Реферат: Хроматографические методы - текст реферата. Скачать бесплатно.
Банк рефератов, курсовых и дипломных работ. Много и бесплатно. # | Правила оформления работ | Добавить в избранное
 
 
   
Меню Меню Меню Меню Меню
   
Napishem.com Napishem.com Napishem.com

Реферат

Хроматографические методы

Банк рефератов / Химия

Рубрики  Рубрики реферат банка

закрыть
Категория: Реферат
Язык реферата: Русский
Дата добавления:   
 
Скачать
Microsoft Word, 168 kb, скачать бесплатно
Заказать
Узнать стоимость написания уникального реферата

Узнайте стоимость написания уникальной работы

10 Введение Хроматографический метод – физико-химический метод разделения компонентов сложных смесей газов, паров, жидкостей или раств оренных веществ, основанный на использовании сорбционных процессов в д инамических условиях . ОБРАЩЕННО-ФАЗОВАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ (ОФХ, RP ) Сорбенты Химически привитые впервые были применены в колоночной жидкостной хро матографии для получения гидрофобных распределительных систем . Поскольку в таких системах происходит «о бращение» свойств фаз, т.е. неподвижн ая фаза становиться неполярной, а подвижная – полярной, то они получили название обращенно-фазовых систем . Получают ОФ модифицированием поверхностных силанольных групп алкилхл орсиланами . Осуществить модифициро вание всех поверхностных силанольных групп не представляется возможны м (50% ). Вместо монохлорсиланов применя ют дихлорсиланы, однако, тогда не все хлорные группы могут прореагироват ь . Чтобы улучшить степень модифицир ованности колонки и избавиться от хлор групп колонку обрабатывают силь ным силанизирующим агентом - тримет илхлорсиланом . При такой обработке удается повысить спепень модификации силикагеля до 90% . Воспроизводимость величины степени покрытия поверхн ости остается хорошей до тех пор, пока используется одна и та же партия си ликагеля . Поэтому ОФ колонки отлича ются от партии к партии и от производителя к производителю . Влияние привитых алкильных групп отражает термин «гидрофобная селекти вность» . В первом приближении коэфф ициент емкости для данного разделяемого соединения увеличивается с ув еличением связанного углерода на единицу объема колонки . Максимальное удерживание обеспечивает при витая октадецильная группа . Такие н еподвижные фазы предпочтительны, если растворимость разделяемых вещес тв в водном элюенте ограничена . С18 ха рактеризуется также высокой селективностью при разделении соседних чл енов гомологических рядов . В тоже вр емя для разделения соединений, молекулы которых имеют большой размер, вы сокую гидрофобность и ограниченную растворимость в элюенте с высоким с одержанием органических добавок, рекомендуется фаза с короткими приви тыми цепями . Растворители . Элюотропный ряд обращается, наиболее часто используются растворители ацетонитрил, метанол, тетрагидрофуран, вода . Коэффициент емкости увеличивается с увеличением содержания воды в элю енте . Выбор растворителя определяет ся растворимостью в нем вещества . С у величение содержания органического компонента на 10% К уменьшается в три раза . Изменить относительное удерживание при элюировании водно-метанольным и растворами можно, добавляя в элюент второй органический компонент, нап ример ТГФ . На обращенной фазе сорбир уется неполярный компонент элюента и свойства получаемой фазы отличаю тся от исходной . Если соединение диссоциирует на ионы, то у пиков на хроматограмме образу ются образуются хвосты . Поэтому для лучшей формы пика при анализе кислотных соединений в элюент добавляют н е более 1% кислоты, а для основных соединений – триэтиламин или соли . Влияние структуры на удерживание . В первом приближении можно принять, что удерживание возрастает с уменьш ением растворимости соединения в воде, т.е. с уменьшением полярности . В гомологических рядах прибавление каждой метиленовой группы увеличив ает время удерживания . Разветвленны е раньше выходят, чем линейные . Насыш щенные раньше, чем ненасыщенные Сравним адсорбционную и ОФ хроматографии . Равновесие в ОФ устанавливается быстрее, поэтому более приемлемые усло вия для проведения градиентного элюирования . Возможность применения водных элюэнтов и анализировать вещества, расв оренные в воде . Срок службы колонок с привитыми фазами гораздо больше, чем у силикагельн ых колонок . Многообразие модифицирующих реагентов по сравнению с адсорбционной хр оматографией . Вторичные равновесия на обращенной фазе . Для разделения диссоциирующих соединений, кроме этого молекула должна быть не очень большой (например как аминокислоты, алкалоиды и т.