Диплом: Исследование апоптотической активности лимфоцитов периферической крови in vitro при инфекционном мононуклеозе и мононуклеозоподобном синдроме - текст диплома. Скачать бесплатно.
Банк рефератов, курсовых и дипломных работ. Много и бесплатно. # | Правила оформления работ | Добавить в избранное
 
 
   
Меню Меню Меню Меню Меню
   
Napishem.com Napishem.com Napishem.com

Диплом

Исследование апоптотической активности лимфоцитов периферической крови in vitro при инфекционном мононуклеозе и мононуклеозоподобном синдроме

Банк рефератов / Биология

Рубрики  Рубрики реферат банка

закрыть
Категория: Дипломная работа
Язык диплома: Русский
Дата добавления:   
 
Скачать
Microsoft Word, 1075 kb, скачать бесплатно
Обойти Антиплагиат
Повысьте уникальность файла до 80-100% здесь.
Промокод referatbank - cкидка 20%!
Заказать
Узнать стоимость написания уникальной дипломной работы

Узнайте стоимость написания уникальной работы

72 ИССЛЕДОВАНИЕ АПОПТОТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ЛИМФОЦИТОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КР ОВИ IN VITRO ПРИ ИНФЕКЦИОННОМ МОНОНУКЛЕОЗЕ И МОНОНУКЛЕОЗОПОДОБНОМ СИНДРОМЕ Научные руководители : чл.-корр . РАМН , профессор В.В . Новицкий , к.м.н . О.И.Уразова Цель исследо вания : Установить особенности апоптотической активности лимфоцитов периферической крови при инфекционным мононуклеозом и острыми инфекционными заболеваниями с мононуклеозоподобным синдромом. Задачи исследования : 1. Охарактеризовать количественные показате ли периферической крови у больных инфекционным мононуклеозом и острыми инфекционными заболеваниями с мононуклеозоподобным синдромом в различные фазы течения и в отдаленном периоде после болезни ; 2. Провести оценку жизнеспособности лимфоцитов периферическо й крови у больных инфекционным мононуклеозом и острыми инфекционными заболеваниями с мононуклеозоподобным синдромом в различные фазы течения и в отдаленном периоде после болезни ; 3. Оценить содержание фрагментированной ДНК в лимфоцитах периферической кров и у больных инфекционным мононуклеозом и острыми инфекционными заболеваниями с мононуклеозоподобным синдромом в различные фазы течения и в отдаленном периоде после болезни ; 4. Оценить содержание лимфоцитов периферической крови с морфологическими признакам и апоптоза у больных инфекционным мононуклеозом и острыми инфекционными заболеваниями с мононуклеозоподобным синдромом в различные фазы течения и в отдаленном периоде после болезни ; 5. Установить особенности и оценить степень изменений апоптотич еской активности лимфоцитов при инфекционном мононуклеозе и мононуклеозоподобном синдроме в зависимости от сроков исследования. Выводы : 1. У детей , больных инфекционным мононуклеозом и острыми инфекционными заболеваниями с мононуклеозоподобным синдромом , в острый период болезни на фоне повышения общего количества лейкоцитов , обусловленного увеличением содержания моноцитов , палочкоядерных нейтрофилов , АМ и абсолютного числа лимфоцитов , содержание сегментоядерных нейтрофилов снижается . 2. В период клиничес кого выздоровления у больных инфекционным мононуклеозом и острыми инфекционными заболеваниями с мононуклеозоподобным синдромом содержание лимфоцитов и АМ остается повышенным , количество моноцитов и гранулоцитов нормализуется . Данные изменения сохраняются в катамнезе . У детей , перенесших ИМ развивается моноцитопения . 3. Жизнеспособность и спонтанная апоптотическая активность лимфоцитов периферической крови у детей , больных инфекционным мононуклеозом и острыми инфекционными заболеваниями с мононуклеозоподоб ным синдромом не изменяется . 4. Количество апоптотически измененных клеток и содержание фрагментированной ДНК , при индукции апоптоза лимфоцитов периферической крови in vitro у детей , больных инфекционным мононуклеозом и острыми инфекционными заболевани ями с мононуклеозоподобным синдромом снижено . 5. В период реконвалесценции у детей , больных острыми инфекционными заболеваниями с мононуклеозоподобным синдромом , количество апоптотически измененных клеток и содержание фрагментированной ДНК нормализуетс я , в то время как у больных ИМ сохраняется сниженным . 6. В отдаленном периоде после болезни у детей с инфекционным мононуклеозом и острыми инфекционными заболеваниями с мононуклеозоподобным синдромом показатели апоптотической активности лимфоцитов перифе рической крови соответствуют норме . 7. При ИМ и МПС наблюдается угнетение Апоптотическая активность лимфоидных клеток при инфекционном мононуклеозе и мононуклеозоподобном синдроме ниже таковой у здоровых детей , что проявляется снижением числа апоптотичес ки измененных клеток и ДНК-фрагментации . У больных ИМ данные изменения носят более выраженный характер , сохраняются в фазу реконвалесценции , и восстанавливаются лишь в отдаленном периоде после болезни. СИБИРСКИЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ КАФЕДРА БИОФИЗ ИКИ (зав . кафедрой – д.м.н ., профессор . аков ) Допущена к защите « ___» _____________2001г. Дипломная работа ИССЛЕДОВАНИЕ АПОПТОТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ЛИМФОЦИТОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ IN VITRO ПРИ ИНФЕКЦИОННОМ МОНОНУКЛЕОЗЕ И МОНОНУКЛЕОЗОПОДОБНОМ СИНДРО МЕ Работа выполнена : кафедра патофизиологии СГМУ зав . - чл .- корр . РАМН , профессор В.В . Новицкий ЦНИЛ СГМУ лаборатория молекулярной биологии зав .- к.м.н . И.И . Иванчук Научные руководители : чл.-корр . РА МН , профессор В.В . Новицкий , к.м.н . О.И.Уразова Томск -2001 Оглавление Список сокращений..............................................................……..… 3 Введение .............................................................................………… .4 Глава 1. Обзор литературы..................................................…… ......7 1.1. Инфекционный мононуклеоз (краткие сведения )……………………………………………...…… .7 1.2. Картина крови при инфекционном мононуклеозе……………………………………………………..… .11 1.3. Апоптоз………………………………………………………..… 16 1.3.1. Апоптоз как форма гибели клетки…………………………………………………………… ...16 1.3.2. Морфологические и биохимические проявления апоптоза………………………………… ……………………..… 18 1.3.3. Распознавание апоптотирующей клетки макрофагом……………………………………………….…… ....20 1.3.4. Гены , участвующие в апоптозе………………………..… .21 1.3.5. Необходимость изучения апоптоза…………………… .....22 1.4. Заключение……………………………………………….…… 24 Глава 2. Матери алы и методы…………………………………… ...25 Глава 3. Результаты…………………………………….………… ...30 Глава 4. Обсуждения полученных результатов………...……… ....42 Выводы…………………………….………...……………………… 53 Список литературы……………………………………..………… ...55 Список сокращений АМ - “атипичные моно нуклеары” ВИЧ - вирус иммунодефицита человека ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота фДНК - фрагментированная дезоксирибонуклеиновая кислота EBV – вирус Эпштейна-Барр ИМ - инфекционный мононуклеоз КОЕ-ГМ – колониеобразующая единица грануломоноцитопоэза ОИЗ с МП С - острые инфекционные заболевания с мононуклеозоподобным синдромом РНК - рибонуклеиновая кислота мРНК - матричная рибонуклеиновая кислота СПИД - синдром приобретенного иммунодефицита ЭТС - эмбриональная телячья сыворотка Введение Актуальность проблемы : В патогенезе вирусных инфекций чрезвычайно важную роль играет гибель клеток , реализующаяся в форме некроза или апоптоза . Некроз является результатом травматического повреждения клетки , приводящего к нарушению целостности клеточных м ембран . Апоптоз , запрограммированная или “физиологическая” форма клеточной гибели , реализуется посредством заложенных в генотипе клетки механизмов самоуничтожения и морфологически характеризуется уменьшением размеров клетки , уплотнением и фрагментацией хр о матина [Погорелов В.М ., Козинец Г.И ., 1995; Ярилин А.А ., 1996; Маянский А.Н . и соавт ., 1997; Утешев Д.Б . и соавт ., 1998]. Инфекционный мононуклеоз (ИМ ) – лимфопролиферативное заболевание , возбудителем которого является вирус Эпштейна-Барр ( EBV ), относящий ся к семейству герпесвирусов [Дранкин Д.И ., Заяц Н.А ., 1982]. Уникальность EBV заключается в его способности не разрушать , а стимулировать пролиферацию зараженных им лимфоцитов путем изменения соотношения между ростовыми и апоптозными потенциями клеток [Др анкин Д.И ., Заяц Н.А .,1982]. Известно более десятка вирусных генов , которые кодируют факторы , усиливающие апоптозный процесс . Имеются они и у герпесвирусов . Некоторые вирусы способны блокировать апоптозный ответ на собственную инфекцию . Это достигается с помощью двух механизмов – повышения экспресии антиапоптозных (рост-стимулирующих ) генов клетки и инактивации эффекторных молекул апоптоза . К первому механизму можно отнести стимуляцию протоонкогена типа В cl -2, которая наблюдается , в частности , при персисте нции EBV в В-лимфоцитах [ Uehara T . e . a ., 1992; Akbar A . N . e . a ., 1993]. Однако необходимо отметить , что несмотря на проведение достаточно большого количества исследований , посвященных изучению процессов клеточной гибели , сведения , касающиеся особенностей а поптоза клеток крови при действии EBV , в доступной литературе крайне немногочисленны и фрагментарны , что и послужило причиной настоящего исследования . Цель исследования : Установить особенности апоптотической активности лимфоцитов периферической крови при инфекционным мононуклеозом и острыми инфекционными заболеваниями с мононуклеозоподобным синдромом. Задачи исследования : 6. Охарактеризовать количественные показатели периферической крови у больных инфекционным мононуклеозом и острыми инфекционными заболев аниями с мононуклеозоподобным синдромом в различные фазы течения и в отдаленном периоде после болезни ; 7. Провести оценку жизнеспособности лимфоцитов периферической крови у больных инфекционным мононуклеозом и острыми инфекционными заболеваниями с мононук леозоподобным синдромом в различные фазы течения и в отдаленном периоде после болезни ; 8. Оценить содержание фрагментированной ДНК в лимфоцитах периферической крови у больных инфекционным мононуклеозом и острыми инфекционными заболеваниями с мононуклеозоп одобным синдромом в различные фазы течения и в отдаленном периоде после болезни ; 9. Оценить содержание лимфоцитов периферической крови с морфологическими признаками апоптоза у больных инфекционным мононуклеозом и острыми инфекционными заболеваниями с моно нуклеозоподобным синдромом в различные фазы течения и в отдаленном периоде после болезни ; 10. Установить особенности и оценить степень изменений апоптотической активности лимфоцитов при инфекционном мононуклеозе и мононуклеозоподобном синдроме в зависимости от сроков исследования. Глава 1. Обзор литературы. 1.1. Инфекционный мононуклеоз. Инфекционный мононуклеоз (ИМ ) представляет собой острое , обычно доброкачественное лимфопролиферативное заболевание , чаще всего встречающееся в детск ом юношеском возрасте (реже у взрослых ), сопровождающееся иногда серьезными осложнениями , а в редких случаях даже приводящее к летальному исходу [Живица Л.В . и соавт .,1987; Дунаевский О.А ., Постовит В.А .,1982]. Заболевание вызывается EB V , что впервые было показано Henle и соавторами [Купчинский Р.А .,1994]. Вирус EBV представляет собой В-лимфотропный вирус человека , относится к семейству Herpesviridae, подсемейства Gammaherpesviridae, рода Lymphocryptovirus [Львов Н.Д ., Мельниченко А.В .,1999]. Для него хар актерна сферическая форма и наличие 4 структурных компонентов : сердцевина , капсида , внутренние оболочки , внешние оболочки . Сердцевина содержит линейную двунитчатую вирусную ДНК , которая состоит из 80 генов . Размер вириона у основного возбудителя ИМ колебл е тся от 100 до 150 нм [Бисярина В.П . и соавт .,1980; Shuster W . e . a .,1993]. В составе вирионов обнаружено более 30 гликопротеидов , которые находятся на поверхности и вызывают образование вируснейтрализующих антител [ Albeck H . e . a .,1985]. Вирус чувствителен к воздействию эфира , весьма специфичен в отношении роста : размножается в культурах лимфобластов опухоли Беркитта , крови больных ИМ , лейкемических клетках и в культуре клеток мозга здорового человека . [Дранкин Д.И ., 1982;]. Устойчивость EBV во внешней среде низкая . Он быстро погибает при высыхании , высокой температуре , обработке всеми дезинфицирующими средствами [ Imai S .,1990]. EBV отличается от других вирусов семейства герпеса способностью вызывать не цитолиз , а размножение пораженных клеток – В-лимфоцитов. Вирус способен к длительной персистенции в них [ Khanna R . e . a .,1995]. Проникновение EBV в клетку хозяина является сложным многоступенчатым процессом и включает в себя прикрепление вирионов к клеточным рецепторам , эндоцитоз и слияние мембран вирионов и кл етки . В результате этого капсид освобождается от белков внешней оболочки , а комплекс ДНК-белок вируса проникает в ядро [ Wutzler P .,1993]. Вирионная ДНК выходит в нуклеоплазму и транскрибируется клеточной РНК-полимеразой , затем проходит процессинг мРНК , син тез кодируемых продуктов и частичный обратный транспорт их в ядро , репликация ДНК и формирование дочерних молекул [ Wilson A . D . e . a .,1998]. Образовавшиеся в ядрах клеток незрелые капсиды попадают в цитоплазму , где заканчивается формирование зрелых капсидов и внешней оболочки вируса с последующим транспортом к поверхности и выходом их из клетки [ Nikolas J . C . e . a .,1998; Straus S . E . e . a .,1993]. При проникновении в организм человека первоначально EBV поражает эпителиальные клетки носо - и ротоглотки , а затем инфи цирует В-лимфоциты , участвующие в диссеминации возбудителя по организму [Дранкин Д.И ., Заяц Н.