Курсовая: Содержание аскорбиновой, дегидроаскорбиновой и дикетогулоновой кислот в эритроцитах здоровых детей и страдающих инсулинзависимым сахарным диабетом - текст курсовой. Скачать бесплатно.
Банк рефератов, курсовых и дипломных работ. Много и бесплатно. # | Правила оформления работ | Добавить в избранное
 
 
   
Меню Меню Меню Меню Меню
   
Napishem.com Napishem.com Napishem.com

Курсовая

Содержание аскорбиновой, дегидроаскорбиновой и дикетогулоновой кислот в эритроцитах здоровых детей и страдающих инсулинзависимым сахарным диабетом

Банк рефератов / Биология

Рубрики  Рубрики реферат банка

закрыть
Категория: Курсовая работа
Язык курсовой: Русский
Дата добавления:   
 
Скачать
Microsoft Word, 1273 kb, скачать бесплатно
Заказать
Узнать стоимость написания уникальной курсовой работы

Узнайте стоимость написания уникальной работы

оглавление Введение 2 ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 3 1.1.б иохимические процессы при созревании и старении эритроцитов 3 1.1.1. Характеристика эритроцитов 3 1.1.2. Энергетический обмен в эритроцитах 5 1.1.3. Антиоксидантная система эритроцитов 6 1.2. Аскорбат как компонент АОС эритроцитов 8 1.2.1. Строение и физико-химические свойства аскорбата 8 1.3. Сахарный диабет как один из распространёенных патологических процессов 9 ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ 11 2.1. Подготовка эритроцитов 11 2.2. Метод раздельного определения аскорбиновой , дегидроаскорбиновой и дикетогулоновой кислот в эритроцитах 11 2.3. СТАТИСТИЧЕСКАЯ ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ 13 Г лава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ 14 ВЫВОДЫ 15 литература 16 SUMMARY 19 Приложение 20 Введение Зрелые эритроциты млекопитающих – это высокоспециализированные безъяде р ные клетки . Основной функцией эритроцитов является транспорт кислорода от клетки к тканям и углекислоты в обратном направлении . Высокие концентрации кислород а и процессы оксигенации – деоксигенации гемоглобина обуславливают образование в ы сокореакционных интермедиатов кислорода , вызывающих нарушение нормального функционирования клетки . Существует антиоксидантная система защиты клетки от свободнорадикального оки сления . В её состав входит ряд ферментов и небелковых веществ . Важную роль в антиоксидантной системе играет вещество небелковой пр и роды – аскорбат . Он обладает широким спектром антиоксидантных свойств , в частн о сти , только аскорбат достаточно реакционноспо собен для эффективного ингибиров а ния инициации перекисного окисления липидов . Аскорбат блокирует поглощение кислорода и образование перекиси водорода ; присутствие аскорбата в клетках оказ ы вает защитное действие на гемоглобин , препятствуя его окислению . Аск орбат в ходе выполнения своих биохимических функций обратимо переходит в окисленную форму – ДАК и ДКГК . Основную роль в биохимических процессах играет редокс-пара – АК /ДАК . По данным литературы , это соотношение может меняться при различных патологических п роцессах , одним из наиболее распространённых из них является и н сулинзависимый сахарный диабет . Исследования , направленные на изучение измен е ния содержания АК , ДАК и ДКГК в клетках могут быть одним из критериев , свид е тельствующих о наличии в организме вышеу казанных процессов. Целью данной работы явилось определение содержания АК , ДАК , ДКГК в общей эритроцитарной массе у детей , страдающих инсулинзависимым сахарным диабетом . Данная работа представляет собой часть исследований , проводимых на кафедре би о химии и физиологии человека и животных КГУ по изучению метаболизма эритроц и тов. ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 1.1. б иохими ческие процессы при созревании и старении эритроцитов 1.1.1. Характеристика эритроцитов Зрелый эритроцит человека является упрощенной клеткой по биохимической и структурной организации . Это высокоспециализированная безъядерная клетка . Эри т роциты человека образуются из ядросодержащих клеток преимущественно в костном мозге . В этих предшественниках эритроцитов содержатся субклеточные структуры и ферментные системы , необходимые для деления , созревания , дифференцировки , п р о цессов биосинтеза ДНК , РНК , белков , в том числе глобина , синтеза гема , липидов , у г леводов , других соединений . На этой стадии развития эритроцита осуществляются окислительные процессы , тканевое дыхание , анаэробное расщепление углеводов (гл и колиз ), прямое окисление глюкозы через пентозофосфатный путь (Черняк Н.Б ., 1976). До сих пор нет достаточно чётких представлений о том , как соотносятся отдел ь ные стадии созревания ядерных клеток с изменениями химического состава и обмена веществ . Однако известно , что в п роцессе развития клетки на стадии нормобласта уменьшается количество РНК , увеличивается содержание гемоглобина и утрачивается способность к синтезу ДНК , в связи с чем нарушается способность к митотическому делению. Ретикулоциты – безъядерные клетки , образу ющиеся на последнем этапе созрев а ния , предшествующем образованию эритроцитов , характеризуются схожей морфол о гией , в частности , содержат митохондрии , рибосомы , ЭПР . В ретикулоцитах ос у ществляется биосинтез глобина , гема , пуринов , пиридиннуклеотидов , фосфати дов , липидов (Фёдоров Н.