактерий «мала я группа». Культуры кластера Actinobacillus (Haemophilus) pleuropneumoniae имеют большее фенотипическое сходство с видами рода Actinobacillus (91,23) и меньшее с представителями рода Haemophilus (81,99%) . На уровне подобия 95% бактери й кластера «малая группа» выделяются в самостоятельный таксон. 2. Генетический анализ такс ономического положения референтных и эпизоотических НАД--зависимых шт аммов Actinobacillus (Haemophilus) pleuropneumoniae и культур P.haemolytica - подобных бактерий (2-ой биовар A.pleuropneumoniae) показал, что они образуют ге нетическую общность с уровнем гомологии ДНК 70-98%. ДНК культур 2-го биовара и эпизоотических штаммов A.pleuropneumoniae име ют гомологию с ДНК A.suis – 33 - 38%, с ДНК H.parasuis и P.multocida – не более 9%, что свидетельствует о принадлежности эпизоо тических и референтных штаммов к роду Actinobacillus, но не Haemophilus и Pasteurella. Референтный штамм J 95 гемофильных бактерий таксона «С» по рез ультатам гибридизации ДНК к роду Haemophilus не относится. 3. Результаты изучения такс ономического положения НАД--зависимых бактерий, выделенных при пневмон иях и серозитах свиней, позволили определить в качестве основных диффер енцирующих фенотипических признаков: НАД— зависимость, образование ще лочной фосфатозы, уреазы, гемолизина, кислоты из ксилозы, маннита, манноз ы. Для дифференциации культур НАД— независимого биовара A.pleuropneumoniae от сходных бактерий минимальный наб ор определяемых признаков включает продукцию индола, уреазы, утилизаци ю цитратов, наличие жгутиков. Для установления ферментативных свойств Н АД--зависимых бактерий можно использовать дифференциально - диагностич еские среды в микрообъёмах и диагностический набор ПБДЭ Горьковского Н ИЭМ, что исключает использование чистого НАД или других его источников к ак факторов роста. 4. К A.pleuropneumoniae и H.parasuis чувстви тельны при внутрибрюшинном и интраназальном заражении морские свинки ( живая масса 200-250г) и белые мыши (живая масса 14-16г), которые могут быть использо ваны для определения патогенных свойств культур, изучения вопросов пат о - и иммуногенеза при этих инфекциях. 5. Входными воротами возбуд ителя инфекции при гемофилёзном полисерозите являются органы дыхания. При экспериментальном (трахеальном) заражении свиней H.parasuis инкубационный период составляет 6-8 час ов. У заражённых свиней развивается катаральная пневмония и, в результат е диссеминации возбудителя, генерализованные серозиты с одновременным поражением серозных оболочек грудной, брюшной полостей, пери – и эпика рда. 6. В естественных условиях H.parasuis вызывает у поросят-отъёмышей п невмонию, у части животных развивается септическая стадия с поражением серозных оболочек, суставов, головного мозга. У отдельных поросят встреч ается классическая форма болезни Глессера - генерализованные серозиты без микроскопически выраженной пневмонии. У экспериментально заражённ ых и естественно больных свиней наиболее часто удаётся изолировать H.parasuis из поражённых серозных оболочек. 7. Входными воротами возбуд ителя инфекции при актинобациллёзной плевропневмонии свиней являются органы дыхания. Инкубационный период при экспериментальном интраназал ьном заражении составляет 2-4 часа, контактном – до 3 суток, в естественных условиях – 2-8 суток. Диссеминация возбудителя в организме заражённых жи вотных происходит на фоне имеющихся изменений в лёгких. Наиболее постоя нно культуры возбудителя удаётся изолировать от экспериментально зара жённых и естественно больных животных из поражённой ткани лёгких и реги онарных лимфатических узлов. 8. Культуры A.pleuropneumoniae на начальной стадии логарифмическо го роста синтезируют термолабильные гемолизин и экзотоксин, которые оп ределяют повышенную вирулентность молодых (6-8- часовых) культур возбудит еля и играют существенную роль в развитии патологических изменений в лё гких заражённых животных. 