А ., 1982]. Эпителиальные клетки могут быть инфицированы EBV через EBV-специфичный С 2- рецептор . При этом процессы деления , дифференцировки и созревания клеток э пителиального слоя протекают параллельно с процессом активного вирусного воспроизводства [ Taga H . e . a .,1995; Wakasugi N . e . a .,1990]. Таким образом , как считают авторы , "эпителиальная EBV-инфекция " - играет решающую роль в воспроизводстве и пожизненной перс истенции вируса в организме человека [ Foss H . D .1995; Ritter S ., Schroder S .,1996]. По современным данным , EBV является возбудителем ИМ в 90% случаев заболевания . К гипердиагностике ИМ у детей могут привести острые инфекционные заболевания с мононуклеозопод обным синдромом (ОИЗ с МПС ). Так МПС может наблюдаться при цитомегалии , иерсинеозе , токсоплазмозе и различных формах ангин (фоликулярная , лакунарная , некротическая ). Считается , что во всех случаях EBV играет свою роль совместно с другими факторами , вызыва ющими иммуносупрессию . В этой связи , заслуживают внимание работы , касающиеся связи EBV и ВИЧ . EBV выявляется в ротовой полости у ВИЧ-инфицированных больных [Жданов В.М .,1984; Anderson J . e . a .,1986]. Механизм взаимодействия EBV с ВИЧ не установлен , хотя изв естно , что оба вируса поражают одни и те же рецепторы лимфоидных клеток . Высказывается предположение о том , что EBV может блокировать проникновение ВИЧ в клетку [Зуев В.А .,1988]. С другой стороны , имеются сообщения о том , что продукты деятельности EBV акт и вируют экспрессию вируса СПИД [Йегер Л .,1990]. Определяющими проявлениями заболевания являются : клиническая картина (высокая температура , ангина , увеличение лимфоузлов , печени , селезенки ), характерные гематологические изменения (увеличение общего количес тва мононуклеарных клеток и атипичных лимфоцитов ) и положительная реакция на гетерофильные антитела [ Bevinck J . N . B . e . a .,1993; Cozad J .,1996; Moss D . J . e . a .,1992]. Следует , однако , отметить , что ни один из указанных признаков не является специфичным для ИМ [Титов и соавт .,1999; Kube D . e . a .,1995]. Диагноз заболевания ставится по совокупности клиники и лабораторных данных . [Гаспарян М . О . 1972; Жибурт и соавт .,1996; Titov L . P . e . a .,1995,1996]. Инкубационный период длится от 2 до 30 дней , чаще 4-7 дней . Забо левание обычно начинается остро , с озноба и повышения температуры до 38-39 С . У некоторых больных в течение 2-3 дней отмечаются продромальные явления в виде слабости , недомогания , потери аппетита [ Di Giuseppe J . A . e . a .,1995; Matter L . e . a .,1987]. Заболеван ие может давать рецидивы . Больные обычно бледны , конъюнктивы умеренно гиперемированы [Мусабаева И.К .,1982; Леенман Е.Е . и соавт .,1999; Verdium C . M . e . a .,1995]. На 2-3 день болезни иногда возникает скарлатиноподобная , узелковая или папулезная сыпь , а у дете й при тяжелом течении заболевания геморрагическая сыпь . Исчезновение сыпи может сопровождаться отрубевидным шелушением [Уразова Л.Н . и соавт .,1989; Schuster V . e . a .,1992]. Постоянным симптомом первых дней болезни является увеличение передне - и заднешейных лимфоузлов , одновременно увеличиваются и другие группы лимфоузлов : подмышечные , паховые . Лимфоузлы плотноватые , болезненные , никогда не спаиваются с окружающей клетчаткой и кожей , не наблюдается их нагноения [Серебряная и соавт .,1998; Hinderer W . e . a .,1990 ]. Может наблюдаться изолированное увеличение внутригрудных лимфоузлов , что вызывает серьезные дифференциально-диагностические затруднения . Реакция лимфоузлов брюшной полости может проявляться болями в животе , особенно в правой подвздошной области (симпто м Корсакова ) [ Wising P . J .,1939,1942]. Процесс обратного развития в лимфоузлах начинается с нормализации температуры , но обычных размеров они достигают в течение 1-2 недель периода реконвалесценции , а иногда и через несколько месяцев [Чирешкина Н.М .,1973; Na her H . Petzoldt D .,1992]. Заболевание обычно сопровождается ангиной , которая по своему характеру бывает лакунарной , катаральной , фолликулярной и язвенно-дифтеритической . В первые дни болезни ангина , как правило , односторонняя и носит характер катаральной , а с 3-4 дня отмечается ангина , которая рассматривается как результат аллергизации организма [ Murtagh J .,1990; Toren A .,1996; Wolf Y . e . a .,1993]. Если в этот период присоединяется вторичная инфекция , у больного повышается температура и ухудшится самочувстви е . Изменения в зеве исчезают через 1-2 недели после начала заболевания [ Grasi G . e . a .,1993]. Иногда ангина отсутствует , часто она сопровождается резкой гиперемией слизистой оболочки зева и носоглотки (“пылающий зев” ) [ Mayer I . e . a .,1992; Wurtzler P .,1993]. К важным симптомам относятся увеличение печени и селезенки . Печень плотная , в ряде случаев нарушается ее функция , появляется желтуха . Селезенка плотная , чувствительна при пальпации , иногда достигает больших размеров , приводящих к ее разрыву [ Kaneg ane H . e . a .,1995,1997]. Поражение других органов и систем наблюдается редко . Имеются единичные указания на развитие пневмоний в начале заболевания , но диагностировать их можно только рентгенологически . У больных отмечается приглушение тонов сердца , в ряде случаев на ЭКГ регистрируется диффузное поражение миокарда [Блюмкин В.Н ., Жданов В.М .,1973]. Язык обычно обложен белым налетом , влажный , иногда бывает тошнота , рвота . Большинство больных жалуются на вялость , головную боль , бессонницу [Мордовец В . И , Рудако ва Р . И ., Гуськова Т . Б .1986; Gosselin J . e . a .,1991]. У больных ОИЗ с МПС наблюдается подобная картина заболевания : лихорадка , аденопатия , нарушение носового дыхания , ангина , увеличение размеров печени и селезенки . Ангина с наложениями на миндалинах , как п равило , сопровождалась реакцией регионарных лимфоузлов , степень увеличения которых соответствовала поражению зева . 1.2. Картина крови при ИМ Картина крови при ИМ является самым достоверным диагностическим критерием [ Anagnostopoulos I . e . a .,1995]. Общепр инятым является мнение о том , что для ИМ характерна триада симптомов со стороны белой крови : умеренный лейкоцитоз , резкий мононуклеоз и качественное изменение мононуклеаров - появление атипичных клеток (АМ ) [ Gratama J . W . e . a .,1994]. Анемия не характерна дл я болезни Филатова , но в разгар заболевания гемоглобин обычно падает на 10-15 единиц [Гаспарян М.О ., Шиленкова В.И .,1972; De Paoli P . e . a .,1990]. Общее количество лейкоцитов либо оставалось нормальным на протяжении всего заболевания , либо умеренно повышало сь . Чаще всего лейкоцитоз отмечался на 1 день болезни . Иногда у детей раннего возраста незначительно повышалось количество эозинофилов . Эозинофилия наиболее отчетливо выявляется на 2, 3 и 4 неделе болезни [ Joseph G . e . a .,1994]. Отмечается небольшое увеличе ние количества палочкоядерных нейтрофилов . Палочкоядерный сдвиг наблюдается у детей всех возрастных групп , однако если у детей раннего возраста он отмечался в 60% случаев , то у детей более старшего возраста (после трех лет ) в 83% [Балашева Т.Б . и соавт .,1 9 96]. Количество сегментоядерных нейтрофилов у большинства больных оставалось в пределах нормы , реже количество этих клеток снижалось . Нейтропения наблюдалась главным образом у детей старшего возраста . У детей раннего возраста в период реконвалесценции (4- 5 неделя болезни ) нередко выявлялся нейтрофилез [ Imreh M . P . e . a .,1995]. Количество нормальных лимфоцитов при ИМ у большинства детей уменьшалось . Наиболее часто уменьшение количества лимфоцитов отмечалось на 1 и 2 неделе болезни . Увеличение количества нормал ьных лимфоидных клеток наблюдалось значительно реже , чем лимфопении и нормальное их содержание [Гаспарян М.О ., Шиленкова В.И .,1972]. Количество моноцитов у большинства детей , на протяжении всего заболевания , оставалось в пределах нормы . В 20-40% случаев н а блюдается уменьшение количества моноцитов . Моноцитоз отмечался только в 15-30% случаев , наиболее отчетливо был выражен на 1 неделе болезни и чаще наблюдался у детей старшего возраста . Моноцитоз является одним из симптомов раздражения ретикуло-эндотелиальн о й системы [Котельников В.М . и соавт .,1982]. АМ обнаруживаются у всех обследованных . Чаще всего они выявляются на 1 неделе заболевания - 76-85% случаев , на 2 неделе - в 62-79%, на 3- в 55-74% и на 4- в 20-50% случаев [Жибурт Е.Б . и соавт .,1996]. Более длитель н о АМ сохранялись в периферической крови у детей в возрасте от 1 до 3 лет [ Beaulieur A . D . e . a .,1996]. Для детей с ОИЗ с МПС выявлена схожая гематологическая картина заболевани . Повышение АМ носило более сглаженный характер . В результате сравнительного изуч ения белой крови при ОИЗ с МПС и ИМ у детей в момент максимальной выраженности симптомов выявили ряд отличий [Мазурина Н.А . и соавт ., 1996]. Так , при ОИЗ с МПС общее количество лейкоцитов было меньше , чем при ИМ , число сегментоядерных нейтрофилов почти в 2 раза больше , а содержание АМ в 2 раза меньше , чем при ИМ . При ОИЗ с МПС чаще всего наблюдается увеличение общего количества нейтрофилов и снижение содержания мононуклеаров . В то же время при ИМ всегда отмечается общий мононуклеоз и уменьшение общего коли ч ества нейтрофилов [Баринский И.Ф . и соавт ., 1994]. Таким образом , несмотря на наличие АМ , при ОИЗ с МПС гематологические сдвиги отличаются от таковых при ИМ и могут быть использованы при дифференциации этих заболеваний [Выдумкина С.П . и соавт ., 1999]. Эле ктронно-микроскопическое исследование показало , что в периферической крови больных ИМ преобладают элементы лимфоцитарного и моноцитарного рядов . Специальное изучение морфологии АМ с помощью светового микроскопа показало , что ядро их чаще всего имеет непра в ильную форму , расположено эксцентрично . Структура ядра в одних клетках грубая , с просветлениями между глыбками хроматина , а в других ядерное вещество распределено равномерно , нередко с 1-2 нуклеолами [ Lewin N . e . a .,1990]. Цитоплазма , как правило , обильная , в части клеток с неровными контурами , разнообразная по степени базофильности - от едва выраженной (“обесцвеченная цитоплазма” ) до интенсивной , с перинуклеарной зоной или без нее . Иногда встречались клетки с выраженной “пенистостью” цитоплазмы [ Nakata M . e . a .,1992]. Исследование поверхностной архитектоники моноцитов у больных ИМ проводилось в период развернутой клинико-гематологической картины заболевания (4-15 сутки ) [ Anagnostopoulos I . e . a .,1995]. Исследование рельефа поверхности моноцитов у детей с ИМ в ыявило снижение содержания клеток с пузыреподобными структурами и переходным типом клеточной поверхности . Обращает на себя внимание значительное уменьшение в крови больных числа моноцитов с ворсинками и относительно гладкой поверхностью [Ютенко А.К . и соа в т .,1994; Ribera E . Ocana I .,1989]. Количество же моноцитов с совершенно гладкой поверхностью мембраны , напротив , превышало нормальные значения . Кроме того , в крови детей с ИМ в большом количестве обнаруживаются моноциты с гребнеподобными структурами [Уразо ва О . И ., Новицкий В . В ., Помогаева А . П ., Жукова О . Б ., 2000]. Отличительной особенностью клеточного состава периферической крови у больных ИМ явилось присутствие клеток с неглубокими точечными впадинами на поверхностной мембране , которые не обнаруживали с ь в крови здоровых детей [Турковская Н . Н .,1977]. Следует отметить также , что распределение моноцитов по типу их поверхностной мембраны у детей с легкой и средней степенью тяжести заболевания носило аналогичный характер . Таким образом , заболевание ИМ сопр о вождается выраженными перестройками структурной организации мембран моноцитов и появлением в крови инфицированных детей атипичных клеток , не встречающихся в норме [Новицкий В . В.,Уразова О . И ., Антоненко Н . М ., Жукова О . Б ., 1999]. Методом сканирующей элек тронной микроскопии исследовали поверхностную архитектонику лимфоцитов у больных ИМ . Исследование проводилось в период развернутой клиникогенной картины заболевания (4-15 день ) [ Masucci M . C . e . a .,1987]. В крови детей , больных ИМ , среди лимфоцитов со сглаже нной формой поверхностной мембраны преобладала популяция клеток с относительно гладкой поверхностью , а среди клеток с выраженным рельефом поверхности доминировали лимфоциты с ворсинками , что соответствовало показателям здоровых детей . Незначительно увелич и валось число гладких клеток и лимфоцитов с раффлами на поверхности мембраны [ Beaulieur A . D . e . a .,1996]. Однако , содержание лимфоидных клеток со складчатой поверхностью существенно превышало их количество в контроле . Число же лимфоцитов с углублениями на по верхности мембраны у больных детей снижалось . Значительно реже обнаруживались клетки с пузыреподобными образованиями , переходным и комбинированным типом поверхностной мембраны [Жибурт Е.Б . и соавт .,1996; Joseph G . e . a .,1994]. У детей со средней степенью тя жести заболевания содержание клеток со складками значительно превышало значения аналогичного показателя у детей с легким течением инфекции . Особый интерес представляет факт увеличения в крови больных ИМ , особенно у детей со средней степенью тяжести заболе в ания , числа лимфоцитов со складчатой поверхностью [Lewin N. e.a.,1990]. По-видимому , наряду с нормальными лимфоцитами в эту группу клеток были отнесены “атипичные мононуклеары” , имеющие аналогичную структуру поверхностной мембраны . Особый интерес представ ляет выявление в крови клеток , отличающихся по своей морфологической структуре присутствием на поверхности ворсинок , неправильной формой ядра с компактно расположенным хроматином , гипертрофией ядрышек , многочисленными рибосомами , повышенным количеством ли з осом и митохондрий , вакуолизированной цитоплазмой . В ядрах ряда таких измененных клеток были обнаружены вакуоли правильной округлой формы , что позволяет предположить наличие вируса в данных клетках [Ютенко А.К . и соавт .,1994; Ribera E . Ocana I .,1989]. По в сей видимости , данные клеточные элементы представляют собой так называемые “атипичные мононуклеары” , являющиеся трансформированными вирусом лимфоцитами , имеющими аналогичную структуру клетки [ Gibbons D . L . e . a .,1994]. В крови больных ИМ превалировали макроф агоподобные моноциты , отличавшиеся от аналогичных клеток здоровых детей повышенным количеством вторичных лизосом , содержащих деструктивный материал , увеличением числа и величины митохондрий , повышенным содержанием и увеличением диаметра вакуолей комплекса Гольджи [Уразова О . И ., Новицкий В . В ., Помогаева А . П ., Жукова О . Б ., 2000]. Учитывая тот факт , что ИМ представляет собой реактивное заболевание , охватывающее всю ретикулогистиоцитарную систему , тщательному анализу была подвергнута система иммуноглобулино в [ Gogusev J . e . a .,1988]. Показано , что гетерофильные антитела относятся к Ig M. синтез которых значительно повышен у больных ИМ ; синтез IgG повышен незначительно , а IgA не изменены [ Bnuin de P . S . e . a .,1995; Garrido F . e . a .,1995]. 