А ., Черняк Н.Б ., 1976). РНК практически не синтезируется . Пр о исходит фосфорилирование , сопряжённое с окислением , и гликолиз (Гинодман Л.М ., 1968). В обмене веществ ретикулоцитов участвуют эндогенные и экзогенные субстр а ты , в том чис ле аминокислоты , глюкоза. Последний этап созревания – превращение ретикулоцита в эритроцит – протекает 1-3 дня . Происходят значительные изменения в обмене веществ и морфологии клеток (Фёдоров Н.А ., 1976). В зрелых безъядерных эритроцитах нарушены биологиче ский аппарат дыхания , системы синтеза белка , пуринов , порфиринов . Сохраняется способность к гликолизу , утилизации небольшого количества глюкозы в пентозном цикле и синтезу некоторых соединений , например , глутатиона. В норме длительность жизни эритроцитов п оддерживается в течение 120 дней специализированными ферментными системами . Выведение эритроцитов из циркул я ции связано с изменениями (структурных компонентов , химического состава , исто ч ников энергии ), характеризующими старение клеток . Наиболее характерным и изм е нениями при старении эритроцитов являются : 1) уменьшение активности различных ферментов гликолиза и пентозного ци к ла , что понижает интенсивность данных процессов (Мортенсен , Брайн , 1974); 2) уменьшение содержания липидов , что приводит к изменению стр уктуры эритроцитов , увеличению чувствительности к осмотическому лизису и механич е ским воздействиям ; 3) изменения в составе катионов в результате изменения проницаемости ме м браны ; 4) изменение содержания АТР , что в свою очередь связывается как с одной из пр ичин нарушения проницаемости , так и с уменьшением приживаемости эритр о цитов в кровяном русле. Одной из ведущих гипотез старения является свободнорадикальная гипотеза , предложенная Д . Хартманом . Она связывает причины возрастных изменений с накоплением молек улярных повреждений в мембранах и генетическом аппарате клетки свободными радикалами и продуктами перекисного окисления липидов . Нарушение нормального функционирования клетки обусловлено высокими ск о ростями образования высокореакционных интермедиатов кисло рода (суперокси д радикал , пероксид водорода , гидроксильный радикал ), что , в свою очередь , связ а но с постоянно протекающими процессами оксигенации и деоксигенации гем о глобина и наличием высоких концентраций кислорода в ходе выполнения осно в ной функции эритро цитов – транспорта кислорода от клетки к тканям и углеки с лого газа в обратном направлении. 1.1.2. Энергетический обмен в эритроцитах Для поддержания функциональной активности клеток организма необходима з а трата энергии . Зрелые эр итроциты , циркулирующие в кровяном русле , являются м е таболически активными клетками , несмотря на отсутствие способности к синтезу бе л ков , аэробному расщеплению глюкозы в лимоннокислом цикле Кребса (Владимиров Г.Е . по Рапопорту , 1970). Основным процессом об мена энергии в них является глик о лиз . Процесс , протекающий в эритроцитах , близок к процессам в других клетках и тканях , и подробно описан (Фёдоров Н.А . по Райкеру , 1976). К особенностям гликолиза в эритроцитах можно отнести использование , помимо глюкозы , д ругих моносахаридов : фруктозы , маннозы , галактозы , а также инозина , сорбита при наличии соответствующих ферментов (Йошикава , 1968). В процессе гл и колиза происходит образование АТР и NADH . Энергия гликолиза используется для активного транспорта катионов чер ез клеточную мембрану и поддержания соотнош е ния между ионами калия и натрия в эритроцитах и плазме , для сохранения целостн о сти мембраны и двояковогнутой формы клетки . Образующийся NADH используется для восстановления пировиноградной кислоты в молочную и дл я восстановления ме т гемоглобина при участии метгемоглобинредуктазы . В составе метгемоглобина соде р жится трёхвалентное железо , вследствие чего он не способен к транспорту кислорода . Характерной особенностью гликолиза в эритроцитах является превращение 1,3- дифосфоглицерата не только в 3-фосфоглицерат , но и в 2,3-дифосфоглицериновую кислоту под действием дифосфоглицеромутазы . 2,3-дифосфоглицерат имеет , наряду с АТР , важное значение в регуляции сродства гемоглобина к кислороду . По мере стар е ния эритроцита прои сходит уменьшение способности к восстановлению метгемогл о бина в гемоглобин , т.