9. Макроскопически сходные изменения в лёгких свиней могут вызвать A.pleuropneumoniae, гемофильные бактерии «малой группы» и A.suis , поэтому решающее значение в диагности ке актинобациллёзной плевропневмонии имеют результаты бактериологич еского исследования. 10. При серологической идент ификации эпизоотических культур H.parasuis установлено наличие сероваров А,В,С,Д, Бакоса, а также выявлены четы ре серологические группы штаммов, не укладывающиеся в известную схему Б акоса, которая не охватывает всего антигенного многообразия вида. 11. Серологическая идентифик ация эпизоотических культур A.pleuropneumoniae, выделенных от свиней в хозяйствах Российской Федерации, выявила н аличие сероваров 2,3,4,6 и группы нетипируемых штаммов. Исследования в РНГА с ывороток крови свиней из различных хозяйств показало доминирование ан тител к сероварам 1,2,4,6,12. 12. На основании проведённых исследований разработана и используется в практике схема лабораторной диагностики актинобациллёзная ( гемофилёзная ) плевропневмонии и гемоф илёзного полисерозита свиней, включающая: правила взятия материала для бактериологического исследования, методы выделения и идентификации ку льтур возбудителя по биологическим свойствам. Также разработаны и реко мендованы методы видовой и серовариантной идентификации культур A.pleuropneumoniae и обнаружения антигенов этого ви да бактерий в патологическом материале при помощи реакции коагглютина ции. 13. Разработана и предложена технология изготовления, контроля использования вакцины против гемофи лёзной (актинобациллёзная) плевропневмонии свиней, что нашло отражение в соответствующих нормативных документах: «Инструкция по изготовлению и контролю вакцины против гемофилёзной плевропневмонии свиней», «Вакц ина против гемофилёзной плевропневмонии свиней эмульгированная. Техни ческие условия ТУ 10-09-53-90». «Наставление по применению вакцины против гемоф илёзной плевропневмонии свиней эмульгированной», утверждённых ГУВ ГК Совмина СССР по продовольствию и закупкам 11.07.1990г. 14. Инактивированные вакцины из клеток A.pleuropneumoniae обладают значите льной остаточной токсичностью. Эффективное снижение токсичности готов ых препаратов достигается инактивацией бактериальных суспензий 0,2% форм альдегида с последующим выдерживанием до употребления при 4-6 С в течение 45 суток. 15. В качестве лабораторных м оделей при оценке иммуногенности инактивированных актинобациллёзных вакцин могут быть использованы белые мыши – подкожная двукратная имму низация с последующим внутрибрюшинном заражением различными дозами ви рулентной культуры, или морские свинки в варианте подкожной вакцинации с последующим интраназальном заражением. 16. Максималь ной иммуногенностью для свиней обладают инактивированные эмульгирова нные вакцины из клеток A.pleuropneumoniae с вкл ючением в их состав растворимых антигенов, накапливающихся в реакторны х культурах в процессе роста. 17. В опытах прямого заражени я при испытании эффективности иммунизации в условиях неблагополучного хозяйства установлено, что разработанная инактивированная вакцина не защищает полностью иммунизированных свиней от заражения, но обеспечив ает более лёгкое течение болезни, в частности снижается отход в 3-5 раз, час тота терапевтического вмешательства снижается в 2,11 раза, увеличивается живая масса поросят при передаче на откорм на 7,42 – 8,29кг, что позволяет расс матривать вакцинацию как экономически целесообразный составной компо нент комплекса лечебно-профилактических мероприятий по борьбе с актин обациллёзной плевропневмонией свиней. Практич еские предложения. Временные методические указания по лабораторной диагностике ге мофилёзного полисерозита поросят. Рекомендованы МСХ СССР 17.01.1978г. № 116-18. Временные методические указания по лабораторной диагностике ге мофилёзной плевропневмонии свиней. Утверждены ГУВ МСХ СССР 16.04.1981г. Методические указания по диагностике гемофилёзов свиней. Утверж дены ГУВ МСХ СССР 2.11.1985г. № 115-6а. Методические указания на изготовление и применение коагглютини рующего антительного