Реферат: ДНК. Основы генетического материал - текст реферата. Скачать бесплатно.
Банк рефератов, курсовых и дипломных работ. Много и бесплатно. # | Правила оформления работ | Добавить в избранное
 
 
   
Меню Меню Меню Меню Меню
   
Napishem.com Napishem.com Napishem.com

Реферат

ДНК. Основы генетического материал

Банк рефератов / Биология

Рубрики  Рубрики реферат банка

закрыть
Категория: Реферат
Язык реферата: Русский
Дата добавления:   
 
Скачать
Microsoft Word, 842 kb, скачать бесплатно
Заказать
Узнать стоимость написания уникального реферата

Узнайте стоимость написания уникальной работы

«ДНК. Основы генетического материал» Содержание Введение 1. Общие понятия о дезоксирибонуклеиновых кислотах 2. Способы получения ДНК 3. Химический состав и физико-химические свойства ДНК 4. Методы количественного и качественного определения и исследования 5. Содержание в клетках и тканях 6. Биосинтез 7. Биологическая роль 8. Гистохимические методы обнаружения в тканях Заключение Литература Введение Нуклеиновые кислоты имеют первостепенное биологич еское значение и представляют собой сложные высокомолекулярные биопол имеры, мономерами которых являются нуклеотиды. Они впервые были обнаружены в ядрах клеток, откуда и их название (нуклеус — ядро). Существует два типа нуклеиновых кислот: дезоксирибонуклеиновая (ДНК) и р ибонуклеиновая. Важные открытия были сделаны учеными, они открыли молекулу ДНК. На основ е этой молекулы строится вся жизнь. Немного из истории. ДНК впервые были открыты Мишером ( F . Micscher , 1869), который назвал полученное вещество нуклеином (ла т. nucleus ядро). Впоследствии было показано, что нуклеин представляет собой высокомолекулярную, соде ржащую фосфор кислоту, находящуюся в комплексе с белками, поэтому стали различать собственно нуклеиновую кислоту [Альтманн ( R . Altmann ), 1889] и ее комплексы с белками — ну клеопротеиды . Вскоре нуклеиновая кислота была полу чена из вилочковой железы (тимуса) теленка, оказавшейся богатым источник ом итого вещества. Вещество, близкое но свойствам, но отличающееся от нук леиновой кислоты, полученной из тимуса, выделили из дрожжей. Выяснилось, что нуклеиновая кислота из дрожжей содержит аденин, гуанин, цитозин и ур ацил, тогда как нуклеиновая кислота. выделенная из тимуса теленка, вмест о урацила содержит тимин. В качестве углеводного компонента в дрожжевой нуклеиновой кислоте нашли пентозу, а в препарате из тимуса — дезоксипен тозу. В зависимости от источника получения эти нуклеиновые кислоты полу чили названия тимонуклеиновой и зимонуклеиновой. Поскольку первый тип нуклеиновой кислоты находили в животных объектах, а второй — в растител ьных, употребляли также названия «животная» и «растительная» нуклеино вые кислоты. Однако, когда Фейльген ( R . Feulgen ) разраб отал гистохимическую реакцию на «животную» нуклеиновую кислоту, оказа лось, что она обнаруживается в ядре как животных, так и растительных клет около С другой стороны, «дрожжевая» нуклеиновая кислота была найдена Ж. Браше главным образом в цитопла зме клеток и растений, и животных. Наконец, А. Н. Белозе рским наличие ДНК у растений было доказано химическ и. Названия «дезоксирибонуклеиновая кислота» (ДНК) и «рибонуклеиновая к ислота» (РНК) были предложены после того, как Левином (Р. A . Leven е) было установлено, что дезоксипентоза в тимонуклеи новой кислоте является дезоксирибозой , а пентоза в зимонуклеиновой кислоте — ри бозой . 1. Общие понятия о дезоксирибонуклеиновых кислотах Д езоксирибонуклейновые кисло ты (ДНК; устаревшие названия: дез оксипентозонуклеиновые кислоты, ядерные нуклеиновые кислоты, тимонукл енновые кислоты, животные нуклеиновые кислоты) — нуклеиновые кислоты, с одержащие в качестве углеводного компонента дезоксприбозу, а в качеств е одного из пиримидиновых оснований — тимин, которым в молекулах рибону клеиновых кислот соответствуют рибоза и урацил. ДНК представляют собой линейные полимеры дезоксирибонуклеотидов, в последовательности азоти стых оснований которых закодирована вся наследственная информация. Таким образом, ДНК данного организма содержит в себе информацию о всех п ризнаках вида и особенностях индивидуума — его ге нотип — и передает эту информацию потомству, воспро изводя определенную последовательность оснований в строении индивиду альных ДНК. Поскольку молекулы ДНК очень больших размеров и существует о громное множество возможных неодинаковых последовательностей из четы рех различных нуклеотидов, число разных молекул ДНК практически бескон ечно. В природе ДНК содержатся во всех организмах за исключением РНК-содержащ их вирусов. ДНК являются типичным компонентом клеточного ядра, в котором они находятся в комплексе с белками, главным образом гистонами , образуя дезоксприбонуклеопро теиды, составляющие основу цитологической структуры хроматина и вещес тва хромосом. ДНК обнаружена также в хлоропластах растительной клетки и в митохондриях животных и растений, в которых она кодирует часть белков этих структур, благодаря чему они обладают некоторой автономией и лишь ч астично зависят от ДНК ядра. 2. Способы получения ДНК Методика выделения ДНК зависит от состава и характе ра используемого источника (ткани животных или растений, микроорганизм ы, вирусы). Для лабораторного и промышленного получения ДНК обычно испол ьзуют вилочковую железу теленка, а также сперму (молоки) рыб, селезенку мл екопитающих, ядерные эритроциты птиц. Препараты ДНК, получаемые обычно в виде натриевой соли ДНК, имеют вид бел ых волокон. Для сохранения нативных свойств ДНК обработку тканей и клето к проводят на холоду, по возможности быстро, в условиях, исключающих или у меньшающих действие дезоксирибонуклеаз , как правило, содержащихся в тканях и вызывающих ферментат ивный распад ДНК. Помимо сохранения нативных свойств, важнейшей задачей является очистка ДНК от других веществ, в первую очередь — от белков и РН К. В связи с этим методы получения ДНК различаются главным образом спосо бами депротеинизации и очистки препаратов от примесей РНК. Для этих целе й применяют обработку клеток и тканей различными д етергентами , фенолами и другими депротеинизирующими агентами. При получении ДНК из животных и растительных тканей чаще всего предвари тельно изолируют фракцию клеточных ядер или выделяют дезоксирибонукле опротеиды, отмывая их солевыми растворами в физиологических концентра циях в присутствии ЭДТА или других соединений, связывающих двухвалентн ые катионы, необходимые для проявления ферментативной активности дезо ксирибонуклеаз. После удаления основной массы белков препараты дополн ительно депротеинизируют хлороформом с октанолом или фенолом. Нередко их обрабатывают также рибонуклеазами и протеолитическими ферментами, обычно проназой . Для получения ДНК из бактерий обычно пользуются мет одом Мармура. который заключается в отмывании бактериальной массы 0,15 М Nad , содержащим 0,015 М цитрат натрия, лизисе клеток при 60° и рН 8,0 в 0,15 М NaCI , содержащем ЭДТА и 2% додецилсульфат натрия, депротепнизации их хлороформом, содержа щим изоамиловый спирт, переосаждении спиртом, повторной многократной д епротеинизации, обработке рибонуклеазой и осаждении изопропиловым спи ртом. Этот метод в различных модификациях также успешно применяют для по лучения ДНК из животных и растительных тканей и изолированных клеточны х структур, например, митохондрий. 