е . нарушение функциональной активности эритроцита . Это св я занно именно с уменьшением интенсивности гликолиза , в результате которого обр а зуется NADH , необходимый для действия метг емоглобинредуктазы . Уменьшение с о держания 2,3-дифосфоглицерата приводит к сдвигу диссоциационной кривой влево , ухудшению отдачи кислорода тканям. Итогом всех реакций гликолиза является превращение 1 молекулы глюкозы в 2 молекулы молочной кислоты с одноврем енным превращением 2 молекул ADP в 2 м о лекулы АТР. Наряду с гликолизом – анаэробным расщеплением глюкозы до молочной кислоты – в эритроцитах существует дополнительный путь утилизации глюкозы – прямое окисление до углекислого газа и воды в ходе пентозофосфа тного цикла . Этот путь н е отличим от подобных процессов , протекающих в других клетках и тканях ; суммарным результатом цикла является окисление одной из 6 молекул глюкозо -6-фосфата до 6 молекул СО 2 и восстановление 12 молекул NADPH . Роль пентозного цикла в з релых эритроцитах заключается , с одной стороны , в образовании пентозофосфатов . В реа к ции цикла образуется 3-глицероальдегидфосфат , подвергающийся превращениям в цепи гликолитических реакций и , таким образом , является дополнительным источн и ком энергии . Осно вное значение пентозофосфатного цикла заключено в образовании молекул NADPH . Значение NADPH определяется его участием в ряде реакций , нео б ходимых для поддержания функциональной активности и целостности эритроцитов . К ним относятся восстановление метгемогло бина в гемоглобин при участии NADPH и метгемоглобинредуктазы и восстановление окисленного глутатиона с помощь . NADPH - глутатионредуктазы . Восстановленный глутатион ( GSH ), форма со свободно реагирующей тиоловой группой составляет в эритроцитах до 96% общего количества . Сохранение глутатиона в восстановленном состоянии необходимо для предохранения ряда ферментов , содержащих SH - группы , от инактивации , ограждение мембраны клетки от действия перекисей и необратимого окислительного денатурирования гем о глобина. 1.1.3. Антиоксидантная система эритроцитов Основная функция эритроцитов – транспорт кислорода от лёгких к тканям и СО 2 в обратном направлении . Благодаря высоким концентрациям кислорода и постоянно протекающим процессам оксигенации – деоксигенации гемоглобина , в этих клетках с высокой скоростью идут процессы образования свободных радикалов : Н 2 О 2 , ОН - . Кроме того , в эритроцитах в результате аутокаталитических реакций образуются п е рекиси и гидроперекиси липидов. Основное количество О 2 - в эритроцитах образуется при аутоокислении гемогл о бина в метгемоглобин . Это пример генерации супероксидного радикала , связанной с неферментативным окислением субстрата : Hb + O 2 Hb … O 2 MetHb + O 2 - Большую роль в защите клетки от свободных радикалов играют ферментативные антиоксиданты . Эритроциты содержат высокоактивную супероксиддисмутазу , кот о рая осуществляет дисмутацию двух O 2 - с образованием перекиси водорода : O 2 - + O 2 - H 2 O 2 + O 2 Образовавшаяся перекись водорода , являющаяся сильнейшим окислителем , ч а стично нейтрализуется неферментативным путём при непосредственном участии а с корбата или других антиоксидантов ( -токоферол , глутатион в осстановленный ). О с новное количество Н 2 О 2 расщепляется в реакциях , катализируемых каталазой и гл у татионпероксидазой : Н 2 О 2 + Н 2 О 2 2Н 2 О + О 2 Н 2 О 2 + RH 2 2Н 2 О + R Важную роль в антиоксидантной си стеме эритроцитов играют легкоокисляющи е ся пептиды , содержащие аминокислоты с SH -группой : метионин , цистеин . Особое м е сто занимает глутатион – трипептид , образованный цистеином , глутаматом , глиц и ном . В организме он присутствует в окисленной и восстановленн ой форме ( GSH ). О с новной антиоксидантный эффект глутатион оказывает , участвуя в работе фермент а тивных антиоксидантов . Глутатион является ингибитором активированных кислоро д ных радикалов и стабилизатором мембран . Это связано с тем , что SH - содержащие с о един ения подвергаются окислению в первую очередь , что предохраняет от окисления другие функциональные группы. Немаловажный вклад в защиту клетки от органических радикалов вносят нефе р ментативные антиоксиданты . Эффективными перехватчиками органических радик а лов являются фенольные антиоксиданты , имеющие в структуре ароматическое кол ь цо , связанное с одной или несколькими гидроксильными группами . Имеется нескол ь ко тысяч фенольных соединений , обладающих антиоксидантным эффектом : витамины группы Е и К , триптофан , фен илаланин , убихиноны , большинство животных и раст и тельных (каротиноиды , флавоноиды ) пигментов . Синтезируется ароматическое кол ь цо только у высших растений и микроорганизмов , поэтому многие из фенольных а н тиоксидантов входят в группу облигатных пищевых , кот орые эффективно ингибир у ют О 2 - , ОН - и индуцируемые ими процессы перекисного окисления (Оксенгендлер , 1985). Антиоксидантными свойствами обладают хелатные соединения , связывающие м е таллы переменной валентности (церулоплазмин , мочевая кислота , трансферрин ). Тем самым они препятствуют вовлечению их в реакции разложения перекисей , поскольку в присутствии металлов переменной валентности образование высокореакционных радикалов усиливается (Эристер , 1987). Таким образом , развитие и функционирование клеток в кисло родсодержащей ср е де не представляется возможным без существования защитных систем – специализ и рованных ферментативных и неферментативных антиоксидантов . В живых органи з мах постоянен процесс образования прооксидантов , уравновешиваемый дезактивац и ей их антио ксидантными системами . Для поддержания гомеостаза регенерация ант и оксидантов должна быть непрерывной . Отсутствие или нарушение в её непрерывной работе приводит к развитию окислительных процессов , к накоплению окислительных повреждений , что сопровождает ряд патологических физиологических процессов , например , старение (Оксенгендлер , 1985). 1.2. Аскорбат как компонент АОС эритроцитов 1.2.1. Строение и физико-химические свойства аскорбата Витамин С ( L -аскор биновая кислота ) входит в состав алифатического ряда вит а минов . По своему строению он может быть отнесен к производным углеводов . Это г- лактон 2,3-дегидро- L -гулоновой кислоты , производное ненасыщенных полиокси- г- лактонов . Структура близка структуре -глюкозы. Благодаря наличию двух асимметричных атомов углерода в 4 и 5 положениях , а с корбиновая кислота (АК ) образует 4 оптических изомера и 2 рацемата . D - и L - а с корбиновые кислоты в природе не встречаются и синтезированы искусств енным п у тём . Наличие в АК двух сопряжённых двойных связей (углерод-углеродной и углерод-кислородной ) обуславливает ее способность к обратимому окислению , продуктом к о торого является дегидроаскорбиновая кислота (ДАК ). ДАК устойчива , но ее лакто н ное кольцо, в отличие от стабилизированного двойной связью лактонного кольца L -АК в водном растворе легко гидролизуется с образованием 2,3-дикетогулоновой ки с лоты (2,3-ДКГК ). Эта реакция необратима , ее скорость возрастает при повышении температуры и рН среды . Через р яд дальнейших превращений ДКГК переходит в щ а велевую и L -треоновую кислоты . Такое же превраще ние имеет место в организме (Халмурадов , Тоцкий , 1993): Сп особность к О-В превращениям , связанная с ендольной группировкой , которая стабилизирована находящейся в цикле соседней карбонильной группировкой , сопр о вождающаяся перенесением атомов водорода к акцепторам , является важнейшей к а талитической функцией АК в жи вом организме . L -АК по своей биологической акти в ности высокоспецифична . Витаминная активность проявляется только при наличии свободных гидроксильных групп . Различные функциональные производные по ним лишают молекулу витаминной активности почти полностью , к ак и гидрирование н е насыщенной связи лактонного кольца . Поэтому L -ДАК имеет витаминную акти в ность , равноценную L -АК , тогда как 2,3-ДКГК полностью ее лишена . Вследствие ле г кой окисляемости L -АК – донор Н + , она количественно легко восстанавливает мног о числен ные соединения , как-то : йод , перманганат калия и другие . L -АК – переносчик Н + в некоторых ферментативных реакциях живой клетки , она легко окисляется перо к сидазой , цитохромоксидазой , каталазой . L -АК восстанавливает окисленные формы ферментов , окисляясь в ДА К , обратимо легко регенерирующуюся в АК под действием глутатиона за счет его сульфгидрильной группы : Окисление АК катали зируется медью , в меньшей степени – катионами серебра и железа . Имеется предположение , что специфическим катализатором окисления АК в животных организмах является белок , синтезирующийся в печени , осуществляющий транспорт меди , обладающий оксигеназной акти в ностью , - церулоплазмин . В мен ь шей степени окисление аскорбата катализируют другие катионы , в частности , серебра и железа . Комплексоны , флавоноиды тормозят окислительный распад АК . Некоторые белки ингибируют окисление АК , связываясь с ней или путём образов ания комплекса с медью – сывороточные глобулины (Борец , 1980). Окисление тормозится – SH соде р жащими соединениями : сернистая кислота блокирует фермент аскорбиназу ; С- SH св я зывает ионы Cu + , удаляя т . с . катализатор окисления АК из реакции (Киверин , 1971). 1 .2.2. Биосинтез АК в живом организме L -АК синтезируется в растениях и организме некоторых животных из D -глюкозы через лактон D -глюкуроновой кислоты и L -гулоно- г- лактон или их производное . В процессе биосинтеза происходит превращение соединений D -ряда в соединения L -ряда (Березовский , 1993): Биосинтез АК в организме животных происходит в клетках печени , почек , надп о чечников , гипофиза , стенки тонкого к ишечника (Киварин , 1973). 