1.3.Апоптоз 1.3.1.Апоп тоз как форма гибели клеток Апоптоз впервые был описан J.F.R.Kerr и сотрудниками в 1972 году [Барышников А.Ю ., Шишкин Ю.В .,1996] . В 1987 A.H.Wyllie сформулировал четыре основных элемента апоптоза : 1. Уменьшение объема апоптотирующей клетки ; 2. Конденсаци я и фрагментация хроматина на ранних стадиях апоптоза с формированием апоптотических телец ; 3. Изменение мембраны апоптотирующей клетки , приводящее к распознаванию ее фагоцитами ; 4. Сопряженность апоптоза с активным белковым синтезом [Уманский С.Р ., 19 96; Ярилин А.А ., 1996] В расширенном смысле апоптоз является гибелью клетки , которая включает в себя генетическую или геноопосредованную программу , не зависящую от природы пускового сигнала . Другими словами апоптозу присуща экспрессия генов de novo, а пус ковые сигналы сами по себе не являются гибельными для клетки. Апоптоз - активный процесс реализации программы гибели клетки : он может быть вызван действием поступающих извне сигналов , которые сами по себе не являются токсическими или деструктивными . Этот т ип гибели иногда обозначают как самоубийство клетки . Апоптоз является обязательным компонентом жизни многоклеточных организмов (их развития , нормального функционирования , осуществления регуляторных процессов ), одновременно внося вклад в реакцию клеток на в нешние воздействия (например , ионизирующие излучения ) и проявления иммунной защиты [ Jiang C . e . a .,1993]. В соответствии с современными представлениями апоптоз - явление неоднородное . В зависимости от индукторных факторов различают несколько его вариантов , которые можно дифференцировать по биохимическим проявлениям . Как правило , все эти разновидности имеют идентичные заключительные этапы развития и одинаковые морфологические проявления . В иммунной системе чаще других реализуются три формы апоптоза : гибель к л еток вследствие дефицита ростовых факторов , апоптоз , вызванный глюкокортикоидами и другими агентами со сходным действием и “активационный апоптоз” , развивающийся вследствие дисбаланса активационных сигналов или по другим причинам , обуславливающим включени е программы гибели клетки при их активации [Барышников А.Ю ., Шишкин Ю.В .,1996; Marmur J .,1961]. 1.3.2. Морфологические и биохимические проявления апоптоза Прежде всего это морфологические признаки апоптоза , состоящие в уменьшении размеров , сморщивании кле тки , уплотнении и фрагментации хроматина . В ядре формируются осмиофильные скопления хроматина , обычно прилежащие к ядерной оболочке . Эти изменения служат самым ранним проявлением апоптоза , предшествующим процессам деградации [Демин А.А . и соавт .,1983]. На этой стадии прогрессирования апоптоза может быть приостановлено действие ингибиторов , всвязи с чем данная стадия развития клеточной гибели обозначается как преапоптоз . Затем в ядерной мембране образуются инвагинации , и хроматиновые фрагменты отшнуровывают с я от ядра . Такие фрагменты , окруженные мембраной , называют апоптотическими тельцами . В цитоплазме происходит конденсация и сморщивание гранул без их разрушения , расширение эндоплазматического ретикулума . Для апоптоза характерна потеря клеточной мембраной м икроворсинок и нормальной складчатости , отделение клетки от субстрата , формирование на ее поверхности пузырей [Барышников А.Ю . и соавт .,1994]. В отличие от некроза , когда одновременно гибнут массы соседствующих клеток , апоптоз развивается изолированно в ед иничных клетках . Если в случае некроза из клеток в среду поступает внутриклеточное содержимое , в частности лизосомы , что нередко приводит к развитию или прогрессированию воспаления , то при апоптозе подобные проявления отсутствуют [Мушецяну К и соавт .,1965 ] . Клетки , подвергшиеся апоптозу (а иногда и находящиеся в процессе апоптоза ), и апоптотические тельца быстро фагоцитируются , причем не только макрофагами , но и “непрофессиональными” фагоцитами (например , мезангиальными клетками почек ) [ Bnuin de P . S . e . a .,1 995; Garrido F . e . a .,1995]. Одно из основных проявлений апоптоза на биохимическом уровне реализуется в ядре клетки и состоит в фрагментации ДНК . Сначала происходит образование крупных фрагментов ДНК , содержащих 700, 200-250, 50-70 тысяч пар оснований (т.п. о .), позже 30-50 т.п.о . Уже на этой стадии регистрируется конденсация хроматина и выпячивание ядерной мембраны , характерные для апоптоза . Полагают , что именно эти начальный этап фрагментации хроматина является ключевым событием апоптоза , после осуществлен и я которого процесс становится необратимым [Погорелов В.М ., Козинец Г.И .,1995]. Следующий этап фрагментации ДНК - ее межнуклеосомная деградация , т.е . расщепление в результате формирования разрывов (в основном двунитевых ) между нуклеосомами с формированием фрагментов , содержащих 180-190 п.о . Именно эти фрагменты выявляются в виде “лесенки” при электрофорезе ДНК апоптотических клеток , который широко используется для идентификации апоптоза [Казанова Л.И .,1979; Marmur J .,1961]. Деградация хроматина при апоптозе является активным процессом , она зависит от температуры , требует синтеза РНК и белка de novo. Осуществление различных этапов деградации ДНК связывают с проявлением активности разных ферментов . Считают , что межнуклеосомная деградация при апоптозе обуслов л ена активацией резидентной ядерной Са 2 М g 2 зависимой эндонуклеазы [Исаева М.П . и соавт .,1998]. Выделена эндонуклеаза с молекулярной массой 18 кД . Мало сведений о ферментах , обеспечивающих появление крупных разрывов ДНК . По одним сведениям , они не зависят от Са 2+ (хотя и зависят от М g 2+ ), по другим данным , формирование крупных фрагментов ДНК так же зависит от Са 2+ . Феномен апоптоза неоднороден и при действии различных его индукторов , события , по крайн ей мере до определенного этапа , могут развиваться по разнообразным сценариям , и лишь достигнув определенной точки конвергенции , различные пути сходятся , а механизмы реализации гибели оказываются идентичными . К ключевым дистальным механизмам реализации апо п тоза относят активацию цистеиновых и сериновых протеиназ . Ингибиторы сериновых протеиназ подавляют апоптоз , индуцированный глюкокортикоидами [ Bnuin de P . S . e . a .,1995; Garrido F . e . a .,1995]. Наблюдаемые при апоптозе уплотнение и деформация наружной и внут риклеточной мембран , формирование устойчивого к действию детергенов покрова , сморщивание цитоплазматических гранул связывают с перекрестным сшиванием белков , обусловленным активацией Са 2 -зависимой трансглутаминазы типа II, что служит обязательным и характе рным биохимическим признаком апоптоза . Непосредственной причиной гибели клеток при апоптозе , вероятно , служит истощение пула АТФ , являющееся следствием активации поли (ADP- рибоза )полимеразы в ответ на повреждение ДНК [Барышников А.Ю ., Шишкин Ю.В .,1996; Ma rmur J .,1961]. 1.3.3. Распознавание апоптотирующей клетки макрофагами К настоящему времени расшифровано три механизма , с помощью которых макрофаги распознают клетки , подвергающиеся апоптозу , и удаляют их . Распознавание , а следовательно и адгезия макрофаго в к клеткам , вступившим на путь апоптоза , почти полностью блокируется при добавлении в среду N-ацетилгалактозамина и галактозы . Из этого следует , что ранним мембранным проявлением апоптоза является специфическая перестройка углеводных компонентов мембраны с потерей сиаловых кислот , наружной экспрессией сахаров и снижением общего отрицательного потенциала наружной поверхности мембраны . Потеря терминальных сиаловых кислот с боковых цепей мембранных гликопротеидов влечет за собой то , что экранированные в обыч н ых условиях ацетилглюкозамин , N-ацетилгалактозамин и галактоза приобретают возможность взаимодействовать с лектинами макрофагов [ Taga H . e . a . , 1994] Другой тип распознавания апоптотирующих клеток осуществляется с помощью макрофагального 4 3 интегринового рецептора . Тромбоспондин , синтезируемый и выбрасываемый в микроокружение макрофагами , выполняет роль молекулярной скрепки между апоптотирующей клеткой и макрофагом . Существенную роль в этом процес се играет мембранный мономер 88кД , больше известный как CD36. Третий механизм распознавания клеток , вступивших на путь апоптоза , состоит в том , что на самых ранних этапах программированной гибели клеток , еще до формирования апоптотических телец , происходи т инверсия мембранных фосфолипидов . В обычных условиях наружный лепесток мембранного бислоя содержит , в основном , нейтральные фосфолипиды , сфингомиелин и фосфатидилхолин , в то время как отрицательно заряженные фосфолипиды структурированы на внутреннем лепе с тке мембранного бислоя . У апоптотирующих клеток эта мембранная асимметрия нарушается , и они экспрессируют наружу фосфатидсерин , который распознается специфическим макрофагальным рецептором [Taga H. e. a., 1994; T. Uehara e. a., 1992]. Следует отметить , что тип распознавания апоптотирующих клеток макрофагами может сильно зависеть от типа клеток и от стадии процесса программированной гибели [Исаева М.П . и соавт .,1998]. 1.3.4. Гены , участвующие в апоптозе Некоторые гены важны для программирования клеток к ги бели , другие необходимы для окончательного удаления мертвых клеток и , наконец , четыре гена непосредственно участвуют в процессе апоптоза [Akbar A. N. e. a., 1993]. Продукт гена nuc-1 является эндонуклеазой , расщепляющей ДНК в мертвых клетках . Клетки с мута цией в nuc-1 погибают без деградации ядерной ДНК . Неизвестно существует ли сходство между продуктом nuc-1 и Са 2 М g 2 зависимой нуклеазой [Барышников А.Ю ., Шишкин Ю.В .,1996; Marmur J .,1961]. Два гена- ced-3 и ced-4- необходимы для клеточной гибели . При мутациях в этих генах клетки , обычно запрограммированные на гибель , выживают . Показано , что ced-3 является протеазой , а ced-4 содержит Са 2 М g 2 связывающий домен . ced-9 кодируе т белок , предотвращающий гибель клеток , индуцированную ced-3 и ced-4 [Akbar A. N. e. a., 1993,]. 1.3.5. Необходимость изучения апоптоза Отметим ряд наиболее важных для фармакологии направлений для изучения апоптоза. Во-первых , поиск и разработка препарато в , угнетающих апоптоз . Клиническую перспективность могут иметь препараты , блокирующие апоптоз , индуцированный некоторыми вирусами и суперантигенами . Очевидно , что такие антиапоптотические препараты будут представлять собой первый класс иммуностимуляторов. Теоретически , ингибиторы апоптоза пригодны для лечения ряда нейродегенеративных заболеваний , таких как рассеянный склероз , инсульт , травмы мозга , инфаркт миокарда [ Marmur J .,1961]. Индукторы апоптоза необходимы прежде всего для лечения злокачественных ново образований , аутоиммунных расстройств [Исаева М.П . и соавт .,1998]. Особый интерес представляют исследования , касающиеся изучения процессов запрограммированной клеточной гибели при ИМ . Исследование морфологии и анализ ДНК Т-лимфоцитов позволили установить, что вирусный интерлейкин -10 (продукт репликации EB V ) ингибирует потерю клетками объема , уплотнение хроматина и фрагментацию ДНК , характеризующие апоптоз [Taga H. e. a., 1994; T. Uehara e. a., 1992], напротив , при остром ИМ было зарегистрировано повышение Т -клеток с признаками апоптоза . Известно , что некоторые цитокины типа интерлейкинов 2, 5, 6 могут препятствовать апоптозу Т-лимфоцитов [Исаева М.П . и соавт .,1998]. Исходя из этого , авторы предположили , что апоптотическая гибель большинства Т-лимфоцитов был а связана с их миграцией из участков , активно продуцирующих данные факторы , в результате антигенного воздействия , то есть апоптоз Т-клеток представляется авторами как механизм антигенуправляемой селекции лимфоцитов [Барышников А.Ю ., Шишкин Ю.В .,1996; Marmur J .,1961]. Увеличение числа апоптотических Т-лимфоцитов (APS) при ИМ также наблюдали Y. Matsuoka e. a. [1997]. Уровень APS повышался на ранней стадии ИМ и нормализовался с уменьшением числа атипичных лимфоцитов . Авторы предполагают , что апоптоз Т-клеток пр и ИМ способствует восстановлению части поврежденных вирусом В-лимфоцитов [ Taga H . e . a . , 1994]. W agner e. a. [1995] показано , что стимуляция апоптоза в EB V -преобразованных лимфоцитах осуществляется Т-лимфоцитами , экспрессирующими BLT-экстеразу . Защиту В-л имфоцитов от апоптотической гибели обеспечивают экспрессируемые ими мембранные белки -LMP1 и BHRF1, кодируемые EBV [Исаева М.П . и соавт .,1998]. Защита осуществляется через регуляцию bcl-2-экспрессии лимфоцитами . Bcl-2 proto-oncogen кодирует внутренние мит о хондриальные белки , блокирующие запрограммированную гибель клеток , в связи с чем регулирование LMP1 и BHRF1 экспрессии . bcl-2 определяет живое состояние и гибель клетки . LMP1 предотвращает апоптоз , индуцируемый анти -fas-антителами , а BHRF1- анти -Pa8-антит е лами и TNF- [Akbar A. N. e. a., 1993]. Исходя из вышеизложенного , можно предположить , что апоптоз при ИМ служит механизмом , регулирующим численное соотношение В - и Т-клеток в популяции лимфоцитов на разных стадиях инфекционног о процесса. ЗАКЛЮЧЕНИЕ . Таким образом , ИМ - доброкачественное лимфопролиферативное заболевание , достоверным диагностическим критерием которого являются изменения в системе крови . Своеобразным маркером заболевания служат “атипичные мононуклеары” , представл яющие собой трансформированные под действием вирусных антигенов лимфоидные клетки . Одним из механизмов ограничения лимфопролиферативности процесса при ИМ является апоптоз , который регулирует численное соотношение В - и Т-клеток в популяции лимфоцитов на ра з ных стадиях инфекционного процесса. Однако литературные данные , касающиеся апоптотических реакций клеток в норме и при патологическом состоянии , и при ИМ в частности , немногочисленны и фрагментарны , что и послужило причиной настоящего исследования. Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ 2.1. Материал и объект исследования Нами был и обследованы дети , в возрасте от 7 до 14 лет , больные ИМ (инфекцией , вызванной вирусом Эпштейна-Барр ) средней степени тяжести , острым и гладким течением и ОИЗ с МПС (цитомегаловирусная инфе кция , инфекция , вызванная вирусом герпеса , иерсиниоз , различные формы ангин-фоликулярная , лакунарная , некротическая ) в период развернутой клинико-гематологической картины заболевания (1 группа больных ), в период реконвалесценции (2 группа больных ) и в кат а мнезе (3 группа больных ). Диагноз заболевания устанавливали по характерной клинико-гематологической картине заболевания и лабораторным данным . Диагноз ИМ во всех случаях подтверждали выявлением в сыворотке больных ДНК вируса Эпштейна-Барр методом полимера з ной цепной реакции (отдел молекулярной биологии ЦНИЛ СГМУ ) и антител к антигену вируса Эпштейна-Барр ( Ig A , M , G к вирусному капсидному антигену , Ig G к раннему антигену ) с помощью непрямой иммунофлюоресценции (лаборатория онковирусологии НИИ онкологии ТНЦ СО РАМН ). Все дети , больные ИМ находились на лечении в инфекционных отделениях в 3 горбольницы г.Томска и в больницы им . Г.Е.Сибирцева. Контрольную группу составили условно здоровые дети аналогичного возраста . Материал исследования – периферическая кровь. Забор крови осуществляли из локтевой вены , утром , натощак . Распределение обследованных детей в зависимости от методов и сроков исследования можно наблюдать в табл . 1. 2.2. Исследование апоптоза лимфоцитов 2.2.1. Индукция апоптоза лимфоцитов in vitro В пробирку вносили 0,4 мл плазмы гепаринизированной крови ( 25 Ед /мл ) и 2 мл солевого раствора Дульбекко , не содержащего Ca 2 и Mg 2 ( ‘ Sigma ’ , США ). Контролем служила суспензия , состоящая из 0,4 мл плазмы гепаринизированной крови (25 Ед /мл ) и 2 мл солевого раствора Дульбекко с 10 % ЭТС . Пробы инкубировали при 37 С в течение 6 часов. 2.2.2. Выделение ДНК лимфоцитов 1. В чистые полипропиленовые пробирки типа “ Eppendorf” объемом 1,5 мл вносили 3 мк л носителя и 450 мкл денатурирующего раствора . Добавляли 450 мкл исследуемой сыворотки или плазмы крови , используя наконечники с фильтрами . Тщательно перемешивали на вортексе в течение 10 секунд . Затем инкубировали при комнатной температуре 10 минут . Посл е этого центрифугировали 15 секунд при 12 тыс . об /мин , добавляли 100 мкл хлороформа и перемешивали на вортексе 5 секунд . Далее вновь центрифугировали при 12 тыс . об /мин 10 минут . Переносили до 300 мкл верхней фазы в чистую полипропиленовую пробирку , содерж а щую 300 мкл изопропилового спирта , перемешивали на вортексе 5 секунд . Чтобы избежать контаминации , данную процедуру проводили используя наконечники с фильтрами . После этого центрифугировали при 12 тыс . об /мин 15 минут . Удаляли супернатант , используя водос т руйный насос , в колбу-ловушку . К осадку добавляли 1 мл промывочного раствора , перемешивали и вновь центрифугировали при 12 тыс . об /мин 5 минут . Далее как можно тщательнее удаляли супернатант , осадок подсушивали 10-20 минут , добавляя 30 мкл деионизированно й воды , закрывали пробирки , инкубировали 10 минут при комнатной температуре , перемешивали встряхиванием. 2.2.3. Исследование фрагментации ДНК лимфоцитов 15 мкл суспензии ДНК каждой пробы использовали для электрофоретической идентификации апоптоза клеток , 35 мкл для оценки содержания фрагментированной ДНК в лимфоцитах. 2.2.4. Электрофорез ДНК лимфоцитов Электрофорез проводили в 1,5 % агарозном геле с добавлением 1 мкг /мл бромистого этидия при напряжении 20 В /см в течение 30 минут . Полученные гели просматри вали и фотографировали в УФ-свете. На электрофореграммах апоптотическая фрагментация ДНК выявлялась в виде “лесенки” из фрагментов ДНК различной длины . Некроз клеток обуславливал “размазанный” характер зоны миграции ДНК . Полоса свечения интактной ДНК наход илась в районе старта. 2.2.5. Определение содержания фрагментированной ДНК в лимфоцитах Содержание ДНК в пробах определяли дифениламиновым методом [Шаткин А ., 1972]. К 1 мл гидролизованной ДНК добавляли 2 мл реактива Дише (1 г дифениламина , 100 ледяной ук сусной кислоты , 2,75 мл концентрированной серной кислоты ) и инкубировали в течение 16-20 часов при 30С . После инкубировали в кипящей водяной бане 10 минут для развития окраски . После этого пробы охлаждали и исследовали с помощью спектрофотометра СЭФ -46 пр и длине волны 600 нм . В качестве раствора сравнения использовали аналогичный раствор без ДНК. Содержание ДНК (мкг ) в лимфоцитах рассчитывали по калибровочной кривой с использованием стандартного раствора ДНК клеток тимуса теленка (1 мг /мл ), 0,5 мл которого предварительно смешивали с равным объемом 0,1 Н раствора и гидролизовали в течение 10 минут в кипящей водяной бане и разбавляли 0,5 Н раствором HCIO 4 до необходимой концентрации. 2.3. Исследование морфологии апоптоза лимфоцитов После инкубации пробы центр ифугировали 10 минут при 1000 об /мин , надосадочную жидкость удаляли , а из осадка готовили мазки , которые окрашивали азур-эозином в течение 40-50 минут . Для оценки морфологии апоптотических изменений лимфоцитов использовали цитопатологические критерии , пре д ложенные S. G. Martin e. a . [Маянский А . Н ., 1997] 2.4. Статистическая обработка результатов Полученные данные обрабатывали на Statistica for Windows (версия 6.0) и пакета программ Microsoft Excel (1997). Для всех имеющихся выборок данных проверена гип отеза нормальности распределения (по критерию Колмогорова-Смирнова ). Для каждой выборки вычисляли средневыборочные характеристики . Х - среднее арифметическое ; - среднее квадратичное отклонение ; m – ошибка среднего ; по формуле : Х = а / n (1); = (2); m = (3); где а – величины , полученные при исследовании ; n – число исследований. При соответствии нормальному закону распределения признака в исследуемых выборках , проверка гипотезы о равенстве средних выборочных величин производилась с использованием t-критерия Стьюдента . Для оценки достоверности различий выборок , не подчиняющихся критерию нормального распределения , использовали непараметрический критерий Манна-Уит ни . Различия считали достоверными , при уровне значимости p<0,05 [ Лакин А.В .,1989]. Глава 3. Результаты исследований 3.1 Количественные показатели периферической крови у детей , больных инфекционным мононуклеозом и острыми инфекционными заболеваниями с мононуклеозоподобным синдромом 3.1.1 Количественные показатели периферической крови у детей , больных инфекционным мононуклеозом в различные периоды течения и через 16-18 месяцев после болезни При исследовании количественных показателей периферич еской крови у детей , больных ИМ , в развернутую стадию клинико-гематологических проявлений наблюдалось достоверное увеличение общего количества лейкоцитов (10,15 0,67 Г /л , p 1 0,001), обусловленное достоверным увеличением абсолютного содержания лимфоцитов (5,13 0,42 Г /л , p 1 0,001) и моноцитов (0,73 0,13 Г /л , p 1 0,001) (табл . 2), при э том относительное количество лимфоцитов и моноцитов существенно не превышало значений нормы. Как следует из табл . 2, у больных ИМ , в острый период заболевания , в периферической крови отмечалось значительное повышение относительного и абсолютного содержания атипичных мононуклеаров (АМ ) (в среднем в 14,3, p 1 0,001 и в 8, p 1 0,001 раз соответственно ) (табл . 2). Кроме того , отмечалось достоверное повышение относительного (2,43 0,5 %, p 1 0,001) и абсолютного (0,29 0,07 Г /л , p 1 0,001) количества палочкоядерных нейтрофилов (табл . 2). На фоне достоверного снижения в периферической крови , у да нной группы больных , относительного содержания эозинофильных (1,03 0,28 %, p 1 0,05) и сегментоядерных (20,29 2,28 %, р 1 0,001) гранулоцито в , их абсолютное число существенно не изменялось по сравнению с контролем (табл . 2). В период реконвалесценции , у больных ИМ , наблюдалось снижение общего количества лейкоцитов периферической крови (7,38 0,79 Г /л , р 2 0,01) по сравнению с 1 группой , превышая аналогичный показатель нормы в 1,2 раза (р 1 0,001) (табл .2). В данный период исследования относительное и абсолютное количество лимфоцитов периферической крови остав алось повышенным (59,98 2,55 %, р 1 0,01) и (4,31 0,46 Г /л , р 1 0,001) по сравнению с группой здоровых детей , кроме того , отмечалась незначи тельная тенденция к повышению относительного , но при этом к снижению абсолютного содержания лимфоцитов периферической крови , по сравнению с 1 группой детей (табл .2). Также , в крови больных ИМ , отмечалось достоверное снижение относительного и абсолютного количества АМ периферической крови , в 4,0 (р 2 0,001) и 5,0 (р 1 0,001) раза соответственно , по сравнению с аналогичными показателями 1 группы , при этом данные показатели существенно превышали уровен ь нормальных значений (табл . 2) Отмечалось восстановление до уровня нормы абсолютного и относительного числа моноцитов , эозинофилов и палочкоядерных нейтрофилов (табл . 2). Кроме того , количество сегментоядерных гранулоцитов периферической крови , в период в ыздоровления и через 16-18 месяцев после перенесенного заболевания , также оставалось сниженным , что составляло 64% (р 1 0,001) и 66% (р 1 0,001) от уровня нормы (табл .2). Через 16-18 месяцев после ИМ, общее количество лейкоцитов оставалось незначительно повышенным по сравнению с нормой , и отмечалась тенденция к снижению данного показателя при сравнении с периодом выздоровления (табл . 2). В катамнезе , абсолютное и относительное содержание в периферическ ой крови АМ , продолжало достоверно снижаться по сравнению со 2 периодом (0,38 0,05 Г /л , р 3 0,05) и (5,52 0,7 %, р 3 0,05), соответственно , по прежнему значимо превышая контрольные значения (табл .2). В отдаленном периоде после болезни отмечалась незначительная тенденция к повышению палочкоядерных нейтрофилов по сравнению с нормой и периодом выздоровления (табл . 2). Через 16-18 месяцев посл е заболевания абсолютное и относительное число моноцитов существенно не изменялось , по сравнению с аналогичным показателем в период выздоровления , однако все еще превышая показатели контроля (табл .2). Таким образом , у детей , больных ИМ , наблюдалась следующ ая динамика изменений количественных показателей периферической крови : в острый период наблюдалось достоверное увеличение общего количества лейкоцитов , обусловленное повышением , как относительного , так и абсолютного содержания отдельных клеточных форм (ли м фоцитов , моноцитов , атипичных мононуклеаров ), при этом отмечалось значимое снижение количества нейтрофильных гранулоцитов ; в период выздоровления наблюдалось снижение общего количества лейкоцитов , атипичных мононуклеаров , моноцитов , на фоне нейтропении ; в катамнезе количество 3.2. Количественные показатели периферической крови у детей , больных острыми инфекционными заболеваниями с мононуклеозоподобным синдромом в различные периоды течения и через 16-18 месяцев после болезни У больных с МПС в о стрый период наблюдалось : достоверное увеличение общего количества лейкоцитов (9,67 0,7 Г /л , р 1 0,001); значительное повышение абсолютного количества лимфоцитов (5,14 0,52 Г /л , р 1 0,001) и моноцитов (0,5 0,08 Г /л , р 1 0,05) по сравнению с нормой (табл . 2). Кроме того , в группе острых больных отмечалось статистически значимое повыше ние абсолютного (1,34 0,21 Г /л , р 1 0,001) и относительного (13,27 1,8 %, р 1 0,001) числа АМ , по сравнению с показателями группы здоровых д етей (табл . 2). Как следует из таблицы 2, относительное количество сегментоядерных нейтрофилов периферической крови в острый период достоверно снижалось , что составило 58 % (р 1 0,001) от нормального значения ; при этом абсолютно е количество значимо не изменялось во все последующие периоды заболевания (табл . 2) Кроме того , в данный период в крови больных с МПС , выявлено достоверное повышение относительного (2,76 0,57%, р 1 0,001) и абсолютного (0,25 0,06 Г /л , р 1 0,001) числа палочкоядерных нейтрофилов (табл . 2). Исследование показало , что абсолютное и относительное количество моноцитов и эозинофилов практически не и зменялось во всех группах обследуемых (табл .2). У больных с МПС , в период клинического выздоровления наблюдалась тенденция к незначительному снижению общего количества лейкоцитов , по сравнению с 1 группой больных , однако оставалось повышенным (7,73 0,7 Г /л , р 1 0,001) относительно нормы (табл . 2). В период реконвалесценции и в катамнезе , сохранялось повышенным относительное и абсолютное количество лимфоцитов по сравнению с нормой , незначительно снижаясь по сравнению с 1 и 2 периодом , соответственно (табл .2). Кроме того , отмечалась тенденция к снижению относительного и абсолютного и количества АМ по сравнению с 1 группой , но эти показатели в 5,3 (р 1 0,001) и 4,1 (р 1 0,001) раза превышали значения в контроле (табл .2). Как следует из таблицы 2 в период выписки наблюдалось значительное снижение относительного и абсолютного значения палочкоядерных нейтрофилов (1,5 0,34%, р 2 0,001) и (2,15 0,34 Г /л , р 2 0,001), соответственно , по сравнению с аналогичными показателями в острый период , существенно превышая показатели нормы (табл . 2). У детей , перенесших МПС , через год после болезни прослеживалась тенденция к дальнейшему снижению общего количества лейкоцитов (7,00 0,62 Г /л ) по сравнению со 2 группой больных , при этом , этот показатель оставался незначител ьно повышенным по сравнению с нормой (табл . 2) Через 16-18 месяцев после перенесенного заболевания , наблюдалась тенденция к снижению абсолютного и относительного количества АМ по сравнению со 2 группой , но данный показатель оставался значимо высоким по сра внению с контролем (0,66 0,15Г /л , р 1 0,001) и (8,92 1,33 %, р 1 0,001), соответственно (табл .2). 