3. Химический сост ав и физико-химические свойства ДНК ДНК представляют собой многоосновные сильные кисл оты, щелочные соли которых образуют в воде очень вязкие прозрачные колло идные растворы, застывающие при концентрации выше 0,25%. Растворы ДНК харак теризуются аномальной (структурной) вязкостью, объясняющейся удлиненн ой формой молекул, и в потоке обладают двойным, лучеп реломлением . Химически ДНК представляют собой высокомолекулярные полимеры монодез оксирибонуклеотидов (мононуклеотидов), являющиеся мономерами, из котор ых построены молекулы ДНК. Каждый мононуклеотид ДНК состоит из остатков фосфорной кислоты, 2-П-д езоксирибозы и пуринового или пиримидинового азотистого основания. Уг леводно-фосфатный остаток одинаков во всех мономерах ДНК, азотистое осн ование же может быть представлено аденином (А), гуанином (Г), цитозином (Ц) ил и тимином (Т). В ДНК разных организмов имеется некоторое количество так на зываемых, минорных оснований, например 5-метил-цитозина, частично заменя ющего цитозин. У высших животных и человека содержание этого основания д остигает 1,5%, у высших растений 5— 7% , у бактерий — не более 0,6% . В ДНК бактерий в стречается также 6-метиладенин и иногда другие метилированные азотисты е основания. В ДНК Т-четных бактериофагов (Т2, Т4 и Т6) цитозин полностью заме щен 5-оксиметилцитозином, в ДНК вирусов SP 01 и SP 8 тим ин замещен 5-оксиметилурацилом, а у фага PBS 1 — урацилом. В мононуклоотидах 2-П-дезокси-рибоза присоединена гликозидной связью че рез первый углеродный атом к атому азота в 9-м положении пуринового основ ания (аденина или гуанина) или в 3-м положении пиримидинового основания (ци тозина или тимина). Остаток фосфорной кислоты присоединен эфирной связь ю к 5'-му или З'-му атому углерода дезоксирибозы. Таким образом, мононуклеот идные остатки соединены между собой через фосфорную кислоту, которая со единена с 5'-С-атомом дезоксирибозы одного нуклеотида и с 3'-С-атомом дезокс ирибозы соседнего нуклеотида и т. д. (схема 1). Схема 1. Соединение нуклеотидов в молекуле ДНК. ДНК из различных источников отличаются друг от друг а по соотношению входящих в их состав азотистых оснований, то есть по нук леотидному составу, однако нуклеотидный состав всех ДНК подчиняется оп ределенным закономерностям — правилам Чаргаффа, согласно которым: 1) число молекул аденина равно числу молекул тимина; 2) число молекул гуани на равно числу молекул цитозина; 3) число молекул пуриновых оснований рав но числу молекул пиримидиновых оснований; 4) число 6-аминогрупп в молекуле ДНК равно числу 6-кетогрупп, то есть сумма ад енин + цитознн равна сумме гуанин + тимин. Записав правила Чаргаффа буквен ными обозначениями, получим следующие выражения: 1) А - Т; 2) Г - Ц; 3) А + Г = Т + Ц; 4) А + Ц = Г + Т. Эти правила сохраняют силу и в том случае, если приведенные азотисты е основания замещены их метилированными или другими производными (мино рными основаниями). Таким образом, нуклеотидный состав ДНК характеризуе тся молярным отношением (фактором специфичности) или процентом ГЦ-пар, т.е. . Величина этого показателя одинакова для ДНК различных органов и тканей одного организма и практически не отличается у разных видов живо тных и растений в пределах одного класса. Она достаточно близка у высших растений и животных (позвоночных) — от 0,55 до 0,93. У бактерий, по данным А. С. Спирина и А. Н. Белозерского, величин а фактора специфичности колеблется от 0,35 до 2,73 или от 26,8 до 74,2% ГЦ-пар. Рентгеноструктурный анализ ДНК показал, что пуриновые и пиримидиновые основания нуклеотидных остатков ДНК лежат в одной плоскости, перпендик улярной продольной оси молекулы, тогда как циклы дезоксирибозы находят ся в плоскости, почти перпендикулярной той, в которой лежат циклы основа ний. Расстояния между азотистыми основаниями отдельных нуклеотидов со ставляют 3,4 А. В соответствии с этими данными и с правилами Чаргаффа Дж. Уотсон и Ф. К рик построили модель молекулы ДНК (схема 2). Дальнейши е исследования подтвердили их правоту. Установление строения молекулы ДНК явилось крупнейшим открытием в области молекул ярной биологии . Согласно модели Уотсона - Крика, моле кула ДНК представляет собой двойную спираль, построенную из двух полину клеотидных цепочек, направленных антипараллельно, то есть если в одной ц епочке остаток фосфорной кислоты связывает отдельные нуклеотиды от 5'- к 3'-С-атомам снизу вверх, то в другой цепочке эти связи направлены сверху вн из. Каждая цепочка состоит из углеводно-фосфорного скелета, присоединен ные к углеводному компоненту азотистые основания ориентированы внутрь и соединены между собой попарно водородными связями, а именно А– с Т и Г – с Ц. Аденин с тимином соединены двумя Н-связями, тогда как гуанин с цито зином соединены еще третьей водородной связью (схема 3). Двойная спираль з акручена вправо, причем полному витку спирали соответствуют 10 пар нукле отидных остатков, занимающих расстояние в 34 А,— В-форма. В-форма устойчив а в среде с высокой влажностью (97% насыщенного пара). Вся молекула ДНК предс тавляет собой жесткий, неветвящийся линейный полимер. В условиях низкой влажности (с 76% насыщения) двойная спираль ДНК принимает А-форму, в которой полный виток спирали занимает расстояние в 28 А, причем меняется также пол ожение плоскости, в которой расположены азотистые основания, и число осн ований на полный виток (один виток содержит 11 нуклеотидов). В хроматине ДНК образует комплексы с гистонами . Такие нуклеогистоны находятся в сверхспирализованном состоянии, причем суперспираль имеет радиус 50 А и расстояние между витка ми 120 А. В хромосомах и частично в хроматине такие суперспирали дезоксириб онуклеопротеида закручены в спирали высших порядков с диам. 250 и 500 А. Молекулярный вес (масса) ДНК неодинаков и зависит от источников получени я образца ДНК. Помимо этого, даже при самых тщательных и щадящих процедур ах выделения ДНК подвергается некоторой деградации и ее молекулярный вес может быть ниже, чем в клетках. Препараты, получаемые современными методами из тканей животн ых н растений, имеют мол. вес 6-106— 10-106, однако истинный мол. вес ДНК животных и растений, как показывают методы определения мол. веса по вязкости и по дл ине молекул ( lA двуспирал ьной ДНК в В-форме соответствует 197 единицам молекулярного веса), значител ьно выше и может достигать десятков миллиардов. Таким образом. молекулы ДНК хромосом являются самыми крупными молекулами из всех известных био полимеров. Схема 2. Двойная спираль молекулы ДНК (модель Уотсона — Крика): А — аденин; Т — тимин, Г — гуанин; Ц — цитозин; Д — дсзоксирибоз а; Ф — фосфат; 34 А — величина витка, спирали; 10 А — радиус спирали; 3, 4 А — расс тояние между нуклеотидами; стрелки указывают напра вление витка спирали. Схема 3. Соединение пуриновых и пиримидиновых оснований в молекуле ДНК (точками обозначены водородные связи). У некоторых вирусов, например у бактериофагов Ф Х174, fd и М13, ДНК представлена одной полин уклеотидной цепью, замкнутой в кольцо и имеющей сравнительно небольшой мол. вес — 1,7-106. У большинства вирусов ДНК представляет собой двойную спир аль, линейную пли замкнутую в кольцо; нередко такие формы переходят друг в друга, причем эти молекулы имеют так называемые «липкие концы», содерж ащие однонитчатые комплементарные друг другу нуклеотидные последоват ельности, при помощи которых молекула замыкается в кольцо. Для ДНК харак терно сильное поглощение в ультрафиолетовой части спектра при длине во лны около 260 нм. Удельное поглоще ние высокополимерной ДНК в растворе, содержащем выше 10- 3 М NaCI , при рН 7,0 составляет около 6000 на 1 г-атом фосфора. ДНК сравнительно легко деполимеризуются под д ействием некоторых химических соединений, ультразвука, ионизирующей и ультрафиолетовой радиации; нагревание ДНК с разведенными минеральными кислотам приводит к отщеплению пуринов (аденина и гуанина) и образовани ю «апуриновой кислоты», содержащей только пиримидиновые основания. Наг ревание растворов ДНК, а также их подщелачивание и т.