диагностикума для экспресс – идентификации Гемо филюс плевропневмоние и индикации возбудителя в патологическом матери але. Утверждены отделением ветеринарии РАСХН 16.02.1993г. Временная инструкция о мероприятиях по борьбе с гемофилёзами сви ней. Утверждена ГУВ МСХ СССР 2.11.1985г. № 115--6а. Инструкция по изготовлению и контролю вакцины против гемофилёзн ой плевропневмонии свиней. Утверждена ГУВ МСХ СССР 11.07.1990г. Вакцина против гемофилёзной плевропневмонии свиней эмульгирова нная. Технические условия ТУ 10-09-53-90. Утверждены ГУВ МСХ СССР 11.07.1990г. Наставление по применению вакцины против гемофилёзной плевропн евмонии свиней. Утверждено ГУВ МСХ СССР 11.07.1990г. Список опубликованных работ. 1. Сидоров М.А., Скородумов Д.И., Т арасенок Н.И. и др. - Инфекционный полисерозит поросят // Свиноводство, 1976 №11,35-36. 2. Сидоров М.А., Скородумов Д.И., Г умбатов Ю.К. - Патогенность возбудителя гемофилёзного полисерозита для л абораторных животных и поросят // Труды ВИЭВ, 1977, Т.45,50-54. 3. Скородумов Д.И., Гумбатов Ю.К. - Выделение возбудителя гемофилёзного полисерозита и изучение некоторы х его свойств // Бюл. ВИЭВ, 1977, вып.21,14-17. 4. Сидоров М.А., Скородумов Д.И., Г умбатов Ю.К. - Роль бактерий рода Гемофилюс в инфекционной патологии живо тных // Ветеринария, 1978, №5,102-108. 5. Временные методические ука зания по лабораторной диагностике гемофилёзного полисерозита свиней ( ГУВ МСХ СССР. 17.10.1978) / Сидоров М.А., Скор одумов Д.И. 6. Шубин В.А., Сидоров М.А., Андрыи шин..., Скородумов Д.И. - Патоморфологические изменения у больных полисероз итом поросят // Труды ВИЭВ, 1978, т.47,135-141. 7. Сидоров М.А., Скородумов Д.И., Ш убин В.А., Тарасенок Н.И., Гумбатов Ю.М. - Экспериментальный гемофилёзный пол исерозит поросят // Труды ВИЭВ, 1979, т .49,90-95. 8. Сидоров М.А., Скородумов Д.И., Т арасенок Н.И., Гумбатов Ю.К. - Иммуногенность вакцины против гемофилёзного полисерозита поросят // Доклады В АСХНИЛ, 1980, №8,30. 9. Сидоров М.А., Скородумов Д.И., Г умбатов Ю.К., Тарасенок Н.И. - Серологические варианты гемофильных бактери й выделенных от свиней // Ветерина рия, 1980, №4,66-67. 10. Скородумов Д.И., Сидоров М.А. - Х арактеристика гемолитических гемофильных бактерий выделенных от боль ных пневмонией свиней // Труды ВИЭ В, 1980, т.52.,13-18. 11. Шубин В.А., Сидоров М.А., Скород умов Д.И. - Динамика изменений в лёгких поросят при экспериментальном инф екционном полисерозите // Сборник «Патоморфология, патогенез и диагностика болезней с\х животных». Научн ые труды ВАСХНИЛ, Москва,1980, 128-131. 12. Сидоров М.А.. Скородумов Д.И. - С войства Гемофилюс плевропневмоние выделенных от больных свиней // Ветеринария, 1981, №1,45-47. 13. Сидоров М.А., Скородумов Д.И., Л аврентьев Н.И., Мицаев Ш.Ш., Романова Л.Я., Юдин А.И. - Диагностика гемофилёзной плевропневмонии свиней // Ветерин ария, 1981, №12, 66-68. 14. Временные методические ука зания по лабораторной диагностике гемофилёзной плевропневмонии свине й (ГУВ МСХ СССР.1981 / Сидоров М.А., Скоро думов Д.И.). 15. Сидоров М.А., Скородумов Д.И., П анов В.С., Гушин В.Н., Седов В.А. - Вакцина против гемофилёзной плевропневмони и свиней, способ её изготовления и способ профилактики гемофилёзной пле вропневмонии свиней. Авт. свидетельство на изобретение № 907899 от 21.10.81г. 16. Сидоров М.А., Скородумов Д.И., Т арасенок Н.И., Шубин В.А. - Способ приготовления вакцины против гемофилёзно го полисерозита поросят. Авт. свидетельство на изобретение № 957472 от 07.05.1982г. 17. Сидоров М.А., Скородумов Д.И., Г ущин В.А. - Не допускайте заболевания свиней гемофилёзами // Газета - плакат МСХ СССР, Москва, Колос, 1982, № 7. 18. Сидоров М.А., Скородумов Д.И., Л аврентьев Н.И. - Специфическая профилактика гемофилёзной плевропневмон ии свиней // Сборник «Ветеринарны е проблемы в промышленном свиноводстве», Киев, 1983, 97-98. 19. Лаврентьев Н.И., Скородумов Д. И., Романова Л.Я., Финенко Р.Ф. - Применение РА в диагностике гемофилёзной пле вропневмонии свиней // Сборник на учных трудов «Инфекционные болезни с\х животных», Омск, 1983. 