1.2.3. Физиологические свойства аскорбата Витамин С является постоянной составной частью тканей и органов человека . Его поступление в организм должно быть ежедневным , т . к . аскорбат , играя важную роль в обменных процессах органи зма , все время расходуется . Он восстанавливает оки с ленные формы ферментов , активирует некоторые протеазы , тормозит действие амил а зы и протеазы поджелудочной железы , активирует эстеразу печени . L -АК участвует в обмене некоторых ароматических аминокислот , ре гулирует уровень холестерина в крови , усиливает антитоксические функции гепатоцитов (вкупе с глюкозой ), норам а лизирует белковообразование . Витамин С необходим для нормального функционир о вания клеток , продуцирующих коллаген , активирует и регулирует зритропо эз (сп о собствуя усвоению железа ), нормализует нарушенное протромбинообразование , но р мализует процессы свертывания (Андреев ; 1996). Аскорбат играет положительную роль в развитии иммунных реакций организма , обладает некоторым детоксициру ю щим свойством , являе тся существенным фактором профилактики и лечения инфекц и онных заболеваний. Витамин С оказывает положительное воздействие на углеводный обмен . Волы н ский З . М . с сотрудниками показали , что повышает синтез гликогена в печени , и что нарастание содержания глико гена в печени , как правило , прямо пропорционально п о вышению в этом органе витамина С . К такому выводу позволяют прийти многочи с ленные клинические наблюдения последнего времени , подтверждающие ценное сво й ство АК обладать нормализующим действием на уровень с ахара в крови . Подобный эффект связан с синергическим действием аскорбата и гормонов – инсулина и адрен а лина . Витамин С может усиливать действие инсулина или действовать аналогично ему , способствуя образование гликогена в печени . Синергизм возникает косвен ным путем через воздействие инсулина и витамина С на общегормональный фон органи з ма. Таким образом , АК оказывает разностороннее влияние на процессы обмена в е ществ у здоровых людей , а при различных патологических состояниях благоприя т ствует нормальному тече нию обмена веществ и функционированию различных орг а нов и систем организма (Бременер ; 1997). 1.3. Сахарный диабет как один из распространенных патологических процессов Диабет сахарный ( diabetes mellitus ; сахарная болезнь , сахарн ое мочеизнурение ) – эндокринное заболевание , обусловленное дефицитом гормона инсулина в организме или его низкой биологической активностью ; характеризуется хроническим течением , нарушением всех видов обмена веществ , ангиопатией. Сахарный диабет представляе т собой самую распространённую эндокринную п а тологию . В его развитии существенную роль играют наследственная предраспол о женность и неблагоприятное воздействие окружающей среды , однако , характер наследственной предрасположенности и так называемых факторов р иска различны при разных типах сахарного диабета . Факторами риска развития сахарного диабета являются появление антител к -клеткам островков поджелудочной железы , частые вирусные инфекции , гиподинамия , ожирение , нерациональное или недостаточное п и тание , стрессы , генетически отягощенный по сахарному диабету анамнез и другие. Согласно классификации ВОЗ , различают два основных типа сахарного диабета . Это инсулинзависимый (I тип ) и инсулиннезависимый ( II тип ) сахарный диабет . И н с улинзависимый сахарный диабет , как правило , развивается у лиц молодого возраста и детей , имеющих генетическую предрасположенность к сахарному диабету именно данного типа . Инсулиннезависимым сахарным диабетом чаще болеют лица , старше 50 лет (особенно женщи н ы ). Наследственная предрасположенность играет большую роль , чем при сахарном диабете I – типа. Механизм развития сахарного диабета сложен и многогранен . Он зависит как от функции самой поджелудочной железы , так и от внепанкреатических факторов . Прежде все го , нарушен обмен углеводов . Из-за недостатка инсулина или других пр и чин затрудняется переход глюкозы в мышечную и жировую ткань , снижается синтез гликогена в печени , усиливается образование глюкозы из белков и жиров (глюконе о генез ). В развитии этих процес сов увеличивается содержание глюкозы в крови . Если в норме оно довольно устойчиво и натощак у здоровых людей колеблется в пределах 3,33 – 35,55 ммоль /л (70 – 100 мг %), то при сахарном диабете в зависимости от фо р мы и тяжести течения обычно превышает 6,00 ммоль /л , достигая 20 – 30 ммоль /л и больше. Диабет у детей и подростков характеризуется тяжелым течением и , как правило , острым началом заболевания . От времени появления первых признаков заболевания (жажда , похудание , выделение большого количества мочи , общ ая слабость , сухость кожи ) до развития тяжёлого состояния и значительных нарушений обмена веществ , проходит обычно 2 недели . Дети , больные сахарным диабетом , требуют обязательного лечения и постоянного лечебного контроля. ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ Нами обследован 41 ребёнок , страдающий инсулинзависимым сахарным диаб е том , и 10 человек контрольной группы . Объектом исследования служили эритроциты больных и здоровы х детей . Для получения эритроцитов кровь брали из локтевой вены капельным способом , в качестве антикоагулянта использовали гепарин. Исследования проводили в общей эритроцитарной массе детей , страдающих инс у линзависимым сахарным диабетом , и детей контрольно й группы. 