п. вызывают денатура цию ДНК, заключающуюся в плавлении двойной спирали (разрыве водородных и гидрофобных связей) и расхождении полинуклеотидных цепочек. Денатурац ия сопровождается понижением вязкости раствора и повышением поглощени я в ультрафиолете, по чему можно контролировать этот процесс. Температур а плавления (температура, при которой денатурирована половина ДНК) тем в ыше, чем больший процент ГЦ-пар содержится в ДНК; этот показатель может сл ужить для определения нуклеотидного состава ДНК. Установлено, что ( не линейно связана с составом ДНК: 1° соот ветствует 2,5 молярным % ГЦ-пар. Гомогенные препараты ДНК (например, вирусно й ДНК) характеризуются плавлением с резким переходом, тогда как гетероге нные препараты дают сравнительно широкую зону плавления, что может служ ить мерой гетерогенности ДНК. При быстром охлаждении после денатурации ДНК не восстанавливает своих нативных свойств, однако при медленном охл аждении полинуклеотидные цепочки реассоциируются по принципу комплем ентарности и таким образом происходит ренатурация молекул ДНК. При медл енном охлаждении денатурированной ДНК в присутствии РНК полинуклеотид ные нити ДНК и РНК могут ассоциироваться но принципу комплементарности пар гуанина с цитозином и аденина с урацилом (вместо тимина), образуя двун итчатые гибриды ДНК — РНК. Метод гибридизации широко применяется для ис следования комплементарности и структуры двух типов нуклеиновых кисло т, а также ДНК из разных источников. Изучение ренатурации ДНК показало, чт о ДНК высших организмов содержат повторяющиеся последовательности, ко торые можно разделить на очень часто повторяющиеся последовательности и относительно часто повторяющиеся. Кроме того, имеются и уникальные по следовательности. К повторяющимся последовательностям, по-видимому, от носятся регуляторные гены , а та кже гены, кодирующие рибосомные РНК, транспортные РНК и гистоны. Структу рные гены, как правило, относятся к уникальным последовательностям, что доказано для таких активных генов, как гены глобина в эритробластах и ге ны фиброина в шелкоотделительной железе шелкопряда. У низших организмо в (прокариотов) — вирусов и бактерий, а также в митохондриях ДНК не содерж ит или почти не содержит повторяющихся последовательностей. В ДНК ряда о рганизмов обнаружены участки, в каждой из нуклеотидных цепей которых им еются последовательности оснований, повторяющиеся далее, но в обратном порядке. Поскольку такие последовательности читаются одинаково с обои х концов, как, например, слово «потоп», они получили название палиндромов. Палиндромы в ДНК и в синтезированных на их матрице РНК могут образовыват ь крестообразные структуры, физиологическую роль которых, возможно, свя зана с инициацией (началом) синтеза РНК или белков. Методом молекулярной гибридизации показано, что в ядерной ДНК плодовой мушки Drosophila melanogaster около 75% всей ДНК представлено уникальными последовательностями, около 15% — очень часто (до 1 000 000 раз) повт оряющимися и около 10% — относительно часто (1000— 100 000 раз) повторяющимися нук леотидными последовательностями. Очень часто повторяющиеся последова тельности расположены главным образом в плотном хроматине, цитологиче ски описываемом как гетерохроматин; они встречаются чаще всего в так наз ываемой сателлитной ДНК, обычно отличающейся от основной массы ДНК по ну клеотидному составу и отделяемой от нее при равновесном центрифугиров ании в градиенте плотности хлористого цезия. Такие сателлиты содержатс я почти у всех эукариотов и составляют от 1% до половины всей массы генома. Даже у близкородственных видов количество сателлитной ДНК может сущес твенно отличаться. Относительно часто повторяющиеся последовательнос ти распределены между гетеро- и эухроматином. Значительная часть дезокс ирибонуклеопротеида хроматина состоит из чередующихся участков повто ряющихся и уникальных последовательностей ДНК. Заметные количества ДН К, содержащей относительно часто повторяющиеся последовательности, на ходятся также в хроматине, ассоциированном с ядрышками и кодирующем риб осомные РНК. Первичная структура ДНК трудно поддается изучению уже потому, что молек улы ДНК имеют огромные размеры. Некоторую информацию о последовательно сти нуклеотидов дает изучение пиримидиновых блоков. При обработке ДНК к онцентрированной муравьиной кислотой, содержащей дифениламин, происхо дит отщепление пуриновых оснований и дальнейший гидролиз ДНК. В молекул е сохраняются пиримидиновые последовательности, остающиеся в блоках, п редставляющих собой олигодезоксинуклеотиды, лишенные пуриновых моном еров. Такие блоки разделяют с помощью хроматографи и на изоплиты — олигомеры, содержащие одинаковое чи сло нуклеотидных остатков, затем их в свою очередь разделяют и анализиру ют. Подобным образом изучают пуриновые блоки, получаемые обработкой ДНК гидразином. Однако наибольший прогресс в изучении структуры ДНК достиг нут в результате применения дезоксирибонуклеаз, расщепляющих определе нные последовательности нуклеотидов, и в особенности рестриктаз , обладающих узкой специфичностью в отношении коротких нуклеотидных последовательностей в 6— 7 нуклеотидо в. Более детальную информацию в отношении нуклеотидной последовательн ости в молекулах ДНК, представляющих собой структурные гены, получают пу тем анализа нуклеотидной последовательности в соответствующих им РНК и белках. Удалось установить последовательность нуклеотидов в небольш их молекулах сателлитной ДНК у высших организмов, выяснена также нуклео тидная последовательность в довольно значительных участках ДНК у неко торых вирусов, бактерий и др. Метилирование азотистых оснований в составе ДНК происходит уже после синтеза молекулы и относится к так называемом постсинтетическим изменениям или модификациям. У Е. coli метилируется аден ин, находящийся как раз в той короткой последовательности нуклеотидов, к оторая «узнается» рестрикислотазой R 1. По-видимому, рестриктазы избирательно разрушают чужер одные ДНК, попадающие в бактерию, в собственной же ДНК «узнаваемые» ими п оследовательности защищены метильными группами. 