3.3. Исследование апоптотической активн ости лимфоцитов периферической крови у детей , больных инфекционным мононуклеозом и острыми инфекционными заболеваниями с мононуклеозоподобным синдромом 3.3.1. Исследование апоптоза лимфоцитов периферической крови у детей , больных инфекционным мононуклео зом В острый период , у больных ИМ , наблюдалось достоверное увеличение числа погибших клеток как при спонтанной (14,25 1,6%, р 1 0,001), так и при индуцированной in vitro (17,58 1,73%, р 1 0,001) гибели клеток , по сравнению с доинкубационным периодом , не отличаясь существенно от аналогичных показателей нормы (табл . 3). Кроме того , в данный период наблюдалось достоверное снижение фДНК при инду цированном апоптозе (38,48 3,8%, р 1 0,05) по сравнению с показателем нормы (48,85 2,12%) (табл . 4). При спонтанном апоптозе содержание фДНК существенно не изменялось в о все сроки исследования (табл . 4). В период развернутых клинико-гематологических проявлений , при анализе морфологии апоптоза отмечалось достоверное снижение апоптотически измененных клеток (27,75 2,54%, р 1 0,05) и наблюдалась тенденция к уменьшению апоптозных телец при индуцированном апоптозе , по сравнению контролем (табл . 5). В случае спонтанного апоптоза , во все сроки исследования не наблюдалось существенных изменений в морфологии апопт оза (табл . 5). Как следует из табл . 3, в период реконвалесценции отмечалось статистически значимое повышение числа мертвых клеток при спонтанном и индуцированном апоптозе , по сравнению с доинкубационным периодом (в среднем в 2,1, р 1 0,01 и в 4,1, р 1 0,001 раза , соответственно ), не имея значимых изменений по сравнению с аналогичными показателями в контроле (табл . 3). Во 2-ой период болезни регистрировалось значительное снижение количества фДНК на 13% (р 1 0,01), числа апоптотически измененных клеток (26,88 3,06, р 1 0,01) при индукции гибели клеток in vitro , по сравнению с контролем (табл . 4,5). В отдаленный период п осле перенесения заболевания полученные данные свидетельствуют о повышении количества мертвых клеток при спонтанном и индуцированном апоптозе , на 64,2% (р 1 0,001) и на 76,1%, по сравнению со значениями в доинкубативном периоде, при этом не отмечалось существенных различий по сравнению с аналогичными показателями в группе здоровых детей (табл . 3). Кроме того , наблюдалось достоверное увеличение содержания фДНК в пробах с индукцией апоптоза in vitro (52,29 2,34%, р 3 0,05), по сравнению со 2-ой группой , однако не отличаясь существенно от нормы (табл .4). При этом не регистрировалось существенных изменений при исследовании морфологии апоптоза при спонтанной и индуцированной гиб ели клеток in vitro в данный период исследования , по сравнению с аналогичными показателями в группе здоровых детей (табл . 5). 3.3.2. Исследование апоптоза лимфоцитов периферической крови у детей , больных острыми инфекционными заболеваниями с мононукле озоподобным синдромом При исследовании жизнеспособности лимфоцитов in vitro у больных острыми инфекционными заболеваниями с МПС в разные сроки исследования при индуцированном и спонтанном апоптозе в разные сроки исследования наблюдалось достоверное повышение соответствующих значений мертвых клеток по сравнению с доинкубативным периодом (табл . 3). В результате анализа динамики ДНК-фрагментации лимфоцитов периферической крови , у больных с МПС , в период поступления при индуцированном апоптозе отм ечалось достоверное снижение содержания фДНК (40,73 2,51 %, р 1 0,05), по сравнению с аналогичным показателем нормы (табл . 4). В период выздоровления регистрировалось повышение уровня фДНК на 19% (р 1 0,05), по сравнению с показателями 1 группы больных (табл . 4). В 3 периоде исследования (через 16-18 месяцев после болезни ), количество фДНК не изменялось при сравнении с показателем во 2 периоде , также существенно не отличая сь от нормы (табл . 4). При исследовании морфологии апоптоза у детей , больных острыми респираторными инфекциями с МПС , в острый период наблюдалось значительное снижение количества апоптозных клеток (27,89 1,94%, р 1 0,05) при индуцированной гибели клеток по сравнению с нормой ; данный показатель не изменялся в последующие сроки исследования (табл . 5). При спонтанном апоптозе различий во все сроки исследования не наблюдалось. Глава 4. Обсуждение полученных результатов. Инфекционный мононуклеоз (ИМ ) – острое инфекционное лимфопролиферативное заболевание , возбудителем которого является вирус Эпштейна-Барр , относящиийся к семейству Y -герпесвирусов [Дранкин Д.И ., Заяц Н.А., 1982; Учайкин В.Ф ., 1999]. Уникальность EBV заключается в его способности не разрушать , а стимулировать пролиферацию зараженных им лимфоцитов путем изменения соотношения между ростовыми и апоптозными потенциями клеток [Дранкин Д.И ., Заяц Н.А ., 1982; Ронин В.С ., 1992]. Несмотря на достаточно большое число работ , посвященных изучению ИМ , растущий интерес ученых к этому заболеванию , патогенез ИМ остается во многом неясным и до настоящего времени . Известно , что проникший в организм EBV , персистирует пожизненн о в эпителиальных клетках назофарингиальной области и В-лимфоцитах и способен вызывать выраженные нарушения гемопоэтических процессов. Проведенное нами исследование количественных показателей периферической крови у детей , больных ИМ , подтверждает данные ли тературы об изменениях в периферической крови при данной патологии . Так , в период развернутых клинико-гематологических проявлений , отмечалось достоверное увеличение общего количества лейкоцитов (в среднем в 1,7 раза , р 1 0,001), абсолютного и относительного числа лимфоцитов (в среднем в 1,7 раза ), моноцитоз и нейтропения , по сравнению с контрольными значениями . Установленно , что EBV содержится и продуцируется в В-лимфоцитах (Ронин В.С .,1992). Под влиянием вируса , В-лимфоциты тран сформируются в крупные АМ . Как следует из полученных данных , наблюдалось увеличение количества АМ периферической крови (в среднем в 10 раз ) по сравнению с таковым значением у здоровых детей . Это можно объяснить тем , что пролиферация В-клеток контролируетс я Т-лимфоцитами , которые влияют и на пролиферацию гранулоцитов и моноцитов . Вероятно , активированные Т-лимфоциты , выделяют специфические лимфокины , стимулирующие выработку элементами гемопоэтического микроокружения колониестимулирующего фактора (КСФ ) и про д уцируют интерлейкин -3 (мультиКСФ ). КСФ , воздействуя на предшественники грануломоноцитопоэза (КОЕ-ГМ ), усиливает процессы пролиферации и дифференцировки в направлении , преимущественно , моноцитопоэза , что по видимому , и объясняет развитие моноцитоза в пери ф ерической крови у больных ИМ . Кроме того , может иметь место выход моноцитоидных элементов из лимфотока в периферическую кровь , что объясняется ведущей ролью моноцитов в обеспечении неспецифической резистентности организма , а именно в фагоцитарном захвате и инактивации чужеродных агентов. В острый период , у больных ИМ , нами было выявлено уменьшение относительного количества сегментоядерных нейтрофилов , что составляло 51% от контроля , на фоне увеличения числа палочкоядерных форм , что можно объяснить к омпенсаторным поступлением незрелых элементов из костного мозга на периферию , необходимого для пополнения пула зрелых гранулоцитов , недостаток которых может формироваться в результате миграции лейкоцитов в очаг воспаления , имеющий место при данной патолог и и , так как известно , что течение ИМ сопровождается развитием катара верхних дыхательных путей и различных форм ангины (табл . 2, рис .1). В период клинического выздоровления , у больных ИМ , отмечалось достоверное снижение общего количества лейкоцитов, на 28% по сравнению с I группой , но оставалось повышенным по сравнению с нормой в 1,2 раза . В данный период исследования наблюдалась незначительная тенденция к повышению относительного , и уменьшению абсолютного количества лимфоцитов по сравнению с острым периодом . Относительное содержание АМ , несмотря на достоверное снижение (на 47 %) по сравнению со значением в период поступления , в 4 раза превышало уровень контрольного показателя (табл . 2, рис .1). Выявленные нами изменения , вероятно , обусловлены э ффективностью проведенной симптоматической терапии . Моноцитоз , возможно , связан с сохраняющейся в этот период болезни избирательной дифференцировкой КОЕ-ГМ в сторону элементов моноцитарного ряда , необходимой для обеспечения в организме достаточного числа ф агоцитирующих элементов , способных элиминировать поврежденные вирусом клетки. У детей , переболевших ИМ , через 16-18 месяцев , наблюдалась нормализация общего количества лейкоцитов периферической крови . Содержание лимфоцитов оставалось высоким и в отдаленный период после болезни . Отмечалась тенденция к снижению относительного и абсолютного числа моноцитов по сравнению со 2 группой , на фоне снижения данного показателя в 1,8 и 1,6 раз , соответственно , по сравнению с контолем (табл . 2, рис .1). Содержа ние АМ , в данный период исследования , оставалось более высоким , чем у здоровых детей . Нейтропения сохранялась и в отдаленном периоде после перенесения болезни (табл . 2, рис .1). Данные изменения , возможно , обусловлены персистенцией и репродукцией EBV в организме , что подтверждается исследованиями , проведенными в лаборатории онковирусологии НИИ онкологии ТНЦ СО РАМН (Л.Н . Уразова , 1989), результаты которых свидетельствуют о повышенных титрах вирусспецифичных антител к антигенам EBV и в отдаленном перио де после перенесения ИМ . Для детей , больных острыми инфекционными заболеваниями с МПС в период поступления так же , как и у детей с ИМ , отмечалось увеличение общего количества лейкоцитов , абсолютного и относительного числа лимфоцитов , моноцитоз и нейтропения . Так же наблюдалось увеличение АМ (в среднем в 6 раз ) по сравнению с таковым у здоровых детей . В острый период , у больных с МПС , нами было выявлено достоверное уменьшение относительного количества сегментоядерных нейтрофилов , что составило 58 % от нормы , при этом регистрировалось значительное увеличение палочкоядерных форм клеток (табл . 2, рис .2). В период клинического выздоровления , у больных с МПС , отмечалась тенденция к снижению общего количества лейкоцитов и лимфоцитов , по сравнению с острым периодом , но не восстанавливаясь до нормальных значений (табл . 2, рис .2). В данный период прослеживалась тенденция к снижению количества палочкоядерных , и повышению сегментоядерных нейтрофилов по сравнению с показателями 2 периода (табл . 2, рис .2). . Сод ержание АМ , несмотря на снижение , в 5 раз превышало контрольные значения . В период реконвалесценции количество моноцитов снижалось и достигало контрольных значений (табл . 2, рис .2). У детей , переболевших МПС через 16-18 месяцев , наблюдалась нормали зация общего числа лейкоцитов . В катамнезе , уровень лимфоцитов и атипичных мононуклеаров , оставался по прежнему высоким по сравнению с показателями здоровых детей (табл . 2, рис .2). Относительное и абсолютное содержание моноцитов периферической крови , у де тей с ОИЗ с МПС , достоверно снижалось по сравнению со значениями в период реконвалесценции , на 37% и 23% соответственно , при этом наблюдалась тенденция к снижению данного показателя относительно нормы (табл . 2, рис .2). Количество сегментоядерных нейтрофило в не восстанавливалось в отдаленный период после болезни (табл . 2, рис .2). Таким образом , у больных с ИМ и ОИЗ с МПС , отмечаются аналогичные изменения количественных показателей периферической крови во все периоды исследования сопровождающиеся : увеличением в острый период заболевания общего количества лейкоцитов , лимфоцитов , моноцитов , атипичных мононуклеаров , палочкоядерных гранулоцитов , на фоне снижения содержания сегментоядерных нейтрофилов ; в период реконвалесценции , и через 16-18 месяцев после болезни, у больных ИМ и ОИЗ с МПС регистрируется частичная нормализация выше перечисленных показателей , при сохраняющейся нейтропении . В патогенезе вирусных инфекций чрезвычайно важную роль играет гибель клеток , реализующаяся в форме некроза или апоптоза . Апоптоз , запрограммированная или “физиологическая” форма клеточной гибели , реализуется посредством заложенных в генотипе клетки механизмов самоуничтожения и морфологически характеризуется уменьшением размеров клетки , уплотнением и фрагментацией хроматина [Погоре л ов В.М ., Козинец Г.И ., 1995; Ярилин А.А ., 1996; Маянский А.Н . и соавт ., 1997; Утешев Д.Б . и соавт ., 1998]. Электрофоретический анализ ДНК , погибших лимфоцитов у большинства обследованных больных , свидетельствовал о наличии регулярных фрагментов ДНК , харак т ерных для апоптотического типа гибели клеток . Известно более десятка вирусных генов , которые кодируют факторы , усиливающие апоптозный процесс . Имеются они и у герпесвирусов . Некоторые вирусы способны блокировать апоптозный ответ на собственную инфекцию . Э то достигается с помощью двух механизмов – повышения экспресии антиапоптозных генов клетки и инактивации эффекторных молекул апоптоза . К первому механизму можно отнести стимуляцию протоонкогена типа В cl -2, которая наблюдается , в частности , при персистенции EBV в В-лимфоцитах [ Uehara T . e . a ., 1992; Akbar A . N . e . a ., 1993]. Однако , необходимо отметить , что , несмотря на проведение достаточно большого количества исследований , посвященных изучению процессов клеточной гибели , сведения , касающиеся особенностей апо птоза лимфоцитов периферической крови при действии EBV , в доступной литературе крайне немногочисленны и фрагментарны , что и послужило причиной настоящего исследования. При оценке жизнеспособности и спонтанной апоптотической активности лимфоцитов при ИМ и М ПС во все периоды обследования значимых изменений выявлено не было . Вместе с этим , в острый период исследования , у больных ИМ , при индукции апоптоза in vitro , отмечалось достоверное снижение количества апоптотически измененных клеток (в среднем на 17 %) и фДНК (в среднем на 32%) по сравнению с нормой (табл . 