Реферат: Аллергические заболевания органов дыхания у детей - текст реферата. Скачать бесплатно.
Банк рефератов, курсовых и дипломных работ. Много и бесплатно. # | Правила оформления работ | Добавить в избранное
 
 
   
Меню Меню Меню Меню Меню
   
Napishem.com Napishem.com Napishem.com

Реферат

Аллергические заболевания органов дыхания у детей

Банк рефератов / Медицина и здоровье

Рубрики  Рубрики реферат банка

закрыть
Категория: Реферат
Язык реферата: Русский
Дата добавления:   
 
Скачать
Microsoft Word, 169 kb, скачать бесплатно
Обойти Антиплагиат
Повысьте уникальность файла до 80-100% здесь.
Промокод referatbank - cкидка 20%!

Узнайте стоимость написания уникальной работы




Аллергические заболевания органов дыхания у детей

Полиморфизмы генов NO-синтаз и их ассоциация с бронхиальной астмой и патогенетическими признаками болезни у детей

Главными патогенетическими признаками бронхиальной астмы (БА) счита­ют атопию и состояние бронхиальной гиперреактивности. Оксид азота играет важную роль в развитии БА, поскольку он, являясь сигнальной молекулой, уча­ствует в механизмах формирования как атопии, так и гиперреактивности брон­хов [Barnes P.J., 1998; Lundberg J.O.N., Weitzberg E.,1996].

Синтез NO осуществляется семейством NO-синтаз (КФ 1.14.13.39): нейро-нальной (NOS-I), эндотелиальной (NOS-III) и индуцибельной (NOS-II). Все они являются продуктами различных генов, расположенных на разных хро­мосомах [GINА, 2002].

Наиболее вероятным кандидатом на участие в развитии БА является ген NOS-I [Grasemann H. et all., 1999]. Существуют исследования, показывающие связь полиморфных вариантов генов NO-синтаз с уровнем вырабатываемого (эндогенного) оксида азота, что в свою очередь зависит от активности мРНК генов NO-синтаз. Учитывая вышесказанное, можно ожидать значительный вклад полиморфизмов промоторной области генов NO-синтаз как факторов риска в развитие заболеваний, при которых отмечается нарушение нормаль­ной выработки NO, в частности при БА.

Цель данного исследования - изучение ассоциации полиморфизмов про­моторной области генов NO-синтаз у детей, больных БА, с клиническими и функциональными характеристиками болезни. Нами обследовано 88 детей в возрасте от 7 до 13 лет (мальчиков, девочек), больных БА, находившихся на лечении в отделении аллергологии Областной детской больницы в 2002-2003гг. Средний возраст больных составил 10,5±1,8 лет. Диагноз БА верифи­цировался в соответствии с положениями Национальной программы «Брон­хиальная астма у детей. Критерии лечения и профилактика». Средняя про­должительность заболевания к моменту обследования составила 3,3±0,5 года. Контрольную группу составили 26 практически здоровых детей того же воз­раста, проживающих в г.Томске.

Для оценки функции внешнего дыхания (ФВД) проводили анализ кривой поток-объем и показа­телей спирометрии. Исследование ФВД выполняли по стандартной методике на аппарате Master Lab Pro («Эрих Йегер», Германия). Степень реактивности дыхательных путей оценивали в мета-холиновом тесте (РС20). Измерение уровня общего сывороточного IgE было проведено с исполь­зованием твердофазного иммуноферментного анализа с использованием стандартного набора («Вектор Бест», г.Новосибирск). Выделение геномной ДНК из венозной крови обследуемых прово­дили методом фенол-хлороформной экстракции. Полиморфизм генов NO-синтаз в промоторной области определяли по следующей методике. Состав реакционной смеси (50 мкл): 67 мМ трис-НС1, рН 8,8; 16,7мМ сульфат аммония; 1,5 мМ хлорид магния; по 0,2 мМ каждого dNTP; 0,1 %

твин-20; 50-100 нг геномной ДНК человека; 2 ед. tag-полимеразы, по 5 пикомоль каждого из прай-меров, специфичных для NOS-I, NOS-II, NOS-II1:

NOS-I sense primer-5'-TTCGGCTGTGCTTTGATGGA-3'

NOS-I anti-sense primer-5'-GTTGACCGACTGGATTTAGGGCTCT-3'

NOS-II sense primer-(5'-GCCTTCTGGAACCTGGGATTT-3') и

NOS-II anti-sense primer-(5'-TTCGACTCGCTACAAAGTTAT-3');

NOS-III sense primer-5'-GCCAAGGGCACCGGCATCACCAGGA-3'

NOS-III anti-sense primer-5'-GTTACCAGCACCAGCGTCTCGT-3'

Условия проведения полимеразной цепной реакции (ПЦР): преднагрев: 95" С -5 мин.; основная про­грамма - 38 циклов: 95° С- 15 с (денатурация); 55" С - 15 с (отжиг); 72° С-40 с (синтез 2-й цепи); заключительная стадия: 72' С - 1мин. Термоциклер - «Терцик» (ДНК-Технология, г.Москва). В ре­зультате ПЦР получали фрагменты ДНК длиной 656, 500, 260 пар нуклеотидов соответственно для NOS-I, NOS-II, NOS-III. Для выявления полиморфизмов использовали анализ конформационного поли­морфизма одноцепочечных фрагментов ДНК (SSCP, single-strand conformational polymorphysm).

Тотальную РНК выделяли с помощью коммерческого набора TRIZOL™ (GibcoBRL, Life Technologies). ПолиА-PHK получали на колонках с олиго-dTцеллюлозой (ICN, США) и проводили обратную транскрипцию в течение 1 ч при 37' С. кДНК амплифицировали с праймерами, специфич­ными для мРНК NOS-I, NOS-II, NOS-III, синтезированными на ДНК-синтезаторе ASM 800:

мРНК NOS-I sense-5'-ATGGCTTGCCCCTGGAAGTT-3'

мРНК NOS-I anti sense-5'-GCCACAACAGTGGCAACAT-3'

мРНК NOS-II sense-5'-AGTTTGACCAGAGGACCCAG-3'

мРНК NOS-II anti sense-5'-CGAGGAGGCTGCCCTGCAGA-3'

мРНК NOS-III sense-5'-GTTGATGCGGAGGGAACCGA-3'

мРНК NOS-III anti sense-5'-GAACTGGAAGTAACGTGCCG -3'

Глицеральдегид 3-фосфат дегидрагепаза (ГАФД) использована как положительный контроль экспрессии мРНК. Показатели экспрессии выражали в процентах относительно активности ГАФД, которая принималась за 100%. ГАФД:

Sense primer - (5'-GAAGCTCACTGGCATGGCCTTCC-3');

Anti-sense primer - (5'-CATGTGGGCCATGAGGTCCA-3').

Оценку специфичности продуктов амплификации проводили с помощью «nested-ПЦР». Оценку нормальности распределения полученных результатов по каждой величине проводили с помощью критерия Колмагорова-Смирнова. Статистическую обработку результатов для признаков с нор­мальным распределением проводили с использованием t-критерия Стьюдента, для признаков, не соответствующих нормальному закону распределения, применяли U-mecma Манна-Уитии. Корре­ляционный анализ проводили с использованием критерия Пирсона. Сравнение распределения частот паттернов в группах обследованных проводили с использованием точечного критерия Фишера. Относительный риск (RR-Relative Risk) вычисляли по формуле:

RR=(a+0,5).(d+0,5)/(b+0,5Hc+0,5)

где а - число больных с наличием данного паттерна; b - с отсутствием данного паттерна; cud- число здоровых, с наличием и отсутствием данного паттерна соответственно; параметр 0,5 в этой формуле используется как поправка на малочисленность выборки. При оценке результатов было принято, что RR>1 рассматривали как положительную ассоциацию заболевания с данным полиморфным вариантом («фактор риска»), a RR<1 как отрицательную ассоциацию («фактор устойчивости»).