д.), а соединение, выбранное в качестве против оиона должно обладать длинной насыщенной алкильной цепью ( от четырех до десяти атомов углерода в цепоч ки ) В основу ион-парной хроматографии положены принципы классической экст нракции из водной в органическую фазу ионных веществ в виде ион-парных с оединений . В водных элюентах против оионы и ионы разделяемых соединений образуют диссоциирующие ионные па ры ( в подвижной фазе ), которые селективно удерживаются на неподви жной фазе и в результате разделяются . Если противоионы адсорбируются на неподвижной фазе, ионы разд еляемых соединений взаимодействуют с ними, удерживаются и соответстве нно разделяются . Например, соединен ие, имеющее кислотную группу, будет сорбироваться в виде ионной пары с те трабутиламмониевым ионом на сорбенте . В результате станет возможным увеличить удерживание анализир уемого соединения . Состав подвижной фазы, тип противоиона, рН, ионная сила элюента – варьир ование этих параметров позволяет проводить оптимизацию условий раздел ения . ГЕЛЬ-ПРОНИКАЮЩИЯ ХРОМАТОГРАФИЯ ГПХ имеет в своей основе единый механизм разделения . В отсутствии спец взаимодействий пр обы и неподвижной фазы порядок элюирования во всех случаях является фун кцией размера молекул . Для синтетич еских неразветвленных полимеров, существующих в растворе в виде статис тического клубка, размеры молекул можно непосредственно связать с моле кулярной массой . Это позволяет отка либровать колонку при помощи полистирольных стандартов, элюируя их дих лорметаном, а затем проводить на этой колонке разделение белков или водо растворимых полимеров, элюируя их водой или водными буферными раствора ми . Мертвый объем в ГПХ определяется ка к объем элюирования молекул низкомолекулярного вещества, не взаимодей ствующего с сорбентаом, но проникающем во все поры, включая поры наимень шего диаметра . Мертвый объем склады вается из объема неподвижной фазы и объема пор . Объем неподвижной фазы определяется как удерживаемый объе м полностью исключенных молекул с большой средней молекулярной массой не проникающих в поры . Сорбенты . Устойчивость к химическим взаимодействиям, температуре и механическим воздействиям . Широкие возможности варьирования проницаемости . Однородная структура . Не должны вступать в адсорбционные взаимодействия . Сефадексы . Полиакриламидные гели, а гарозные гели, полистиролы, силикатные сорбенты . Растворители . Должны растворять образец Смачивать сорбент недопускать адсорбции полимера на сорбенте . ТГФ – универсальный растворитель, Толуол – полиизопрены, силиконы, ДМФА – полиамиды, Водные буферные растворы – белки . Оптимизация условий разделения . Определить ММР для колонки по стандартному набору полистеролов и выбра ть подходящую колонку или несколько колонок . Исключить ионные взаимодействия образца путем введения нейтр альных солей в элюент . ИОНООБМЕННАЯ ХРОМА ТОГРАФИЯ Иониты представляют собой нерастворимые ВМС, содержа щие способные к ионизации функциональные группы и дающие с ионами проти воположного заряда нерастворимые соли . Уже давно известны неорганические иониты, для смягчения воды, и только с появлением синтетических органических ионитов процессы ионн ого обмена стали широко использоваться . В зависимости от характера ионизирующих групп иониты подразделяют на к атиониты и аниониты . Катиониты явля ются поливалентными нерастворимыми кислотами, образующими нераствори мые соли с катионами или обменивающими один катион на другой . Анионтиты представляют собой органические поливалентные основания, связывающие анионы . Катионит-SO3H+ + NH4+ - Катионит-SO3NH4++ H+ Катионит -SO3NH4+ + Na+ - Катионит -SO3Na+ + NH4+ Анионит – NH+3 OH - + CH3COO - Анионит – NH+3CH3COO - + OH- Анионит – NH+3CH3COO - + H+CL - Анионит – NH+3CL - + CH3COO-H+ В качестве ионизирующихся групп катиониты могут имет ь ароматические сульфогруппы, фосфатные, карбоксильные группы или аром атический гидроксил . Если в ионите п рисутствуют ионизирующие группы нескольких типов (полифункциональные ), то это не всегда благоприятно сказы вается на процессе разделения . Наиб олее часто применяются монофункциональные иониты . Способность ионита связывать ионы с противоположным знаком зависит от числа ионизирующихся групп . Емкость ионитов обычно выражают в виде числа миллиэквивал ентов на 1гр сухого или на 1гр влажного ионита . Cтепень сшивания является одной из важных характеристик ионитов . При увеличении степени сшивания ионита и оны в него проникают труднее, равновесие устанавливается медленнее, изб ирательность повышается, а сопсобность связывать большие ионы уменьша ется . Скорость установления равнове сия при хроматографии на ионите в значительной мере зависит от размеров частиц . Равновесие устанавливается быстрее в случае относительно небольших частиц, но вместе с тем на них си льнее проявляется нежелательная адсорбция, которая изменяет