3,4,5, рис .3). Полученные результаты вероятно , можно объяснить данными литературы , согласно которым , в случае гибели клетки путем апоптоза , индуцированного лишением сыворотки , подавлялась фрагментация ДН К и гибель клеток , кроме того , известно , что EBV , обладает уникальными способностями не разрушать , а стимулировать пролиферацию инфицированных им лимфоцитов путем изменения соотношения между ростовыми и апоптозными потенциями , в сторону подавления апоптоза. Среди морфологических форм апоптоза обнаруживались преимущественно карликовые клетки и элементы с фрагментозом ядра , которые мы отнесли к апоптозным клеткам . Кроме того , в период поступления у детей с ИМ существенно сниженным по сравнению с нормой оказал ось содержание апоптозных тел . При ИМ данные изменения сохранялись в период реконвалесценции . В отдаленном периоде после перенесенного заболевания показатели индуцированного апоптоза соответствовали нормальным значениям (табл . 5, рис .3). Снижение апоптоти ческой активности лимфоцитов вероятно объясняется тем , что некоторые вирусы способны блокировать апоптозный ответ на собственную инфекцию . Это достигается разными способами , но их принцип сводится к двум механизмам – повышение экспрессии антиапоптозных (р о ст-стимулирующих ) генов клетки или инактивация эффекторных молекул апоптоза . В случае инфицирования EBV , происходит стимуляция протоонкогенов типа bcl -2, подавляющих апоптоз. В период развернутой клинико-гематологической картины заболевания , у больных ОИЗ с МПС , отмечалось снижение апоптотически измененных клеток (в среднем на 16 %) и фДНК (в среднем на 17 %). в лимфоцитах периферической крови по сравнению с нормой . Кроме того , в период поступления , у детей с МПС , отмечалось снижение апоптозных тел на 20 % по сравнению с нормой оказалось содержание апоптозных тел . В период реконвалесценции восстанавливались содержание апоптозных тел и уровень ДНК-фрагментации . В отдаленный период , после перенесенного заболевания , показатели индуцированного апоптоза , у больн ы х с ОИЗ с МПС соответствовали нормальным значениям (табл . 3,4,5, рис .3). Исходя из полученных данных , можно предположить , что возможным механизмом снижения апоптотической активности лимфоцитов периферической крови , у больных ОИЗ с МПС , является то , что к О ИЗ с МПС мы относим , в основном , цитомегаловирусную и герпетическую инфекции (и в меньшей степени бактериальные инфекции (токсоплазмоз , иерсиниоз )), которые по-видимому , обладают аналогичным действием на процессы апоптоза , так как принадлежат к семейству г ерпес-вирусов , куда относится и EBV . Таким образом , при ИМ и МПС наблюдается угнетение апоптотической активности лимфоидных клеток , по сравнению с таковой у здоровых детей , что проявляется снижением числа апоптотически измененных клеток и ДНК-фрагментации. У больных ИМ данные изменения носят более выраженный характер , сохраняются в фазу реконвалесценции , и восстанавливаются лишь в отдаленном периоде после болезни (табл . 3,4,5, рис .3). Выводы : 8. У детей , больных инфекционным мононуклеозом и острыми ин фекционными заболеваниями с мононуклеозоподобным синдромом , в острый период болезни на фоне повышения общего количества лейкоцитов , обусловленного увеличением содержания моноцитов , палочкоядерных нейтрофилов , АМ и абсолютного числа лимфоцитов , содержание с егментоядерных нейтрофилов снижается . 9. В период клинического выздоровления у больных инфекционным мононуклеозом и острыми инфекционными заболеваниями с мононуклеозоподобным синдромом содержание лимфоцитов и АМ остается повышенным , количество моноцитов и гранулоцитов нормализуется . Данные изменения сохраняются в катамнезе . У детей , перенесших ИМ развивается моноцитопения . 10. Жизнеспособность и спонтанная апоптотическая активность лимфоцитов периферической крови у детей , больных инфекционным мононуклео зом и острыми инфекционными заболеваниями с мононуклеозоподобным синдромом не изменяется . 11. Количество апоптотически измененных клеток и содержание фрагментированной ДНК , при индукции апоптоза лимфоцитов периферической крови in vitro у детей , больных инфекционным мононуклеозом и острыми инфекционными заболеваниями с мононуклеозоподобным синдромом снижено . 12. В период реконвалесценции у детей , больных острыми инфекционными заболеваниями с мононуклеозоподобным синдромом , количество апоптотически изм ененных клеток и содержание фрагментированной ДНК нормализуется , в то время как у больных ИМ сохраняется сниженным . 13. В отдаленном периоде после болезни у детей с инфекционным мононуклеозом и острыми инфекционными заболеваниями с мононуклеозоподобным синдромом показатели апоптотической активности лимфоцитов периферической крови соответствуют норме . 14. При ИМ и МПС наблюдается угнетение Апоптотическая активность лимфоидных клеток при инфекционном мононуклеозе и мононуклеозоподобном синдроме ниже тако вой у здоровых детей , что проявляется снижением числа апоптотически измененных клеток и ДНК-фрагментации . У больных ИМ данные изменения носят более выраженный характер , сохраняются в фазу реконвалесценции , и восстанавливаются лишь в отдаленном периоде пос л е болезни. Список литературы 1. Балашева Т.Б ., Казарин В.С ., Суханова И.А . Активность щелочной фосфатазы нейтрофильных лейкоцитов как вспомогательный тест в дифференциальной диагностике ангин и инфекционного мононуклеоза //Вопросы охраны материнства и де тства . – 1966. -Т .11, № 2. – с .30-36. 2. Баринский И.Ф ., Носик Д.Н ., Кальнов С.Л ., Никитина А.А ., Львов Н.Д ., Петров М.С ., Цибезов В.В . Активация репродукции вирусов при смешанной инфекции вирусом иммунодефицита человека и герпес-вирусов //Вопросы вирусолог ии . – 1994. -№ 5. – с .223-226. 3. Барышников А.Ю ., Заботина Т.Н ., Седяхина Н.П ., Хорошко Н.Д ., Туркина А.Г ., Палкина Т.Н ., Лобанова В.В ., Шишкин Ю.В ., Кадагидзе З.Г . Коэкспрессия антигена С D 34 ранних гемопоэтических предшественников и антигена FAS / APO -1 ( CD 95), опосредующего апоптоз //Экспериментальная онкология . – 1994. -№ 4-6. – с .343-345. 4. Барышников А.Ю ., Шишкин Ю.В . Програмированная клеточная смерть (апоптоз )//Российский онкологический журнал . – 1996. -№ 1. – с .58-60. 5. Блюмкин В.Н ., Жданов В.М . Влияние в ирусов на хромосомный аппарат и деление клеток / М ., Медицина , 1973 – 128 с. 6. Выдумкина С.П ., Зазиленко Л.А ., Кузенкова А.К . Частота острой цитомегаловирусной инфекции среди лиц разных возрастных групп //Вопросы вирусологии . – 1999. -№ 1. – с .19-20. 7. Гасп арян М.О ., Шиленкова В.И . Лейкоцитарный профиль при инфекционном мононуклеозе у детей //Педиатрия . – 1972. -№ 8.-с .74-77. 8. Демин А.А ., Салганин Р.И . Терапевтическая эффективность дезоксирибонуклеазы при инфекционном мононуклеозе // Сов . медицина . – 1983. – с .91-92. 9. Дранкин Д.И ., Заяц Н.А . Эпидемиология инфекционного мононуклеоза //Журнал микробиологии , эпидемиологии и иммунобиологии . – 1982. – № 1. – с .26-33. 10. Дунаевский О.А ., Постовит В.А . Особенности инфекционных болезней у лиц пожилого и старческого воз раста . – Л ., 1982. – с .190-212. 11. Жд aн oв В . М . Канцерогенез : вирусы и транспозоны // Вопросы онкологии - 1984. - N 1. - С . 98-104. 12. Жибурт Е.Б ., Серебрянная Н.Б ., Ионова А.И . и др . Метод диагностики инфекции вирусом Эпштейна-Барр // Вопросы Вирусоло гии – 1996. - № 4. – с . 185-187. 13. Жибурт Е.Б ., Серебрянная Н.Б ., Каткова И.В ., Дьякова В.В . Цитокины в кроветворении , иммуногенезе и воспалении // Terra med . – 1996. - № 3. – С . 38-41. 14. Живица Л.В ., Пономаренко Г.Ф ., Предеина В.А . Особенности течения инфекционного мононуклеоза у детей и взрослых // Клиническая медицина . – 1987. -№ 10. – с .121-123. 15. Зуев В . А . Медленные вирусные инфекции человека и животных . — М ., 1988 – 437 с. 16. Исаева М.П ., Леонова Г.Н ., Кожемяко В.Б ., Борисевич В.Г ., Майстровская О.С ., Рассказов В.А . Апоптоз как механизм цитопатического действия вируса клещевого энцефалита // Вопросы вирусологии . – 1998. -№ 4. -с .182-186. 17. Казанова Л.И . Цитофотометрия ДНК как метод оценки пролиферативной активности клеток злокачественных лимфом // I Всесоюзный съезд гематологов и трансфузиологов . Тезисы докл . 22-26 окт . 1979 г ., г . Баку . - Москва , 1979. – С .117. 18. Клиническая иммунология и аллергология / Под ред . Л . Йегера : Пер . с нем . — М ., 1990. — Т . 1. — С . 450 — 460. 19. Котельников В.М ., Мо дестова Е.В ., Касаткина В.В . Комбинированное радиоавтографическое и цитофотометрическое исследование состава и кинетики клеточных популяций при инфекционном мононуклеозе //Проблемы гематологии и переливания крови . – 1982. -№ 9. – с .39-42. 20. Купчинский Р.А . Значение вируса Эпштейна-Барр и других вирусов в эволюции систем гомеостаза человека-хозяина //Журнал эволюционной биохимии и физиологии .- 1994.- Т 30.- № 3. – С .15-19. 21. Леенман Е.Е ., Афанасьев Б.В ., Пожарисский Н.М . О роли вируса Эпштейн-Барр в патогенезе лимфогранулематоза //Архив патологии . – 1999. -№ 1. – с .15-22. 22. Львов Н.Д ., Мельниченко А.В . Вирусы герпеса человека 6, 7 и 8-го типов – новые патогены семейства Herpesviridae// Вопросы вирусологии . – 1999. – № 3. -с .105-111. 23. Мазурина Н.А ., Егорова Н.Ю. , Чижикова И.Н ., Мамедова Е.А ., Долгина Е.И . Мононуклеозоподобный синдром цитомегаловирусной этиологии у ребенка раннего возраста // Педиатрия . – 1996. -№ 1. – с .88-89. 24. Маянский А.Н ., Маянский Н.А ., Абаджиди М.А ., Заславская М.И . Апоптоз : начало будущего / /Журнал микробиологии . – 1997. – № 2. – с .88-94. 25. Мордовец В.И ., Рудакова Р.И ., Гуськова Т.Б . Особенности клиники инфекционного мононуклеоза у детей первого года жизни // Научные труды Новосибирского мед . ин-та . – 1986. – Т .125. – С . 75-78. 26. Мушецяну К ., Мушецяну В ., Вишнеску Д . Роль феномена ядерной фрагментации моноцитов в диагностике атипичных форм инфекционного мононуклеоза // Проблемы гематологии и переливания крови . – 1965. - Т .10. – № 2. – С .35-36. 27. Новицкий В.В ., Уразова О.И ., Антоненко Н.М .,Жукова О.Б . Особенности поверхностной архитектоники лимфоцитов и моноцитов у больных с инфекционным мононуклеозом //Актуальные вопросы экспериментальной морфологии . Томск -1999.-с .14-16. 28. Погорелов В.М ., Козинец Г.И . Морфология апоптоза при нормальном и патологическом гемопоэзе //Гематология и трансфузиология . – 1995. – Т .40, № 5. – с .21-25. 29. Руководство по воздушно-капельным инфекциям / Под ред . Мусабаева И.К . – Ташкент , 1982. – Ч .2. – с .408-433. 30. Руководство по инфекционным болезням у детей //Бисярина В.П ., Блюменталь К.В ., Брагинская В.П . и др . – М , 1980. – с .261-274. 31. Серебряная Н.Б ., Жибурт Е.Б ., Новик А.А ., Волошин С.В ., Криволапов Ю.А ., Каткова И.В ., Дьякова В.В ., Зюзькин И.С ., Санжаревский В.А . Связь инфекции вирусом Эпштейна-Барр с HLA-фенотипо м и оссобенностями цитокинового статуса у больных со злокачественными неходжкинскими лимфомами //Вопросы вирусологии . – 1998. -№ 2. – с .79-82. 32. Титов Л.П ., Самойлович Е.О ., Кочановский Б ., Вольф Х.И . Серологические и эпидемиологические особенности инфекции , вызванной вирусом Эпштейна-Барр , в республике Беларусь //Вопросы вирусологии . – 1999. -№ 1. – с .21-24. 33. Турковская Н.Н ., Старшинова В.С ., Плотникова Н.М . Цитохимические показатели лейкоцитов при инфекционном мононуклеозе // Клиническая медицина . – 1977. – Т .55. - № 8. – С .119-123. 34. Уманский С.Р . Апоптоз : молекулярные и клеточные механизмы //Молекулярная биология . – 1996. – Т .30, вып .3. – с .487-498. 35. Уразова Л.Н ., Подоплекин В.Д ., Одинцова Л.Н . Диагностическое значение определения антител к антигенам в ируса Эпштейна-Барр при инфекционном мононуклеозе // Лабораторное дело . – 1989. - № 5. – С .73-74. 36. Уразова Л.Н ., Подоплекин В.Д ., Одинцова Л.Н ., Лепехин А.В . Диагностическое значение определения антител к антигенам вируса Эпштейна-Барр при инфекционном мононуклеозе //Лабораторное дело . – 1989. -№ 5.-с .73-74. 37. Уразова О.И ., Помогаева А.П ., Новицкий В.В.,Жукова О.Б . Ультраструктура мононуклеаров периферической крови у детей , больных инфекционным мононуклеозом . // Актуальные вопросы медицины.-Томск , 2000.- с .74-75. 38. Утешев Д.Б ., Сергеев А.В ., Утешев Б.С . Апоптоз : фармакологические аспекты //Экспериментальная и клиническая фармакология . – 1998. – Т .61, № 4. – с .57-65. 39. Чирешкина Н.М . Инфекционный мононуклеоз (болезнь Филатова ) у детей . – М ., 1973 – 246 c . 40. Ютенко А.К ., Смирнова И.А ., Кишинская Е.Г . Определение генома вируса Эпштейна-Барр в клетках лимфатических узлов и крови больных злокачественными лимфомами из Чернобыльского региона // Экспер.онкол . – 1994. - № 2-3. – С . 164-169. 41. Ярилин А.А . Апопто з и его место в иммунных процессах //Иммунология . – 1996. – № 6. – с .10-21 42. Ярилин А.А . Апоптоз . Природа феномена и его роль в целостном организме //Патологическая физиология и экспериментальная терапия . – 1998. -№ 2. – с .38-48. 43. Akbar A.N., Borthwick N., Salmon M. The significance of low bcl-2 expression by CD45RO T cells in nirmal individuals and patients with acute viral infections. The role apoptosis in T cell memory // J. Exp. Med. – 1993. – Vol.178, № 2. – P. 427-438. 44. Albeck H., et.al. (1985). Epstein-Barr virus infection and serological profile in Greenland eskimo children// Acta Ped. Scand. – 1985. -№ 74. – P.691-696. 45. Anagnostopoulos I., Hummel М ., Kreschel С . et al. Morphology, immunophenptype and distribution of latently and or produc tively Epstein — Barr virus// Blood. — 1995. — Vol. 85. N3. — P. 744-750. 46. Andersson J. e.a. Effut of A cyclovir on infectious mononucleosis// J. Infect. Dis. – 1986. – 153: 28 3-290. 47. Beaulieur A. D., Paquin R., Gosselin J. et al. Epstein — Barr virus modulate de novo protein synthesis in human neutrophils // Blood. - 1996. - Vol. 86, N 7. - P. 2789-2798. 48. Bevinck J.N.B., Gissmann L., Claas F.H. J. et.al. Relation between skin cancer humoral responses to human papillomaviruses and HLA class II molecules in renal transplant recipients // J. Immunol. – 1993. – Vol. 151, N3. – P. 1579-1586. 49. Bnuin de P. С ., Gruss H. J ., Van Der Valk P. CD30 expression in normal and neopla stic lymphoid tissue: biological aspect and clinical implication // Leukemia. — 1995. — Vol. 9. N 10, P. 1620-1627. 