4. Методы количественного и качественного определе ния и исследования Большинством цветных химических реакций ДНК обяза ны своему углеводному компоненту — дезоксирибозе . Под действием кислот ДНК легко отщепляет пуриновые основания, причем освобождается альдегидная группа дезоксирибозы. В ре зультате дальнейшего действия кислоты дезоксирибоза претерпевает пре вращения с образованием w -оксилевулиново го альдегида: ответственного, по-видимому, за образо вание окраски с реактивами на ДНК. Чаще других реакций для обнаружения и количественного определения ДНК применяют нагревание с дифениламином в концентрированной уксусной кис лоте в присутствии концентрированной серной кислоты . Эту реакцию обычно применяют в модификац ии Бертона (К. Burton ) при 30° в п рисутствии уксусного альдегида. Реже применяются менее чувствительные цветные реакции с цистеином, с триптофаном или индолом, а также с карбазо лом. Иногда применяют также цветную реакцию с ганитрофенилгидразином. В есьма чувствительным является флюориметрический метод , позволяющий определять до 3.10- 9 г Д НК. Для количественного определения ДНК необходимо ее предварительное отделение от РНК и (по возможности) от других веществ, ме шающих применяемой реакции. Для этих целей обычно пользуются методом Шм идта и Таннгаузера ( G . Schmidt , S . J . Thannhauser ) в различных модификациях. Принцип метода заключается в осаждении нукле иновых кислот вместе с белками трихлоруксусной или хлорной кислотой, от мывании кислоторастворимых фосфорных соединений, экстрагировании лип идов и извлечении нуклеиновых кислот при помощи гидролиза 5% трихлоруксу сной кислотой при 90° в течение 15— 20 мин. Белки при этом остаются в осадке; из раствора, содержащего нуклеиновые кислоты и подвергнутого гидролизу 0,3 — 1,0 н. щелочью, вызывающей распад РНК до нуклеотидов, ДНК осаждают подкис лением трихлоруксусной или хлорной кислотой. Осадок отмывают и ДНК экст рагируют горячей хлорной кислотой. Содержание ДНК определяют по фосфор у, спектрофотометрически или при помощи специфических цветных реакций, но спекислотрофотометрический метод является наиболее простым и быстр ым для определения ДНК после отделения ее от других веществ, характеризу ющихся максимумом поглощения при 260 нм. При определении нуклеотидного состава ДНК последн юю подвергают гидролизу хлорной кислотой и отщепившиеся пуриновые и пи римидиновые основания разделяют хроматографией на бумаге или на ионоо бменниках. Хорошие результаты дает также хроматография в тонком слое на производных целлюлозы и др. Пос кольку в обычных двуспиральных ДНК нуклеотидный состав подчиняется оп ределенным правилам (правила Чаргаффа), он может быть выражен в виде проц ентного содержания ГЦ-пар. Молярный процент ГЦ-пар вычисляют, используя температуру плавления ДНК (температура, при которой денатурирована пол овина ДНК), по формуле: процент ГЦ-пар = 2,44 ((°пл — 69,3°). Коэффициенты, приведенн ые в формуле, рассчитаны эмпирически и варьируют в зависимости от ионной силы, ионного состава и величины рН раствора. Хорошие результаты при опр еделении нуклеотидного состава ДНК дает метод улът рацентрифугирования в градиенте плотности хлорист ого цезия. Плавучая плотность ДНК при этом линейна связана с молярным со держанием ГЦ-пар (изменение содержания ГЦ-пар на 1% изменяет плавучую плот ность на 0,001 единицы) и определяется по уравнению: молярное содержание ГЦ-п ар = 10,2 .(р — 1,660), где р — плавучая плотность исследуемого препарата ДНК. Для ч истых препаратов ДНК нуклеотидный состав можно определить также по спе ктру поглощения в 0,1 М уксусной кисл оте по формуле, предложенной Фредериком (Е. Fredericq ). 5. Содержа ние в клетках и тканях Содержание ДНК в органах и тканях животных и человека колеблется в широк их пределах и, как правило, тем выше, чем больше клеточных ядер приходится на единицу массы ткани. Особенно много ДНК (около 2,5% сырого веса) в вилочков ой железе, состоящей главным образом из лимфоцитов с крупными ядрами. До вольно много ДНК в селезенке (0,7— 0,9%), мало (0,05— 0,08%) в мозге и мышцах, где ядерное вещество составляет значительно меньшую долю. На ранних стадиях эмбрио нального развития в этих органах содержится больше ДНК, но содержание ее уменьшается в процессе онтогенеза по мере дифференцировки. Однако коли чество ДНК на одно клеточное ядро, содержащее диплоидный набор хромосом , практически постоянно для каждого биологического вида. Соответственн о количество ДНК в ядрах половых клеток вдвое ниже. По этой же причине раз личные физиологические и патологические факторы почти не влияют на сод ержание ДНК в тканях, а при голодании, например, относительное содержани е ДНК даже возрастает за счет снижения концентрации других веществ (белк ов, углеводов, липидов, РНК). У всех млекопитающих количество ДНК в диплоид ном ядре почти одинаково и составляет около 6 1012 г, у птиц — около 2,5 10-12, у разных видов рыб, амфибий и простейших оно колеблется в значительных пределах. Содержание ДНК в бактериях довольно велико и достигает нескольких проц ентов в пересчете на сухой вес; в вирусах оно может доходить до 50%. Вместе с тем абсолютное количество ДНК в бактериальной клетке в среднем на два по рядка ниже, чем в клеточном ядре высших организмов, а в ДНК-содержащих вир усах оно ниже еще на два порядка. У бактерий одна гигантская молекула ДНК образует генофор, соответствую щий хромосоме высших организмов. Так, у кишечной палочки Escherichia coli молекулярный вес такой кольцеобразной двуспиральн ой молекулы достигает около 2,5-Ю9 и длины, превышающей 1,2 мм. Эт а огромная молекула плотно упакована в небольшой «ядерной области» бак терии и соединена с бактериальной мембраной. В хромосомах высших организмов (эукариотов) ДНК находится в комплексе с белками, главным образом гистонами; в каждой хромосоме содержится, по-ви димому, одна молекула ДНК длиной до нескольких сантиметров и молекулярн ым весом до нескольких десятков миллиардов. Такие огромные молекулы уме щаются в клеточном ядре и в митотических хромосомах длиной в несколько м икрометров. Часть ДНК остается не связанной с белками; участки несвязанн ой ДНК перемежаются с блоками ДНК, связанной с гистонами. Показано, что в т аких блоках содержится по две молекулы гистонов 4 типов: Нда, Hab , Hg и Н4. Помимо клеточного ядра, ДНК содержится в митохондри ях и в хлоропластах. Количество такой ДНК обычно невелико и составляет н ебольшую долю общей ДНК клетки. Однако в ооцитах и на ранних стадиях эмбр ионального развития животных подавляющая часть ДНК локализована в цит оплазме, главным образом в митохондриях. В каждой митохондрии содержитс я по поскольку молекул ДНК. У животных мол. вес митохондриальной ДНК сост авляет около 10-106; ее двуспиральные молекулы замкнуты в кольцо и находятся в двух основных формах: сверхскрученной и открытой кольцевой. В митохонд риях и в хлоропластах ДНК не находится в комплексе с белками, она ассоции рована с мембранами и напоминает бактериальную ДНК Небольшие количест ва ДНК обнаружены также в мембранах и некоторых других структурах клето к, однако их особенности и биологического роль остаются неясными. 