20. Скородумов Д.И., Гумбатов Ю.К ., - Потребность бактерий рода Гемофилюс в ростовых факторах. // Бюллетень ВИЭВ, 1983, вып.45, 6-9. 21. Сидоров М.А., Скородумов Д.И., Л аврентьев Н.И. - Гемофилёзная плевропневмонии свиней // Свиноводство, 1984, №4,14-15. 22. Временная инструкция о меро приятиях по борьбе с заболеваниями свиней гемофилёзами (ГУВ МСХ СССР 2.11.1985) / Сидоров М.А. 23. Методические указания по ди агностике гемофилёзов свиней (ГУВ МСХ СССР 2.11.1985) / Сидоров М.А., Скородумов Д.И. 24. Сидоров М.А., Скородумов Д.И., Л огинов И.А., Лаврентьев Н.И. - Профилактика гемофилёзной плевропневмонии с виней // Ветеринария, 1985, № 12,37-38. 25. Шубин В.А., Татришвили И.П., Сид оров М.А., Скородумов Д.И. - Патоморфологические изменения при гемофилёзно й плевропневмонии поросят // Вете ринария, 1985, № 11, 40-43. 26. Сидоров М.А., Скородумов Д.И. - Г емофилёзы животных. Агропромиздат.М.1986. 27. Сидоров М.А., Мицаев Ш.Ш., Скоро думов Д.И. - Патогенность H.pleuropneumoniae для животных // Ветеринария, 1989, № 11, 39-41. 28. Вакцина против гемофилёзно й плевропневмонии свиней эмульгированная. Технические условия ТУ 10-09059-90 (Г УВ МСХ СССР 11.07.1990) / Сидоров М.А., Скоро думов Д.И., Логинов И.А., Субботин В.В., Мохина Т.Н. 29. Инструкция по изготовлению и контролю вакцины против гемофилёзной плевропневмонии свиней эмульги рованной (ГУВ МСХ СССР 11.07.1990) / Сидоро в М.А., Скородумов Д.И., Логинов И.А., Субботин В.В. 30. Наставление по применению в акцины против гемофилёзной плевропневмонии свиней эмульгированной (ГУ В МСХ СССР, 11.07.1990) / Сидоров М.А.. Скород умов Д.И., Логинов И.А. Субботин В.В. 31. Сидоров М.А., Скородумов Д.И., С толяренко В.Т., Субботин В,В. - Специфическая профилактика гемофилёзного п олисерозита поросят // ВАСХНИЛ, НТ Ц. Научно-технической информационный сборник. Москва,1991, вып.9. 32. Сидоров М.А., Лаврентьев Н.И., С убботин В.В., Логинов И.А., Скородумов Д.И. - Эффективность вакцинации против гемофилёзной плевропневмонии свиней // Ветеринария, 1991, № 4,25-27. 33. Скородумов Д.И., Бурлаков В.А., Костенко Т.С. - Таксономия бактерий семейства Pasteurellaceae // Методические указания. Москва, 1991. 34. Скородумов Д.И., Сидоров М.А., П руссак-Глотов В.Э. - Возбудители фибринозно-геморрагической плевропневм онии свиней // Ветеринария, 1992, №6,21-24. 35. Фомин Б.А., Коромыслов Г.Ф., Арт юшин С.К., Скородумов Д.И., Сидоров М.А. - Гомология ДНК H.pleuropneumoniae и некоторых видов бактерий семейств а Pasteurellaceae // Ветеринария, 1992, № 6,28-30. 36. Скородумов Д.И., Сидоров М.А., Б лему Ж. - Методические указания на изготовление и применение коагглютини рующего диагностикума для экспресс - идентификации Гемофилюс плевропн евмонии и индикации возбудителя в патологическом материале // Отделение ветеринарии РАСХН. 13.02.1993. 37. Скородумов Д.И. - Свойства гем олизинов возбудителя актинобациллёзной плевропневмонии свиней // Сборник научных трудов «Актуальные в опросы инфекционных и инвазионных болезней животных». Москва, 1995, 50-52. 38. Сидоров М.А., Скородумов Д.И., Ф едотов В.Б. - Определитель зоопатогенных бактерий (справочная книга) М., Ко лос, 1995. 39. Сидоров М.А., Скородумов Д.И., Б лему Ж. - Применение реакции коагглютинации для идентификации возбудите ля актинобациллёзной плевропневмонии свиней // Материалы Всероссийской научной конференции «Инфекцион ные болезни молодняка с\х животных». М., 1996, 47-49. 40. Скородумов Д.И., - Критерии ди фференциации гемофильных бактерий патогенных для свиней // Сборник научных трудов «Актуальные вопр осы инфекционных и инвазионных болезней животных», Москва, 1996, 106-109. 41. Скородумов Д.И. - Патогенные с войства культур возбудителя гемофилёзной плевропневмонии свиней // Сборник научных трудов «Актуальные вопросы инфекционных и инвазионных болезней животных», Москва, 1996, 104-106.
1Архитектура и строительство
2Астрономия, авиация, космонавтика
 