50. Cozad J. Infectious mononucleosis // Nurse Pract. – 1996. – Vol.21, № 3. – P14-16, 23, 27-28. 51. De Paoli P., Gennari D., Martelly. Ga mma delta T cell receptor-bearing lymphocytes during Epstein-Barr virus infection // J. Infect. Dis. – 1990. - Vol.161, № 5. – P.1013-1016. 52. Di Giuseppe J. A., Wu T. C., Zehnbauer B. A. et. ai. Erstein — Barr virus and progression of non-Hodgkin's lymphom a to Ki-I-positive, anaplastic large cell phenotype // Mod. Pathol. — - 1995. - Vol. 8, N 5. - P. 553-559. 53. Epstein — Barr virus silver anniversary // Lancet. — 1989. — W Vol. I, N 8648. - P. 1171-1173. 54. Epstein — Barr virus// Blood. — 1995. — Vol. 85 . N3. — P. 744-750. 55. Foss H. D., Anagnostopoulos /., Herbst H. et al. Patterns of cytokine gene expression in peripheral T-cell lymphoma of angioimmunoblastic lymphadenopathy type // Blood. — 1995. - Vol. 85, N 10. - P. 2862-2869. 56. Garrido F., Cab erra Т .. Lopes-Nevot M. A., Ruiz-Cabello F. HLA-class I antigens in human tumors // Adv. Cancer Res. — 1995. - Vol. 67, N 1. - P. 155-185. 57. Gibbons D. L., Rowe M., Cope A. P . et al. Lymphotoxin acts an autocrine growth factor for Epstein — Barr virus tr ansformed B-cells and differentiated Burkitt lymphoma cell line // Eur. J. Immunol. - 1994. - Vol. 24, N 8. - P. 1879-1885. 58. Gogusev J., Tentsch В ., Morin M. T. Inhibition of HLA class 1 antigen and m-RNA expression induced by Rons sarcoma virus in tr ansformed human fibroblasts // Proc. natl. Acad. Sci. USA. - 1988. - Vol. 85. N 1. - P. 203-209. 59. Gosselin J., Menezes J. et al. Inhibition of tumor necrosis factor-alfa transcription by Epstein — Barr virus // Eur. J. Immunol. - 1991. - Vol. 21, N 1. - P. 203-208. 60. Grasi G., Balistreri М ., Schito G. C. Recombinant antigens in the serodiagnosis of EBV-infections // Biotest Bull. — 1993. — Vol.5, N 1.- P. 47-50. 61. Gratama J.W., Oosterveer M.A., Weimar W. Detection of multiple “ Ebnotypes” in individ ual Epstein-Barr virus carriers following lymphocyte transformation by virus derived from peripheral blood and oropharynx // J. Gen. Virol. – 1994. – Vol.75, № 1. – P.85-94. 62. Hinderer W., Nebel-Schicel Н ., Horn S . et al. The Biotest Anti-EBV recombinant ELISA system recent studies, progress in interpretation, and future trends// Ibid. — P. 33 — 46. 63. Imai S. Virological and immunological studies on inapparent Epstein-Barr virus infection in healthy individuals: in comparison to immunosuppressed patients and patients with infectious mononucleosis // Hokkaido Igaku Zasshi. – 1990. - Vol.65, № 5. – P.481-492. 64. Imreh M. P., Zhang Q. J., de-Campos-Lima P. 0 . et al. Mech-anisms of alele-selective down-regulation of HL A class 1 in Burkitt's lymphoma // Int. J. Cancer. — 1995. — Vol. 62, N 1. - P. 90-96. 65. Jiang C., Lu J., Garia G. Dezoxyribonuclease induction in apoptotic cytotoxic T-lymphocytes // Biochem. Biophys. Res. Commun. – 1993. – Vol.194. – P.836-841. 66. J oseph G., Smith K., Penn I. HLA-antigens and posttransplantant lymphoproliferative disorders // Blood. — 1994. — Vol. 84, N 10 - Suppl. - P. A 614. 67. Kanegane H., Kanegane C., Yachie A. Infectious mononucleosis as a disease of early childhood in Japan c aused by primary Epstein-Barr virus infection // Acta Paediatr. Jpn. – 1997. – Vol.39, № 2. - P.166-171. 68. Kanegane H., Shintani N., Miyamori C. Peripheral blood lymrhosytes subpopulations in three infants with hepatosplenomegaly caused by cytomegalovirus infection // Acta Paediatr. Jpn. – 1995. – Vol.37,№ 3. - P.370-373. 69. Khanna R., Burrows S.R., Moss D.J. Immune regulation in Epstein-Barr virus-associated diseases // Microbiol. Rev. – 1995. – Vol.59,№ 3. – P.387-405. 70. Kube D., Platzer C., von Knethen A. et. al. Isolation of the human interleukin 10 promoter. Characterization of the promoter activity in B urkitt's lymphoma cell line // Cytokine. — 1995. -Vol. 7. N 1. - P. 1-7. 71. Lewin N., Aman P., Akerlund B. Epstein-Barr virus-carrying B cells in the blood during acute infectious mononucleosis give rise to lymphoblastoid lines in vitro by release of tr ansforming virus and by proliferation // Immunol. Lett. – 1990. - Vol.26,№ 1. – P.59-65. 72. Marmur J. Electrophoresis DNA on a agarose gel // J. Molec. Biol. – 1961. - № 3. – Р .208-218. 73. Masucci M. C., Torsteindottir S., Colimbani J . et al. Down regula tion of class 1 HLA antigens of the Epstein — Barr virus-en coded latent membrane protein in Burkit lymphoma lines // Proc. natl. Acad. Sci. USA. - 1987 - Vol. 84. N 3. -P. 4567-4571. 74. Matter L., Gorgievski М ., Montandon A. et al. Epstein — Barr virus (EBV ) antibody patterns and circulating EBV in innuno compromised hosts // Ibid. — P. 27 — 32. 75. Mayer I., Schwarzmann F., Reischl U., Wolf Н . Pathobiology of Epstein-Barr virus and related diseases // Ibid. — P. 3 — 12. 76. Moss D.J., Burrows S.R., Khanna R. Immune surveillance against Epstein-Barr virus // Semin. Immunol. – 1992. – Vol.4, № 2. – P.97-104. 77. Murtagh J. Acute sore throat // Aust. Fam. Physician. – 1990. - Vol.19, № 7. – P.1111-1115. 78. Naher H., Petzoldt D. Epstein-Barr virus infection — a l ympho-andepitheliotropic infection // Hautarzt. – 1992. - Vol.43, № 3. – P.114-119. 79. Nakata M., Kawasaki A., Azuma M. Expression of perforin and cytolytic potential of human peripheral blood lymphocyte subpopulations // Int. Immunol. – 1992. – Vol.4, № 9 . – P.1049-1054. 80. Nicolas J.C., Marechai V., Dehee A. Epstein-Barr virus // Bull. Acad. Natl. Med. – Vol. 181, № 6. – P.981-996. 81. Paull J.R., Bunnell W. The presente of heterophile antibodies in infectious mononucleosis// Am.J.Med.Sci. – 1932. – 183-1 90. 82. Ribera E., Ocana I., Almirante B. Autoimmune neutropenia and thrombocytopenia associayed with development of antibodies to human immunodeficiecy virus // Immunol. Cell. Biol. – 1989. – Vol.67, № 1. – P.49-55. 83. Ritter S., Schroder S., Uy A. Haem olisis in hepatitis A infections coinciding with the occurrence of autoantibodies aganst triosephosphate isomerase and the reactivation of latent persistent Epstein-Barr virus infection // J. Med. Virol. – 1996. – Vol.50, № 3. – P.272-275. 84. Schuster V., Seidenspinner S., Kreth Н . W. Epstein — Barr virus related diseases in childhood // Ibid. — P. 13 — 20. 85. Shuster V., Kreth N.W. Epstein-Barr virus infection and associated diseases in children. II. Diagnostic and th eraeutic strategies // Eur. J. Pediatr. – 1992. – Vol.151, № 11. – P.794-798. 86. Straus S.E., Cohen J.I., Tosato G. Epstein-Barr virus infections: biology, pathogenesis and menegement // Ann. Intern. Med. – 1993. – Vol.1118, № 1. – P45-58. 87. Taga H., Ta ga K., Wang F. Human and viral interleukin-10 in acute Epstein-Barr virus-induced infectious mononucleosis // J. Infect. Dis. – 1995. – Vol.171, № 5. – P.1347-1350. 88. Titov L. P., Gourmanchuk I. Е ., Ignatenko S. I., IgE biosyntesis children from Belarus region contaminated with radionuclides after the Chernobyl disaster // American College of Allergy, Asthma, Immunology: Abstract Book: Boston, 1996. — P. 53. 89. Titov L. P., Kharitonic G. D., Gourmanchuk I. Е ., Ignatenko S. I. Effects of radiation on the production of innunoglobulins in children subsequent to the Chernobyl disaster // Allergy Proc. - 1995. - Vol. 16, N 4. - P. 185-193. 90. Toren A., Don-Bassat I., Rechavi G . et al. Infectious agent and environmental factors in lymphoid malignancies // Blood Rev. - 1996. - Vol. 10, N 2. - P. 89-94. 91. Uehara T., Miyawaki T., Ohta K. Apoptotic cell death of primed CD45RO+T lymphocyte in Epstein-Barr virus-induced infectious mononucleosis // Blood. – 1992. – Vol.80, № 2. – P.452-458. 92. Verdium C. M., W atson D. A., Van Dijk H., Verhoef J . Constitutional Resistance to Infection. — New York, 1995. 93. Wakasugi N.. Tagaya Y., Mitsui A. et al. Adult T-cell leukemia factor/thiredoxin, produced by both human HTLV type I and Epstein — Barr virus-transformed lymphocytes. acts as an auto crine growth factor and synergise with interleukin I and interkeukin 2 // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. — 1990. — Vol. 87, N 2. - P. 8282-8286. 94. Wilson A.D., Redchenko I., Williams N.A. CD4+T cells ingi bit grows of Epstein-Barr virus-transformed B cells through CD95-CD95 ligand-mediated apoptosis // Int. Immunol. - 1998. – Vol.10,№ 8. – P.1149-1157. 95. Wising P.J. Some experiments with lymph gland material from cases of infectious mononucleosis// Acta M ed. Scand. – 1939. – 98:328. 96. Wising P.J. Successful transmission of infectious mononucleosis to man bu transfusion of heparininized blood// Acta Med. Scand. – 1942. – 109:507. 97. Wolf Н .. Bogedan C., Schwarzman F. Epstein — Barr virus and its interaction wirh the host // Intervirology. — 1993. — Vol. 35, N 1. - P. 26-39. 98. Wurtzler P. Diagnosis of Epstein-Barr virus infections // Biotest Bull.-1993.- Vol.5, № 1.- P.21-26. 99. Wutzler P. Diagnosis of Epstein — Barr virus infections // Biotest Bull. - 1993 . - Vol. 5, N1. - P. 21-26. Таблица 3. Оценка жизнеспособности лимфоцитов периферической крови у детей с инфекционным мононуклеозом и мононуклеозоподобным синдромом (% мертвых клеток ), Х m Группы исследования До инкубаци и После инкубации Спонтанный апоптоз Индуцированный апоптоз Здоровые дети 5,17 0,25 13,15 0,98; p 0,001 18,89 1,07; p 0,001 Дети , больные ИМ 1 группа 5,92 0,6 14,25 1,60; p 0,001 17,58 1,73; p 0,001 2 гру ппа 5,52 0,68 11,71 1,72; p 0,01 20,71 1,58; p 0,001 3 группа 5,11 0,46 14,32 2,98; p 0,01 21,47 3,19; p 0,001 Дети , больные МПС 1 группа 6,00 0,46 13,42 1,02; p 0,001 18,54 1,32; p 0,001 2 группа 5,46 0,66 13,46 1,30; p 0,001 16,15 1,97; p 0,001 3 группа 5,73 0,47 14,82 2,14; p 0,001 19,73 1,88; p 0,001 Примечание : Р – достоверность различий по сравнению с показателями той же группы в доинкубационном периоде. Таблица 5. Морфологические формы апоптоза лимфоцитов периферической крови у детей с инфекционным мононуклеозом и мононуклеозоподобным синдромом (%), Х m Группы исследования Апоптозные клетки Апоптозные тела Спонтанный апоптоз Индуцированный апоптоз Спонтанный апоптоз Индуцированный апоптоз Здоровые дети 26,38 1,73 33,17 1,52 9,55 0,78 11,00 0,94 Дети , больные ИМ 1 группа 22,70 2,85 27,75 2,54; p 1 0,05 7,80 1,11 9,45 0,93 2 группа 21,25 2,82 26,88 3,06; p 1 0,01 8,06 0,92 9,63 1,50 3 группа 24.31 3,14 30,29 3,54 7,82 1,49 8,79 1,63 Дети , больные МПС 1 группа 22,46 1,95 27,89 1,94; p 1 0,05 7,97 0,96 8,79 1,03 2 группа 23,08 3,21 31,00 3,14 9,50 1,23 11,17 1,46 3 группа 31,62 3,71 31,16 2,45 10,98 2,55 12,05 2,39 Таблица 4. Содержание фрагментированной ДНК в лимфоцитах периферической крови с у детей с инфекционным мононуклеозом и мононукле озоподобным синдромом (%), Х m Группы исследования Спонтанный апоптоз Индуцированный апоптоз Здоровые дети 50,12 1,72 48,85 2,18 Дети , больные ИМ 1 группа 47,68 2,67 38,48 3,80; p 1 0,05 2 группа 47,91 2,06 40,72 1,81; p 1 0,01 3 груп па 49,50 1,70 52,29 2,34; p 3 0,05 Дети , больные МПС 1 группа 50,24 2,79 40,73 2,51; p 1 0,05 2 группа 49,47 1,36 49,21 1,91; p 2 0,05; p 4 0,01 3 группа 45,62 2,60 48,21 3,09 Таблица 1. Распределение обследованных детей в зависимости от методов и сроков исследования , чел. Группы исследования Показатели периферической крови Оценка жизнеспособности лимфоцитов Содержание фрагментированной ДНК Морфологические формы апоптоза Здоровые дети 58 48 31 29 Дети , больные ИМ 1 группа 35 12 17 20 2 группа 26 21 26 16 3 группа 23 19 9 10 Дети , больные МПС 1 группа 42 26 28 29 2 группа 16 13 10 12 3 группа 12 11 6 10 Примечание : здесь и в таблицах 2,3,4 и 5 приняты сокращения : ИМ - инфекционный мононуклеоз ; МПС - мононук леозоподобным синдромом. Таблица 2. Показатели периферической крови у у детей с инфекционным мононуклеозом и мононуклеозоподобным синдромом , Х m Общее количество лейкоцитов Лимфоциты Атипичные мононуклеары Моноциты Сегм ентоядерные нейтрофилы Палочкоядерные нейтрофилы Эозинофилы Здоровые дети Абс.,Г /л 5,98 0,22 2,89 0,17 0,13 0,03 0,31 0,03 2,38 0,15 0,05 0,01 0,12 0,02 Отн ., % 49,05 1,87 2,07 0,32 5,60 0,58 40,12 1,82 0,79 0,15 1,87 0,26 Дети , больные ИМ 1 группа Абс.,Г /л 10,15 0,67 p 1 0,001 5,13 0,42 p 1 0,001 1,87 0,31 p 1 0,001 0,73 0,13 p 1 0,001 2,01 0,26 0,29 0,07 p 1 0,001 0.09 0,02 Отн ., % 52,09 3,04 16,80 2,36 p 1 0,001 7,00 1,07 20,29 2,28 p 1 0,001 2,43 0,50 p 1 0,001 1,03 0,28 p 1 0,05 2 группа Абс ., Г /л 7,38 0,79 p 1 0,05 p 2 0,01 4,31 0,40 p 1 0,001 0,63 0,10 p 1 0,001; p 2 0,01 0,30 0,06 p 2 0,01 1,92 0,32 0,05 0,01 p 2 0,01 0,51 0,03 Отн ., % 59,98 2,55 p 1 0,01 8,61 1,17 p 1 0,001; p 2 0,01 3,69 0,66 p 2 0,05 24,67 2,70 p 1 0,001 0,58 0,14 p 2 0,01 1,91 0,32 p 2 0,05 3 группа Абс.,Г /л 6,75 0,65 4,01 0,40 p 1 0,01 0,38 0,05 p 1 0,001; p 3 0,05 0,20 0,03 p 1 0,05 1,84 0,34 0,11 0,05 0,18 0,05 Отн ., % 60,13 2,59 p 1 0,01 5,52 0,70 p 1 0,01; p 3 0,05 3,17 0,54 p 1 0,05 26,52 2,97 p 1 0,001 1,74 0.74 2,39 0,54 Дети , больные МПС 1 группа Абс.,Г /л 9,67 0,70 p 1 0,001 5,14 0,52 p 1 0,001 1,34 0,21 p 1 0,001 0,50 0,08 p 1 0,05 2,22 0,33 0,25 0,06 p 1 0,001 0,15 0,03 Отн ., % 53,50 3,09 13,27 1,80 p 1 0,001 4,79 0.59 23,42 2,71 p 1 0,001 2,76 0,57 p 1 0,001 1,65 0,33 2 группа Абс.,Г /л 7,73 0,70 p 1 0,01 4,14 0,36 p 1 0,01 0.69 0,19 p 1 0,001 0,51 0,08 p 1 0,01; p 4 0,05 2,15 0,34 0,14 0,04 p 1 0,01; p 4 0,05 0,09 0 ,02 Отн ., % 55,06 2,99 8,06 1,79 p 1 0,001 6,06 0,74 p 4 0,05 27,81 3,61 p 1 0,01 1,50 0,34 p 1 0,05; p 4 0,01 1,31 0,34 3 группа Абс.,Г /л 7,00 0,62 4,32 0,52 p 1 0,01 0,66 0,15 p 1 0,001; p 4 0,05 0,24 0,04 p 3 0,05 1,56 0,31 0,06 0,02 0,13 0.05 Отн ., % 61,08 3,32 p 1 0,01 8,92 1,33 p 1 0,001; p 4 0,05 3,50 0,57 p 3 0,05 23,5 3,84 p 1 0,001 0,92 0,26 1,75 0,51 Примечание ; здесь и в таблицах 4и 5 p 1 – достоверность различий по сравнению с показателями здоровых детей ; р 2 - достоверность различий по сравнению с показателями 1 группы больных ; р 3 - достоверность различий по сравнению с показателями 2 группы больных ; р 2 - достоверность различий по сравнению с больными ИМ соответствующей группы.
1Архитектура и строительство
2Астрономия, авиация, космонавтика
 