форму зон разделяемых веществ . Степень связывания различных ионов ионитами в водных растворах можно о ценить при помощи следующего правила . В случае катионитов сродство возрастает с увеличением валент ности иона или при данной валентности с повышением его атомного (молекул ярного ) веса . В случае анионитов сродство прямо пропорционально силе ил и основности кислот . В качестве элюентов используются буферные растворы, а чтобы исключить н ежелательные гидрофобные взаимодействия в элюент добавляют метанол ил и ацетонитрил (не более 5% ). Оптимизация условий разделения . Изменение рН . Повышение ионной силы . Изменение температуры . Изменение состава буферного раствора . РАСПРЕДЕЛИТЕЛЬНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ При распределительной хроматографии разделение осу ществляется главным образом за счет коэффициентов распределения разде ляемых веществ . Согласно закону Нер нста, для определенного вещества и определенной системы фаз коэффициен т распределения есть величина постоянная, не зависящая от концентрации вещества . Однако, воспроизводимость распределительной хроматографии сильно зависит от концентрации раств оренного вещества . При низких конце нтрациях этим обстоятельством можно пренебречь, но при более высоких ко нцентрациях закон Нернста не соблюдается (см . теория экстракции + Кейл стр .4 43-452 ). Для получения распределительных систем с полярными твердыми фазами (на пример, силикагель ) рекомендуются т ройные смеси растворителей, состоящие из неполярного элюента (например, гептана, дихлорметана ), сильнополяр ного компонента (обычно воды ) и низко молекулярного спирта или другого растворителя, смешивающегося и с водо й, и с неполярным компонентом . При под боре системы растворителей жидкую фазу можно удалить промыванием коло нки, например, дихлорметаном . После э того колонка пригодна для нанесения новой неподвижной фазы . Для достижения оптимального разделения необходимо, чтобы разделяемые вещества лучше растворялись в неподвижной фазе . Вещества с коэффициентом распределения, близким к единице, при распределительной вымываются с фронтом подвижной фазы . Гидрофильные вещества лучше разделяются пр и использовании гидрофильных сорбентов (силикагель, крахмал, целлюлоза ), а для разделения гидрофобных вещес тв можно воспользоваться сорбентами для ОФ хроматографии . АФФИННАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ Макромолекулы БАС отличаются внутри своих индивидуа льных групп по физико-химическим свойствам незначительно . Одним из наиболее характерных свойств БАС я вляется способность обратимо связывать другие вещества, называемые в о бщем случае лигандами или аффинными лигандами (аффинатами ). Например, фермент – ингибитор, антиген – ан титело . Именно эта способность служ ит основой для аффинной хроматограф ии . Выбор аффинных лигандов осуществляется на основании их биологической природы и биологических свойств разделяемых соединений . Состав элюента подбирается таким образом, ч тобы образующийся комплекс, например фермент – ингибитор, на первом эта пе элюирования не разрушался, а балластные вещества легко элюировались . Затем, состав элюента меняют таким о бразом, чтобы разрушить образовавшийся комплекс . Состав элюетна, рН ионная сила также зависят от биологичес кой природы выделяемого соединения . Требования к носителям . Стерическая доступность . Образование комплекса БАС с лигандо м, который ковалентно связан с матрицей требует достаточного пространс тва . Поэтому одно из выжнейших свойс тв носителей – высокая пористость . Однако, пористость не играет роли при хроматографии полисом, рибосом, ин тактных клеток . В этом случае все вза имодействия происходят с поверхностными группами сорбента . Конформация присоединенного лиганда . Высокая реакционная способность специфических субстратов обусловлен а наиболее благоприятной конфигурацией групп субстрата . Поэтому способы привязки лиганда ограничен ы, т. к. лиганд должен быть привязан то й частью молекулы, которая не принимает участия в связывании . Концентрация БАС, время уравновешивания, скорость потока . Наносить следует разбавленные растворы БАС, т. к. то связано с диффузией в поры, стерическими затруднениями . Процесс аффинной хроматографии – п роцесс медленный, т. к. необходимо нек оторое время для образования комплекса . Поэтому уменьшение числа теоретических тарелок приводит к ув еличению эффективности . Иногда пото к элюента останавливают на несколько часов и только потом начинают спец ифическое элюирование . Неспецифические влияния . Неспецифическая сорбция балластных веществ возможна вследствие ионно го обмена или гидрофобных взаимодействий .
1Архитектура и строительство
2Астрономия, авиация, космонавтика
 