Результаты: При изучении уровня экспрессии NO-синтаз у детей, больных БА различной степени тяжести, установлена высокая активность матричной РНК (мРНК) NOS-I при тяжелой и среднетяжелой БА (р<0,05). В свою оче­редь активность мРНК NOS-III у всех больных детей, вне зависимости от тяжести заболевания, была достоверно выше (р<0,05), чем в группе контроля. Следует отметить, что при тяжелой БА активность мРНК NOS-II была досто­верно выше, чем при БА легкой и средней степени тяжести, а также почти в 10 раз превышала уровень экспрессии NOS-II в контрольной группе (табл. 1).

Уровень экспрессии мРНК генов NO-синтаз у больных бронхиальной астмы различной степени тяжести

Уровень экспрессии мРНК генов NO-синтаз у больных бронхиальной астмой и в контрольной группе


Уровень экспрессии мРНК

NOS1

NOS2

NOS3

Уровень экспрессии мРНК (контрольная группа)

4,4+0,18%

16,37±0,61%

1,48±0,16%

Уровень экспрессии мРНК (БА легкой степени тяжести)

4,0±0,22%

29,0±2,72%*

5,0±0,34%*

Уровень экспрессии мРНК (БА средней степени тяжести)

13,0±0,25%

71,0+6,83%*

2,0±0,3%

Уровень экспрессии мРНК (БА тяжелой степени)

14,0±0,39%*

156,0±3,86%*

4,0±0,26%*

Примечание: * - р<0>



Уровень экспрессии мРНК

NOS-1

NOS-2

NOS-3

паттерны

11

12

13

21

22

23

24

31

32

33

34

Уровень экспрессии МРНК (БА)

6,29 ±0,33

6,77 ±0,49

6,31 ±0,5

92,3 ±4,08*

94,5 ±2,5*

86,7 ±2,36*

151,25 ±2,3*

3,9 ±0,29

4,5 ±0,01

2,75 ±0,26

4,47 ±0,58*

Уровень экспрессии мРНК (контроль)

3,86 ±0,09

4,75 ±0,25

5,8 ±0,2

15,8 ±1,46

19,3

±1,67

15,7 ±0,63

1,48 ±0,19

2,6 ±0,42

2,5 ±0,26

1,0 ±0,01

Примечание: * р<0>


Методом корреляционного анализа установлена обратная связь между уровнем экспрессии NOS-II и показателями, характеризующими функцию легких, такими как ОФВ1(г=-0,5; р=0,0001), ФЖЕЛ (г=-0,4; р=0,001), ПВС% (г=-0,2; р=0,04). Наиболее высокий коэффициент корреляции получен между активностью мРНК NOS-I и изменениями, характерными для бронхиальной обструкции (ОФВ! (г=-0,6; р=0,0001), ОФВ/ ФЖЕЛ (г=-0,24; р=0,025)).

В рамках проводимого исследования было обнаружено три полиморф­ных варианта (паттерна) в промоторной области гена NOS-I: NOS-11, NOS-12 и NOS-13. В группе больных БА средней степени тяжести частота встреча­емости паттерна NOS-13 была достоверно выше (р<0,05), чем в группе кон­троля и в группах с легкой и тяжелой БА.

В промоторной области гена NOS-II было идентифицировано четыре вида паттернов: NOS-21, NOS-22, NOS-23 и NOS-24. У больных среднетяжелой БА паттерн NOS-21 встречался в 1,5 раза чаще, чем в других группах (р<0,05). Обнаружено, что у здоровых детей и у детей с легкой Б А отсутство­вал паттерн NOS-24, тогда как при тяжелой и среднетяжелой БА частота его встречаемости составляла 4,5% и 4,8% соответственно.

Для промоторной области гена NOS-III было получено четыре поли­морфных варианта: NOS-31, NOS-32, NOS-33 и NOS-34. Установлено, что при БА легкой и средней степени тяжести значительно чаще встречался пат­терн NOS-34 (30,4% и 23,8% соответственно против 11,5% в группе контроля). При тяжелой БА достоверно возрастала частота паттерна NOS-33 (р<0>

При наличии паттернов NOS-34 и (или) NOS-24 обнаружено достоверное повышение экспрессии мРНК по сравнению другими вариантами полимор­физмов в этих генах (р<0,05) (табл.2). Относительный риск (RR) для данных паттернов составлял 1,53 и 2,17 соответственно. Полученные результаты в данном случае доказывают наличие положительной ассоциации заболевания с полиморфными вариантами NOS-24 и NOS-34 («фактор риска»).