2.1. Подготовка эритроцитов Свежую гепаринизированную кровь разливали в центрифужные пробирки по 5 мл . После пятнадцатиминутного центрифугирования при 3000 об /мин при 4 0 С отбир а лись и отбрасывались лейкоцитарный слой и плазма . Эритроциты суспендировали в десятикратном объёме 0.9% раствора NaCl и центрифугировали в течение пятнадцати минут при 3000 об /мин . Супернатант отсасывали , процедуру повторяли 3 раза . Это делалось для более плотной упаковки эритроцитов. 2.2. Метод раздельного определения аскорбиновой , дегидроаскорбиновой и дик е тогулоновой кислот в эритроцитах Для количественных определений АК , ДАК и ДКГК использовали метод J . H . Roe , C . A . Kuether (1943) в модификации В.В . Соколовского , Л .В . Лебедевой , Т.Б . Лиэлуп (1967). Метод основан на взаимодействии 2,4- динитрофенилгидразина с ДАК с обр а зованием в серной кислоте соответствующего озазона . ДАК и ДКГК дают красное окрашивание , используемое для фотометрического определения . Для вычисления суммы всех кислот их окисляют 2,6- дихлорфенолиндофенолятом натрия . Содержание АК определяют по разности . Для дифференцированного определения ДАК и ДКГК смесь подвергают действию восстановителей , при этом в АК восстанавливается тол ь ко ДАК . В качестве вос становителя использовали димеркаптопропансульфонат натрия (унитиол ) Реактивы : 1. 2 . 10 М унитиол (0.84 мл 5% раствора ампулированного препарат в 100 мл 0.2 М фосфатного буфера рН 7.0. хранить не более суток ). 2. 5% трихлоруксусная кислота (ТХУ ). Хранить в холодильнике не более двух недель. 3. 85% раствор серной кислоты (100 мл воды + 900 мл концентрированной серной кислоты ). 4. 2% раствор 2,4-динитрофенилгидразина в 9Н серной кислоте , содержащей 0.25% тиомочевины (хранить в холодильнике не более 1 месяц а ). 5. 0.001 Н раствор 2,6- дихлорфенолиндофенолята натрия (краска Тильманса ). Хранить в темноте не более 1 недели . 6. 0.9% раствор хлорида натрия (физиологический раствор ). Ход определения. В три пробирки помещали по 0.5 мл упакованных и отмытых от пл азмы эритроц и тов с известным гематокритом . В первую прибавляли 0.25 мл физиологического ра с твора и 0.25 мл унитиола . После пятнадцатиминутной инкубации при периодическом помешивании суспензии отбирали 0.5 мл экстракта , к которому прибавляли 1.5 мл ТХУ. В д ве другие пробирки также прибавляли по 1.5 мл ТХУ. В две пробирки вносили по 0.75 мл супернатанта , полученного при центрифуг и ровании смеси упакованных эритроцитов с ТХУ . В одну из пробирок добавляли по каплям 0.001 Н раствор 2,6- дихлорфенолиндофенолята на трия до появления слабор о зового окрашивания , устойчивого в течение 30 секунд . В третью пробирку помещали 0.75 мл супернатанта , полученного после центрифугирования смеси упакованных эритроцитов с физиологическим раствором , унитиолом и ТХУ . Во все пробирки д о бавляли по 0.25 мл 2,4- динитрофенилгидразина и доводили объём до 1.25 мл дисти л лированной водой , инкубировали при 100 0 С в течение 10 минут и охлаждали в лед я ной бане . В каждую пробирку добавляли небольшими порциями 1.25 мл 85% раствора серной кислоты , охлаждая в ледяной бане после каждой порции . Окрашенные раств о ры фотометрировали через час при длине волны 540 нм. Концентрацию кислот определяли по формуле : С = (3*А )/0.085; где С – концентрация кислот , мг % 3 – концентрация стандартного раствора , мг % А – оптическая плотность пробы 0.085 – оптическая плотность стандартного раствора 2.3. СТАТИСТИЧЕСКАЯ ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ Результаты исследований обрабатывались статистически (Лакин И.А ., 1976). Г лава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Целью исследования являлось определение содержания аскорбата и его окисле н ных форм – ДАК и ДКГК в общей эритроцитарной массе взрослых , страдающих ИЗСД , со стажем болезни более 10 ле т ; сравнение и сопоставление полученных р е зультатов с данными , полученными ранее , в ходе работы со здоровыми детьми и стр а дающими ИЗСД . В эксперименте участвовал 21 взрослый в возрасте от 25 до 40 лет , 37 больных детей и группа контроля , включающая 10 здор овых детей . Результаты и с следований отображены на диаграммах. Рис .1. Содержание общей АК , А К , ДАК и ДКГК в эритроцитах здоровых детей и детей , страдающих ИЗСД (мг %) Рис . 2. Содержание общей АК , АК , ДАК и ДКГК в эритроцитах взрослых , страд а ющих ИЗСД (мг %) Как следует из полученных результатов , в эритроцитах детей и взрослых , страд а ющих ИЗСД , наб людается увеличение содержания окисленной форма АК-ДАК , что может свидетельствовать о нарушении процесса восстановления АК в ДАК , большем участии АК в метаболических процессах , нарушении транспорта АК в клетке. Процентное содержание общей АК , АК , ДАК и ДКГ К также демонстрирует пр е валирование окисленных форм АК над восстановленной. Рис . 