3Безопасность жизнедеятельности
4Биология
 
5Военная кафедра, гражданская оборона
 
6География, экономическая география
7Геология и геодезия
8Государственное регулирование и налоги
 
9Естествознание
 
10Журналистика
 
11Законодательство и право
12Адвокатура
13Административное право
14Арбитражное процессуальное право
15Банковское право
16Государство и право
17Гражданское право и процесс
18Жилищное право
19Законодательство зарубежных стран
20Земельное право
21Конституционное право
22Конституционное право зарубежных стран
23Международное право
24Муниципальное право
25Налоговое право
26Римское право
27Семейное право
28Таможенное право
29Трудовое право
30Уголовное право и процесс
31Финансовое право
32Хозяйственное право
33Экологическое право
34Юриспруденция
 
35Иностранные языки
36Информатика, информационные технологии
37Базы данных
38Компьютерные сети
39Программирование
40Искусство и культура
41Краеведение
42Культурология
43Музыка
44История
45Биографии
46Историческая личность
47Литература
 
48Маркетинг и реклама
49Математика
50Медицина и здоровье
51Менеджмент
52Антикризисное управление
53Делопроизводство и документооборот
54Логистика
 
55Педагогика
56Политология
57Правоохранительные органы
58Криминалистика и криминология
59Прочее
60Психология
61Юридическая психология
 
62Радиоэлектроника
63Религия
 
64Сельское хозяйство и землепользование
65Социология
66Страхование
 
67Технологии
68Материаловедение
69Машиностроение
70Металлургия
71Транспорт
72Туризм
 
73Физика
74Физкультура и спорт
75Философия
 
76Химия
 
77Экология, охрана природы
78Экономика и финансы
79Анализ хозяйственной деятельности
80Банковское дело и кредитование
81Биржевое дело
82Бухгалтерский учет и аудит
83История экономических учений
84Международные отношения
85Предпринимательство, бизнес, микроэкономика
86Финансы
87Ценные бумаги и фондовый рынок
88Экономика предприятия
89Экономико-математическое моделирование
90Экономическая теория

 Анекдоты - это почти как рефераты, только короткие и смешные Следующий
— На Хэллоуине я был в костюме коня!
— Чё — с гривой и в яблоках?
— Да нет, в пальто.
Anekdot.ru

Узнайте стоимость курсовой, диплома, реферата на заказ.

Обратите внимание, реферат по сельскому хозяйству и землепользованию "Актинобациллезная гемофилезная", также как и все другие рефераты, курсовые, дипломные и другие работы вы можете скачать бесплатно.

Смотрите также:


Банк рефератов - РефератБанк.ру
© РефератБанк, 2002 - 2016
Рейтинг@Mail.ru