Наряду с этим у больных БА установлена положительная зависимость между уровнем IgE и наличием паттерна NOS-34 (г=0,2; р=0,04) и отрица­тельная при наличии NOS-31 (г=-0,2; р=0,04). Следует также отметить, что в контрольной группе частота обнаружения паттерна NOS-31 была досто­верно выше, чем у детей с БА (80,8% и 68,6% соответственно) (р<0,05), a RR составил 0,64, что может рассматриваться как отрицательная ассоциация паттерна NOS-31 с данным заболеванием («фактор устойчивости»).

Таким образом, наличие у детей определенных полиморфных вариантов промоторной области генов NO-синтаз может оказывать влияние на феноти-пические проявления БА и важных патогенетических признаков болезни. В развитие астматического синдрома включено множество генов разных локу-сов, каждый из которых может вносить небольшой вклад в общую подвер­женность заболеванию. Гены NO-синтаз являются лишь одними из множества генов предрасположенности к БА, взаимодействующих между собой и с окру­жающей средой.

1Архитектура и строительство
2Астрономия, авиация, космонавтика
 
3Безопасность жизнедеятельности
4Биология
 
5Военная кафедра, гражданская оборона
 
6География, экономическая география
7Геология и геодезия
8Государственное регулирование и налоги
 
9Естествознание
 
10Журналистика
 
11Законодательство и право
12Адвокатура
13Административное право
14Арбитражное процессуальное право
15Банковское право
16Государство и право
17Гражданское право и процесс
18Жилищное право
19Законодательство зарубежных стран
20Земельное право
21Конституционное право
22Конституционное право зарубежных стран
23Международное право
24Муниципальное право
25Налоговое право
26Римское право
27Семейное право
28Таможенное право
29Трудовое право
30Уголовное право и процесс
31Финансовое право
32Хозяйственное право
33Экологическое право
34Юриспруденция
 
35Иностранные языки
36Информатика, информационные технологии
37Базы данных
38Компьютерные сети
39Программирование
40Искусство и культура
41Краеведение
42Культурология
43Музыка
44История
45Биографии
46Историческая личность
47Литература
 
48Маркетинг и реклама
49Математика
50Медицина и здоровье
51Менеджмент
52Антикризисное управление
53Делопроизводство и документооборот
54Логистика
 
55Педагогика
56Политология
57Правоохранительные органы
58Криминалистика и криминология
59Прочее
60Психология
61Юридическая психология
 
62Радиоэлектроника
63Религия
 
64Сельское хозяйство и землепользование
65Социология
66Страхование
 
67Технологии
68Материаловедение
69Машиностроение
70Металлургия
71Транспорт
72Туризм
 
73Физика
74Физкультура и спорт
75Философия
 
76Химия
 
77Экология, охрана природы
78Экономика и финансы
79Анализ хозяйственной деятельности
80Банковское дело и кредитование
81Биржевое дело
82Бухгалтерский учет и аудит
83История экономических учений
84Международные отношения
85Предпринимательство, бизнес, микроэкономика
86Финансы
87Ценные бумаги и фондовый рынок
88Экономика предприятия
89Экономико-математическое моделирование
90Экономическая теория

 Анекдоты - это почти как рефераты, только короткие и смешные Следующий
Беззубая студентка не грызёт, а сосёт гранит науки.
Anekdot.ru

Узнайте стоимость курсовой, диплома, реферата на заказ.

Обратите внимание, реферат по медицине и здоровью "Аллергические заболевания органов дыхания у детей", также как и все другие рефераты, курсовые, дипломные и другие работы вы можете скачать бесплатно.

Смотрите также:


Банк рефератов - РефератБанк.ру
© РефератБанк, 2002 - 2017
Рейтинг@Mail.ru