3. Содержание общей АК , АК , ДАК и ДКГК в эритроцитах здоровых детей и страдающих ИЗСД (%). Рис . 4. Содержание общей АК , АК , ДАК и ДКГК в эритроцитах взрослых , страд а ющих ИЗСД (%). Все полученные данные согласуются с данными литературы об изменении общего количества АК в организме при патологии (нормальное содержание составляет 5 – 15 мг %) и соотношения «окисленная форма АК /восстановленна я форма АК» в сторону увеличения первой. ВЫВОДЫ 1. Содержание общей АК в эритроцитах детей и взрослых , страдающих ИЗСД , составляет 19.52 мг % и 6,47 мг %, в эритроцитах здоровых детей – 12.48 мг %. 2. Содержание восстановленной АК в эритроцитах больных детей и взрослых составляет 4.1 и 2,01 мг % (20.5 и 31% от общей АК ), в эритроцитах здоровых детей – 4.28 мг % (33%). 3. Содержание окисленных форм АК – ДАК и ДКГК в эритроцитах бол ьных д е тей и взрослых составляет 15.5 и 4.46 мг % (79.5 и 69% от общей АК ), в эри т роцитах здоровых детей – 8.36 мг % (67%). 4. В общей эритроцитарной массе больных детей соотношение окисленная фо р ма АК / восстановленная форма АК составляет 4/1, что свидетель ствует о пр е валировании окисленной формы АК над восстановленной. 5. В общей эритроцитарной массе здоровых детей это соотношение равно 2/1, т.е ., налицо тенденция к росту содержания восстановленной АК. Заключение Уже давно доказали тот факт , что аскорбин овая кислота является постоянной с о ставной частью тканей и органов человека . Важность выполняемых ею физиологич е ских функций не подлежит сомнению . Некоторые из них давно известны и хорошо изучены . Например , то , что витамин С оказывает благоприятное воздейс твие на раб о ту иммунной системы , нормализует эритропоэз и продукцию коллагена , является компонентом антиоксидантной системы клетки . Однако многочисленные исследов а ния недавнего времени показали , что возможности этого вещества гораздо шире , чем представляло сь до сих пор . К примеру , было обнаружено ценное свойство аскорбата нормализовать уровень сахара в крови , оказывая положительное воздействие на угл е водный обмен . При выполнении этой и других биохимических функций аскорбиновая кислота обратимо окисляется в ДАК , при последующем воздействии окислителя н е обратимо переходит в ДКГК . По данным литературы , соотношение «окисленная фо р ма АК /восстановленная форма АК» может изменяться при различных патологиях , как и ее общее содержание в организме . Одной из распростран енных патологий является инсулинзависимый сахарный диабет . Поскольку ИЗСД является эндокринной патол о гией , протекающей с нарушением углеводного обмена , в регуляции которого аскорбат играет немаловажную роль , было бы логичным предположить , что его содержани е в организме больного окажется иным , чем у здорового человека . Экспериментальные данные подтвердили это предположение . В организме больного ребенка содержание общей АК повышено на 37 % по сравнению с общей АК и составляет 19,52 мг %, тогда как нормальным с читается наличие от 5 до 15 мг % аскорбата . Среднее значение АК у здорового ребенка – 12,48 мг %. В то время как содержание ДКГК в процентном соо т ношении практически не изменено и составляет у больных и здоровых детей 46 и 49,4 % соответственно (6,16 мг % и 8 ,96 мг %), концентрация ДАК у больных детей пов ы шена против здоровых почти вдвое и составляет 33,5 % вместо 17,6 % (6,54 мг % и 2,2 мг %). Основные различия выявляются в процентном содержании восстановленной формы АК . Ее содержание у здоровых детей составляет 33 % общей АК (4,28 мг %), тогда как у больных детей оно ниже на 13 % и составляет 4,1 мг %. Таким образом , с о отношение «окисленная форма АК /восстановленная форма АК» у больных детей с о ставляет 4:1, в отличие от здоровых детей , у которых оно равняется 2:1. На основании этих данных можно предположить следующие причины подобных изменений содержания общей АК и ее метаболических форм в организме больных ИЗСД детей : 1) При ИЗСД нарушены все виды обмена веществ в организме – углеводный , бе л ковый и жировой . В посл еднем случае возрастает количество свободных рад и калов , вследствие чего АОС испытывает большую нагрузку . Возрастает соде р жание одного из ее компонентов – аскорбата , он более активно включается в метаболические процессы , возможно , тем самым в какой-то мере компенсир у ется снижение концентрации другого ее компонента – С- SH ; 2) Почти двукратное возрастание уровня ДАК в организме больного ребенка при практически неизменном количестве ДКГК может свидетельствовать о нар у шении процесса восстановления ДАК в АК ; воз можно снижена активность фермента ДАК – редуктазы . При ИЗСД ее активность снижена на 50 %, что приводит к сокращению содержанияС- SH , необходимого для процесса восст а новления ДАК