6. Биосинт ез В процессе биологического синтеза ДНК на матрице аналогичной молекулы ДНК образуется такая же молекула, и количество ДНК удваивается. Поэтому процесс биосинтеза ДНК получил название редупликации или репликации . Принцип комплементарности (дополнительности), по Уотсону и Крику, заложе н в самом строении: ДНК. Дж. Уотсоном и Ф. Криком было постулировано, что репликация ДНК должна про исходить полуконсервативным способом, то есть путем раскручивания дво йной спирали и синтеза новых, комплементарных исходной полинуклеотидн ых цепочек на каждой нити. Именно этот механизм и был доказан эксперимен тально путем введения в ДНК-матрицу тяжелого азота (радиоактивной метки ) и анализа ДНК последующих поколений при помощи центрифугирования в гра диенте плотности хлористого цезия или методом авторадиографии. ДНК синтезируется из дезоксину клеозидтрифосфатов, которые соединяются в полинуклеотидную цепь с отщ еплением пирофосфата. Эта реакция протекает на матрице одноцепочечной предобразованной ДНК под действием фермента ДНК-полимеразы, причем син тезирующаяся: дезоксирибополинуклеотидная цепь дочерней ДНК строго ко мплементарна матричной цепи. ДНК-полимераза, впервые выделенная из Е. coli , хорошо изучена. Ее мол екулярный вес составляет 110 000 дальтонов, под действием трипсина она распа дается на 2 фрагмента — активный и неактивный. Для протекания реакции, ка тализируемой ДНК-полимеразой, необходимы матричная ДНК, обязательное п рисутствие всех четырех дезоксинуклеозидтрифосфатов и ионов Mg 2+. Равновесие реакции сильно с мещено в сторону синтеза, оптимальная величина рН 7,5; реакция ингибируетс я пирофосфатом: концентрация пирофосфата 2• 10- 3 М угнетает реакцию синтеза на 50%. Показано, что двуспиральная м олекула ДНК неактивна в качестве матрицы, однако для инициации репликац ии на активной матрице одноцепочечной ДНК необходим участок комплемен тарной ей полинуклеотидной цепи со свободным 3'-ОН-кон-цом рибозы, служащи й затравкой для роста вновь синтезирующейся цепи. Эта затравка состоит и з рибонуклеотидных остатков, которые удаляются по завершении синтеза к омплементарной цепи ДНК. К 3'-ОН-концу затравки ДНК-полимераза последоват ельно присоединяет дезокспрпбонуклеотидные остатки, соединяющиеся во дородными связями с комплементарными основаниями матричной цепи. Рост синтезирующейся цепи происходит в направлении 3 '-ОН — 3'-ОН-концам, антипараллельно матричной цепи. Репликац ия ДНК приводит к удвоению количества генетического материала клетки и, как правило,— к клеточному делению. Поэтому репликация происходит тем ч аще, чем короче время генерации вируса или бактерии и чем чаще делятся кл етки у высших организмов. Темп репликации высок у эмбрионов, в особеннос ти во время дробления, и замедляется по мере развития и дифференцировки. Вообще темп репликации соответствует митотической активности ткани и поэтому низок в не делящихся клетках, например в клетках мозга пли мышц, и относительно высок в часто делящихся клетках костного мозга или опухол ей. Репликация ДНК имеет место и при эндомптозах, приводящих к полиидоид изации ядер. Репликация происходит не во время собственно митоза, а в инт еркинетической фазе во время синтетического S-периода клеточного цикла между периодами gi и Ga . У бактерий и вирусов репликаци я начинается в одной точке молекулы ДНК. В каждой хромосоме высших орган измов таких точек обычно бывает по нескольку сот. В точке начала синтеза ДНК могут образоваться одна пли две репликационные вилки. В первом случа е репликация протекает в одном направлении; обычно же образуются две вил ки, которые движутся по молекуле ДНК в противоположных направлениях. 'Та кая двунаправленная репликация показана авторадиографическим методо м на кольцевых ДНК бактерий, а также у высших организмов. По мере продвиже ния репликационных вилок образуются дочерние двуспиральные молекулы Д НК, состоящие наполовину из старых цепей и наполовину из комплементарны х им новых цепей ДНК. Исследование Окадзаки ( R . Oka - zaki ) биосинтеза ДНК у бактерий показ ало, что сначала синтезируются сравнительно короткие фрагменты дезокс ирибополинуклеотидных цепей длиной до 1000 нуклеотидных остатков, которы е затем сшиваются между собой ферментом ДНК-лигазой (полинуклеотидлига зой). Одна из двух цепей ДНК при этом растет непрерывно, а другая прерывист о. Образование фрагментов Окадзаки показано и у высших организмов. Показ ано, что разъединение и раскручивание двух полинуклеотидных цепей двой ной спирали ДНК, необходимое для репликации, осуществляется при помощи о собого ДНК-связывающего белка. Репликация вирусных и нескольких кольцевых молекул ДНК имеет некоторы е особенности. Так, одноцепочечная ДНК вируса Ф Х174 сначала синтезирует на своей матрице комплементарную цепь — так называемый минус-цепь. Эта це пь замыкается в кольцо ДНК-лигазой и образует биологически активную реп ликативную форму ДНК бактериофага. А. Корнбергом эта последовательность реакций была воспроизведен а вне организма, и таким образом впервые была получена синтетическая био логически активная репликативная форма ДНК. У кольцевых молекул ДНК мит охондрий обнаружено присутствие небольшого фрагмента длиной около 450 ну клеотидных остатков, комплементарного одной («легкой») цепи двуспираль ной молекулы ДНК. Другая («тяжелая») цепь в этом участке смещается и образ ует так называемую D-петлю. Названный фрагмент служит начальным участком синтезирующейся «тяжелой» цепи ДНК, «легкая» цепь синтезируется на осв ободившейся «тяжелой» цепи исходной ДНК. Репликация происходит асимме трически в одном направлении и начинается с предобразованных фрагмент ов. В ДНК паповавирусов, например вируса SV 40 и вируса папилломы, репликация идет сразу в двух нап равлениях. У бактерий репликация, по всей вероятности, начинается в мест е прикрепления ДНК к мембране. У высших организмов ДНК хромосом также св язана с внутренней мембраной ядра, однако значение этой связи в процессе репликации пока не ясно. Помимо репликации ДНК, в организме происходит репарация ДНК, то есть вос становление поврежденных, разрушенных или измененных участков полинук леотидных цепей. Разрывы в одной из полинуклеотидных цепей ДНК, по-видим ому, репарируются под действием ДНК-лигазы. Более сложные повреждения, н апример образование димеров тимина под действием ультрафиолетовой рад иации, ликвидируются следующим об разом: поврежденный участок, содержащий димер тимина, «вырезае тся» при помощи эндонуклеазы (обычно это олигонуклеотид, три-илп тетрану клсотид), а брешь заполняется нормальным нуклеотидным блоком. В процессе репарации участвует ряд ферментов: эндо-, экзо-1 и экзо-11 нуклсазы и ДНК-пол имераза. Расшифровка механизмов повреждения и репарации ДНК несомненн о приведет к более эффективной профилактике и терапии болезней, вызванн ых радиационными и химическими мутагенами. При изучении мутанта Е. coli , чувствительного к ультрафиолетовому облучению, выяснилось, ч то он дефектен и в отношении ДНК-полимеразы. Однако у этого мутанта (Ро1А~) п родолжалась репликация ДНК. На этом основании возникло предположение, ч то описанная А. Корнбергом полимераза участвует в репарации и не участву ет в репликации. Вскоре из мутанта Ро1А" была выделена другая ДНК-полимера за, сходная по механизму действия с ранее известной, но отличная от нее по некоторым свойствам. ДНК-полимеразу II стали считать ответственной за ре пликацию. Затем была выделена ДНК-полимераза III, по своим свойствам напоми нающая ДН1-?