3Безопасность жизнедеятельности
4Биология
 
5Военная кафедра, гражданская оборона
 
6География, экономическая география
7Геология и геодезия
8Государственное регулирование и налоги
 
9Естествознание
 
10Журналистика
 
11Законодательство и право
12Адвокатура
13Административное право
14Арбитражное процессуальное право
15Банковское право
16Государство и право
17Гражданское право и процесс
18Жилищное право
19Законодательство зарубежных стран
20Земельное право
21Конституционное право
22Конституционное право зарубежных стран
23Международное право
24Муниципальное право
25Налоговое право
26Римское право
27Семейное право
28Таможенное право
29Трудовое право
30Уголовное право и процесс
31Финансовое право
32Хозяйственное право
33Экологическое право
34Юриспруденция
 
35Иностранные языки
36Информатика, информационные технологии
37Базы данных
38Компьютерные сети
39Программирование
40Искусство и культура
41Краеведение
42Культурология
43Музыка
44История
45Биографии
46Историческая личность
47Литература
 
48Маркетинг и реклама
49Математика
50Медицина и здоровье
51Менеджмент
52Антикризисное управление
53Делопроизводство и документооборот
54Логистика
 
55Педагогика
56Политология
57Правоохранительные органы
58Криминалистика и криминология
59Прочее
60Психология
61Юридическая психология
 
62Радиоэлектроника
63Религия
 
64Сельское хозяйство и землепользование
65Социология
66Страхование
 
67Технологии
68Материаловедение
69Машиностроение
70Металлургия
71Транспорт
72Туризм
 
73Физика
74Физкультура и спорт
75Философия
 
76Химия
 
77Экология, охрана природы
78Экономика и финансы
79Анализ хозяйственной деятельности
80Банковское дело и кредитование
81Биржевое дело
82Бухгалтерский учет и аудит
83История экономических учений
84Международные отношения
85Предпринимательство, бизнес, микроэкономика
86Финансы
87Ценные бумаги и фондовый рынок
88Экономика предприятия
89Экономико-математическое моделирование
90Экономическая теория

 Анекдоты - это почти как рефераты, только короткие и смешные Следующий
В жизни Отелло Дездемона была настоящей отдушиной.
Anekdot.ru

Узнайте стоимость курсовой, диплома, реферата на заказ.

Обратите внимание, диплом по биологии "Исследование апоптотической активности лимфоцитов периферической крови in vitro при инфекционном мононуклеозе и мононуклеозоподобном синдроме", также как и все другие рефераты, курсовые, дипломные и другие работы вы можете скачать бесплатно.

Смотрите также:


Банк рефератов - РефератБанк.ру
© РефератБанк, 2002 - 2017
Рейтинг@Mail.ru