3Безопасность жизнедеятельности
4Биология
 
5Военная кафедра, гражданская оборона
 
6География, экономическая география
7Геология и геодезия
8Государственное регулирование и налоги
 
9Естествознание
 
10Журналистика
 
11Законодательство и право
12Адвокатура
13Административное право
14Арбитражное процессуальное право
15Банковское право
16Государство и право
17Гражданское право и процесс
18Жилищное право
19Законодательство зарубежных стран
20Земельное право
21Конституционное право
22Конституционное право зарубежных стран
23Международное право
24Муниципальное право
25Налоговое право
26Римское право
27Семейное право
28Таможенное право
29Трудовое право
30Уголовное право и процесс
31Финансовое право
32Хозяйственное право
33Экологическое право
34Юриспруденция
 
35Иностранные языки
36Информатика, информационные технологии
37Базы данных
38Компьютерные сети
39Программирование
40Искусство и культура
41Краеведение
42Культурология
43Музыка
44История
45Биографии
46Историческая личность
47Литература
 
48Маркетинг и реклама
49Математика
50Медицина и здоровье
51Менеджмент
52Антикризисное управление
53Делопроизводство и документооборот
54Логистика
 
55Педагогика
56Политология
57Правоохранительные органы
58Криминалистика и криминология
59Прочее
60Психология
61Юридическая психология
 
62Радиоэлектроника
63Религия
 
64Сельское хозяйство и землепользование
65Социология
66Страхование
 
67Технологии
68Материаловедение
69Машиностроение
70Металлургия
71Транспорт
72Туризм
 
73Физика
74Физкультура и спорт
75Философия
 
76Химия
 
77Экология, охрана природы
78Экономика и финансы
79Анализ хозяйственной деятельности
80Банковское дело и кредитование
81Биржевое дело
82Бухгалтерский учет и аудит
83История экономических учений
84Международные отношения
85Предпринимательство, бизнес, микроэкономика
86Финансы
87Ценные бумаги и фондовый рынок
88Экономика предприятия
89Экономико-математическое моделирование
90Экономическая теория

 Анекдоты - это почти как рефераты, только короткие и смешные Следующий
Жена - как помеха справа: ей всегда надо уступать.
Anekdot.ru

Узнайте стоимость курсовой, диплома, реферата на заказ.

Банк рефератов - РефератБанк.ру
© РефератБанк, 2002 - 2016
Рейтинг@Mail.ru