-полимеразу I. Таким образом, обнаружено три ДНК-полпмеразы, при чем, по-видимому, для репликации необходима именно ДНК-полимераза III. В онкогенных РНК-содержащих вирусах (онкорнавирусах) обнаружен фермент, катализирующий синтез комплементарной цепи ДНК на матрице, то есть проц есс, обратный процессу переноса информации от ДНК к РНК. Этот фермент пол учил название «РНК-зависимая ДНК-полимераза» или «обратная транскрипт аза». Открытие этого фермента означало успех науки о злокачественных оп ухолях — онкологии. Ранее было установлено, что при злокачественном пер ерождении клеток под действием онкогенных вирусов происходит включени е ДНК вируса в хромосому клетки хозяина. Однако из этой закономерности в ыпадали РНК-содержащие онкогенные вирусы. Оказалось, что они содержат об ратную транскриптазу, которая сразу после заражения по вирусной РНК син тезировала вирусную ДНК, которая и внедрялась в хромосому клетки хозяин а. В ряде случаев, например в ооцитах для рибосомной ДНК, имеет место амплиф икация (умножение) определенных участков ДНК. Механизм амплификации не с овсем ясен; по-видимому, происходит репликация отдельных участков ДНК, с одержащих цистроны тех РНК, которые усиленно синтезируются в данных усл овиях. Катаболизм ДНК не представляет каких-либо особенностей. В кишечном трак те и в тканях ДНК гидролизуются под действием дезоксирибонуклеаз; образ овавшиеся нуклеотиды гидролизуются нуклеотидазами, а образующиеся пур иновые и пиримидиновые основания и сахара расщепляются обычными путям и. 7. Биологи ческая роль Цитогенетические исследования в 20— 30-х гг. 20 в. свидетельствовали о том, чт о передача и хранение наследственных признаков связаны с хромосомами , находящимися в ядерном веще стве. То, что наследственным веществом является именно ДНК, а не белок, ста ло ясным в результате исследований, проведенных в 40-х гг. 20 в. на бактериях и бактериофагах (см. Ген). В 1944 г. Эйвери, Ма к-Лауд и Мак-Карти (О. Т. Avery , С. М. Мас- Leod , М. McCarty ) установили природу трансформи рующего фактора у бактерий. Им оказалась ДНК. Процесс трансформации состоит, несомненно, из ряд а стадий: обратимой сорбции молекул ДНК бактериальной клеткой; внедрени я этих молекул внутрь клетки; интеграции молекулы чужой ДНК в хромосому клетки, расщепления образовавшейся сложной структуры и ее перехода в ре комбинанты . При исследовании бактериальных вирусов под электр онным микроскопом пли при помощи радиоактивной метки, вводимой в белок и ли в ДНК бактериофага, было показано, что вирус, фиксируясь на поверхност и бактериальной клетки, вводит в нее только молекулу ДНК, оставляя снару жи свою белковую оболочку. Молекула ДНК вируса, попавшая в клетку, несуща я в себе всю наследственную информацию (геном) вируса, вызывает образова ние в клетке новых вирусных частиц, их размножение и гибель клетки от лиз иса. Некоторые, так называемые умеренные, фаги у части бактериальных клеток н е вызывают явных признаков заражения, однако их ДНК, попадая в клетку, про чно связывается с геномом самой бактерии, интегрируясь с ДНК бактериаль ной клетки. Многие поколения таких бактерий несут в себе бактериофаг в с крытом виде, не проявляя признаков нарушения жизнедеятельности. Однако при неблагоприятных условиях и при действии каких-либо повреждающих фа кторов, например ионизирующей или ультрафиолетовой радиации, вирус в та ких бактериях начинает размножаться и вызывает лизис (гибель) бактерий . ДНК вируса настолько прочно св язывается с ДНК бактерий, что заражение вирусом, полученным от лизогенны х бактерий, сопровождается переносом вместе с ДНК вируса части ДНК бакте рий, с которой передаются некоторые наследственные свойства этих бакте рий, отсутствующие и у вновь заражаемых бактерий, и у самого вируса. Это яв ление, сходное с трансформацией, получило название трансдукции . Последовательность нуклоотидов в цепи ДНК переписывается в комплемент арную ей последовательность нуклеотидов в молекуле РНК — так называем ая транскрипция . Процесс этот о существляется при участии фермента РНК-полимеразы. Генетическая инфор мация, переписанная с ДНК на РНК, в конечном счете определяет первичную с труктуру (последовательность аминокислотных остатков в строящейся мо лекуле белка). При помощи электронной микроскопии удалось увидеть рост ц епей РНК на матрице ДНК, то есть работу гена на уровне транскрипции. В процессе реализации или выражения генов имеет место кодирование гене тической информации. Показано, что три последовательно расположенных н уклеотидных остатка (триплет) в цепи ДНК кодируют комплементарный трипл ет в цепи РНК, который в свою очередь контролирует включение одной, строг о определенной аминокислоты в полипептидную цепь синтезирующегося бел ка. Установлено, что полипептидная цепь синтезируется колинеарно с ДНК, то есть в соответствии с линейным расположением триплетов ДНК. Известно , какие именно триплеты кодируют включение каждой аминокислоты . Последовательность нуклеотидов ДНК, кодирующая об разование определенной полипептидной цепи, представляет собой структу рный ген, или цистрон. Изменение даже одной пары нуклеотидов в цистроне (т очковая мутация) может привести к изменению структуры белка и потере им биологического активности. Такие точковые мутации могут представлять собой транзиции (замену пары нуклеотндов ГЦ на AT или наоборот), трансверсии (замен а AT на ТА или ГЦ на Ц Г, то е сть перемещение комплементарных оснований из одной цепи в другую), встав ки пары нуклеотидов или их делецию (выпадение). Трансверсии и транзиции п риводят обычно к замене одной аминокислоты в строящейся полипептидной цепи, тогда как вставки и делении вызывают изменение порядка считывания и приводят к глубокому нарушению структуры белка. Вставка же или делеция сразу трех пар нуклеотидов, то есть целого триплета, восстанавливает по следовательность считывания, что и послужило одним из важнейших доказа тельств триплетности кода. У высших организмов количество ДНК на геном достаточно для кодирования миллионов белков. В действительности число генов у человека и высших жив отных по крайней мере на порядок ниже и находится, по-видимому, между 10 000 и 100 000. Огромное количество избыточной ДНК, таким образом, не несет структур ных генов и выполняет иные функции. Оказалось, что часть ДНК вообще не уча ствует в процессе транскрипции, а преобладающая часть РНК, синтезирован ной на матрице ДНК у высших организмов, претерпевает распад внутри клето чного ядра, не участвуя в синтезе клеточных белков. В связи с этим Г.П. Георгиевым была высказана гипотез а, согласно которой оперон (последовательность генов, контролирующих си нтез ферментов, участвующих в катализе всех этапов одного и того же проц есса) у высших организмов содержит большое число регуляторных генов, рас положенных в начале считывания. Синтезирующаяся на таком опероне гиган тская молекула РНК распадается в процессе ее переноса в цитоплазму, куда поступает только собственно информационная РНК, содержащая структурн ые гены и кодирующая синтез клеточных белков. Остальная часть этой РНК и меет регуляторные функции и распадается внутри ядра. Особенностью высших организмов является также дифференцировка клеток и тканей. Гены, содержащиеся в ДНК каждой диплоидной клетки одного и того же организма (геном), качественно и количественно совершенно одинаковы, однако тот факт, что разные ткани и клетки резко различны по своему соста ву, строению и функциям, объясняется тем, что в них синтезируются неодина ковые белки. Таким образом, помимо регуляции активности действующих ген ов, при дифференцировке имеет место выключение или блокирование больше й части генов, причем обычно активной остается небольшая часть генома, а в некоторых случаях синтезируется лишь один или несколько белков, напри мер синтез гемоглобина в ретикулоцитах. Механизмы диффе-ронцпровкп во м ногом не ясны, однако показано, что белки, входящие в состав дезокснрибон уклеопро-теидов хроматина , ока зывают выраженное действие на транскрипцию. Гистоны подавляют этот про цесс, а кислые белки могут активировать его. Неактивные участки хроматин а цитологически представляются более плотными, а в процессе транскрипц ии, напротив, хроматин выглядит более рыхлым и нити ДНК, по-видимому, части чно отделяются от гистонов. Различными методами показано, что транскрип ция ДНК происходит в разрыхленных участках хроматина, в так называемых п уфах, представляющих собой вздутие хромосом в области действующих гено в. 8. Гистохи мические методы обнаружения в тканях В основе гистохимических методов выявления нуклоиновых кислот лежат р еакции на все компоненты, входящие в их состав. В растущих тканях происхо дит быстрое обновление пуринов, пиримидинов, фосфорных соединений и Сах аров. Этим пользуются для избирательного выявления в них ДНК авторадпог рафическим методом с помощью 3Н-тимпдпна. ДНК образует соли с щелочнозем ельными и тяжелыми металлами. Остатки фосфорной кислоты, которые обычно связаны с ядерными белками (чаще всего гистонами), при вытеснении послед них легко вступают в химические реакции с основными красителями. Для это го могут быть использованы сафранин О, янус зеленый В, толуидиновый сини й, тионин, азур А и не которые другие красители, разведенные растворы кото рых в уксусной кислоте избирательно окрашивают хроматин. Для количеств енного гистохимические определения ДНК рекомендуется метод с применен ием галлоцианин-хромосовых квасцов, который обладает двумя ценными кач ествами. Галлоцианинхромовые квасцы дают устойчивую окраску, которая н е меняется при обезвоживании и просветлении срезов в ксилоле. Окрашиван ие можно проводить при любом значении рН от 0,8 до 4,3, однако рекомендуется р аботать при оптимальном значении рН для этого красителя — 1,64, так как при нем происходит максимальное специфическое выявление ДНК. При окрашива нии галлопианинхромовыми квасцами ДНК соединяется с красителем в стех иометрическом соотношении, причем отношение краситель: ДНК составляет 1:3,7. Наиболее распространенной реакцией на ДНК считается реакция Фейльгена . Она проводится после мягкого гидролиза предварительно фиксированной ткани в 1 и. НС1 при 60°, в результате чего от дезоксирибозофосфата отщепляют ся пурины, а затем и ппрпмпдины, освобождая тем самым реакционноспособны е альдегидные группы, которые реактивом Шиффа окрашиваются в красный цв ет. Время гидролиза зависит от природы объекта и метода фиксации. Для пол учения хороших результатов необходимо в каждом отдельном случае время гидролиза подбирать экспериментально. Для проверки специфичности реакции Фейльгена существует метод фермент ативного и кислотного экстрагирования ДНК. Ферментативное расщепление ДНК проводят дезоксирибонукдеазой при концентрации ферментного препа рата 2 мг на 100 мл 0,01 М трисбуфера рН 7,6; раствор перед употреблением разводят диетической в одой в соотношении 1:5. Рекомендуется инкубировать срезы при 37° в течение 2 ч ас. Другим способом удаления ДНК служит обработка гистохимических преп аратов 5% водным раствором трихлоруксуснои кислоты в течение 15 мин. при 90° и ли 10% горячей (70°) хлорной кислотой в течение 20 мин., после чего реакция Фейль гена должна дать отрицательные результаты. Заключение Молекула ДНК – очень длинная двойная цепочка, спира льно закрученная вокруг своей продольной оси. Длина ее во многие сотни р аз превышает длину цепочки белковой молекулы. Каждая одинарная цепочка представляет собой полимер и состоит из отдельных соединенных между со бой мономеров – нуклеотидов. В состав любого нуклеотида входят два пост оянных химических компонентов (фосфорная кислота и углевод дезоксириб оза) и один переменный, который может быть представлен одним из четырех а зотистых оснований: аденином, гуанином, тимином или цитозином. Поэтому в молекулах ДНК всего четыре разных нуклеотида. Разнообразие же молекул Д НК огромно и достигается благодаря различной последовательности нукле отидов в цепочке ДНК. Две цепи ДНК соединены в одну молекулу азотистыми основаниями. При этом аденин соединяется только с тимином, а гуанин – с цитозином. В связи с эти м последовательность нуклеотидов в одной цепочке жестко определяет по следовательность их и в другой цепочке. Строгое соответствие нуклеотид ов друг другу в парных цепочках молекулы ДНК получило название комплеме нтарности. Это свойство лежит в основе образования новых молекул ДНК на базе исходной молекулы. Редупликация сводится к тому, что под действием специального фермента и сходная двойная цепочка молекулы ДНК постепенно распадается на две оди наковые – и тут же к каждой из них по принципу химического сродства (аден ин к тимину, гуанин к цитозину) присоединяются свободные нуклеотиды. Так восстанавливается двойная спираль ДНК. Но теперь таких двойных молекул еще две. Поэтому синтез ДНК и получил название редупликации (удвоения): ка ждая молекула ДНК как бы сама себя удваивает. Роль ДНК заключается в хран ении, воспроизведении и передаче из поколения в поколение наследственн ой информации. Литература 1. Ашмарин И.П. Молекулярная би ология, М., 2004 ; 2. Бреслер С.Е. Молекулярная биологи я, СП-Б ., 2003 , 3. Георгиев Г.П. О структуре единиц т ранскрипции в клетках эукариотов, Усл. биологического химии, под ред. Б. Н. Степаненко, т. 14, с. 3, М., 2003 , 4. Дэвилсон Дж. Биохимия нуклеиновы х кислот, пер. с англ., М., 2006 : 5. Клеточное ядро, Морфотогия, физио логия, биохимия, под ред. И. Б. Збарского и Г. П. Георгиева, М., 2002 ; 6. Лилли Р. Д. Патологическая техника и практическая гистохимия, пер. с англ., М., 1969, 7. Методы исследования нуклеиновых кислот, пер. с англ., под ред. А. Н. Белозерского, М., 2000 ; 8. Пирс Э. Гисточимия, пер. с англ., М., 1962: 9. Строение ДНК и положение организ мов в системе, под ред. А. Н. Белозерского и А. С. Антонова, М., 2002 ; 10. Уотсон Дж. Молекулярная биология гена, пер. с англ., М., 1967; 11. Химия и биохимия нуклеиновых кис лот, под ред. И. Б. Збарского и С.С. Дебова, Л., 1968;
1Архитектура и строительство
2Астрономия, авиация, космонавтика
 
3Безопасность жизнедеятельности
4Биология
 
5Военная кафедра, гражданская оборона
 
6География, экономическая география
7Геология и геодезия
8Государственное регулирование и налоги
 
9Естествознание
 
10Журналистика
 
11Законодательство и право
12Адвокатура
13Административное право
14Арбитражное процессуальное право
15Банковское право
16Государство и право
17Гражданское право и процесс
18Жилищное право
19Законодательство зарубежных стран
20Земельное право
21Конституционное право
22Конституционное право зарубежных стран
23Международное право
24Муниципальное право
25Налоговое право
26Римское право
27Семейное право
28Таможенное право
29Трудовое право
30Уголовное право и процесс
31Финансовое право
32Хозяйственное право
33Экологическое право
34Юриспруденция
 
35Иностранные языки
36Информатика, информационные технологии
37Базы данных
38Компьютерные сети
39Программирование
40Искусство и культура
41Краеведение
42Культурология
43Музыка
44История
45Биографии
46Историческая личность
47Литература
 
48Маркетинг и реклама
49Математика
50Медицина и здоровье
51Менеджмент
52Антикризисное управление
53Делопроизводство и документооборот
54Логистика
 
55Педагогика
56Политология
57Правоохранительные органы
58Криминалистика и криминология
59Прочее
60Психология
61Юридическая психология
 
62Радиоэлектроника
63Религия
 
64Сельское хозяйство и землепользование
65Социология
66Страхование
 
67Технологии
68Материаловедение
69Машиностроение
70Металлургия
71Транспорт
72Туризм
 
73Физика
74Физкультура и спорт
75Философия
 
76Химия
 
77Экология, охрана природы
78Экономика и финансы
79Анализ хозяйственной деятельности
80Банковское дело и кредитование
81Биржевое дело
82Бухгалтерский учет и аудит
83История экономических учений
84Международные отношения
85Предпринимательство, бизнес, микроэкономика
86Финансы
87Ценные бумаги и фондовый рынок
88Экономика предприятия
89Экономико-математическое моделирование
90Экономическая теория

 Анекдоты - это почти как рефераты, только короткие и смешные Следующий
Марсоход, который бурит и сверлит лазером чужую планету, послали американцы. А предупреждение оттуда, чтоб больше так не делали, прислали, почему-то, нам в Челябинск.
Anekdot.ru

Узнайте стоимость курсовой, диплома, реферата на заказ.

Обратите внимание, реферат по биологии "ДНК. Основы генетического материал", также как и все другие рефераты, курсовые, дипломные и другие работы вы можете скачать бесплатно.

Смотрите также:


Банк рефератов - РефератБанк.ру
© РефератБанк, 2002 - 2016
Рейтинг@Mail.ru