в АК . Одновременно снижается активность ГБФДГ , в реакции которой образуется не обходимый для работы С- R NADPH ; 3) Нарушение транспорта АК в клетке. Несколько иная картина наблюдается в отношении взрослых , страдающих ИЗСД . Здесь общее содержание АК находится близко к нижнему пределу нормы и составляет 6,47 мг %. Содержание ДКГК состав ляет 11,4 % (0,73 мг %), ДАК – 57,6 % (3,73 мг %), АК – 31 % (2,01 мг %). Сопоставляя эти показатели с таковыми у детей , можно закл ю чить , что активное участие АК в работе АОС решено не количественным , а кач е ственным путем . Так , доля неактивной ДКГК составляет 11 %, тогда как на долю м е таболически активных АК и ДАК приходится 89 % от общего количества АК . Такое превалирование активных форм АК особенно в сочетании с повышенным содержан и ем АК может указывать на своеобразную «адаптацию» фермента ДАК-редуктазы в хо де многолетнего лечения болезни (свыше 10 лет ). Для подтверждения данных пре д положений и выяснения механизма приспосабливаемости (если таковая имеется ) необходимы дальнейшие исследования. В настоящее время определенно сказать можно следующее : страдающие ИЗ СД , особенно дети , в процессе лечения нуждаются в проведении антиоксидантной тер а пии. литература 1. Абрамова Ж.И ., Оксенгендлер Г.И . Человек и противоокислительные вещ е ства . – Л .:Наука , 1985. – 230 С. 2. Авраамова Т.В ., Титова Н.М . Руководство по большому биохимческому пра к тикуму . – Красноярск : Изд-во КГУ , 1978, ч .1. – С .80-82. 3. Асатиани В.С . Ферментные методы анализа . – М .:Наука , 1969. – С .26-40. 4. Ахромеева Г.И . Определение дегидроаскорбиновой кислоты в пищевых пр о дуктах //Вопросы питания . – 1988. -№ 3. – С .66-88. 5. Ашкинази И.Я . Разрушение эритроцитов // Физиология системы крови . Ф и зиология эритропоэза . – Л .:Наука , 1979. – С .274-334. 6. Березовский В.М . Химия витаминов . – М .:Пищевая промышленность , 1973. – С .230-300. 7. Борец В.М . Витамины . – М .:Наука , 1980. – 29 С. 8. Бохински Р . Современные воззрения в биохимии . – М .:Мир , 1987. – С .120-154. 9. Браунштейн А.Е . Процессы и ферменты клеточного метаболизма . – М .:Наука , 1987. – 44С. 10. Бременер С.М . Витамины . – М .:Медицина , 1974. – 194С . 11. Бреслер В.М ., Никифоров А.А . Транспорт органических кислот через плазм а тические мембраны дифференцированных эпителиальных слоёв у позвоно ч ных . – Л .:Наука , 1981. – С .52-111. 12. Букин В.Н . Биохимия витаминов . – М .:Наука , 1982. – С .17-19. 13. Владимиров Г.Е . Об энергетической функции АТФ в клетке . – Л .:Наука , 1980. – 44С. 14. Гаврилов О.К ., Козинец Т.И ., Черняк Н.В . Клетки костного мозга и периф е рической крови . – М .:Медицина , 1985. – 288С. 15. Галактионов С.Г . Биологически активные. – М .:Молодая гвардия , 1988. – С .4-84. 16. Григорьев Г.П . Цитохром Р -450 и витамин С //Вопросы питания . – 1983. -№ 4. – С .5-10. 17. Дегли С ., Никольсон Д . Метаболические пути . – М .:Мир , 1973. – С .189-196. 18. Домбровская Ю.В . Витаминная недостаточность у дете й . – М .:Медицина , 1983. – 63С. 19. Ефимов А.С ., Бездробный Ю.В . Структура и функции инсулиновых рецепт о ров . – Киев .:Наукова думка , 1987. – С .4-104. 20. Канунго М . Биохимия старения . – М .:Медицина , 1982. – 194С. 21. Киверин М.Д . Витамин С и профилактика С-вита минозных состояний на С е вере . – Сев.-Зап . книжное изд ., 1971. – С .5-7. 22. Кон Р.М . Ранняя диагностика болезней обмена веществ . – М .:Медицина , 1986. – С .17-42. 23. Косяков К.С . Клиническая биохимия . – Л .:Медицина , 1997. – С .113-118. 24. Меньщикова Е.Б ., Зенко в Н.К . Антиоксиданты и ингибиторы радикальных окислительных процессов // Усп . совр . биол . – 1993. – № 4. – С .442-455. 25. Мережинский М.Ф . Нарушения углеводного обмена при заболеваниях чел о века . – Минск .:Медицина , 1987. – С .22-28. 26. Моисеева О.И . Физиологиче ские механизмы регуляции эритропоэза . – Л .:Наука , 1985. – 185С. 27. Мосягина Е.Н ., Владимирская Е.Б . Кинетика эритрона //Кинетика фермент а тивных элементов крови . – М .:Медицина , 1976. – С .101-122. 28. Мосягина Е.Н ., Фёдоров Н.А ., Гудим В.И . Эритропоэз // Норм альное кров е творение и его регуляция /Под ред . Н.А.Фёдорова . – М .:Медицина , 1976. – С .341-457. 29. Новое в гематологии /Под ред.А.И . Воробьёва , Ю.И.Лория . – М .:Медицина , 1974. – С .18-22. 30. Новикова С.Г . На приёме больной сахарным диабетом //Здоровье . – 1997 . -№ 3.-С .14-19. 31. Спиричев В.Б . Врождённые нарушения обмена витаминов . – М .:Медицина , 1995. – С .12-19. 32. Патологическая биохимия /Под ред . А.Ф . Симёнова . – М .:Медицина , 1994. – С .130-147. 33. Рубина Х.М . Биохимия эритроцитов //Физиология системы крови . Физиол о гия эритопоэза . – Л .:Наука , 1978. – С .211-232. 34. Рубина Х.М . Некоторые данные о связи метаболизма эритроцитов с их кисл о родно-транспортной функцией //Проблемы гематологии и переливания крови . – 1973. -№ 8. – 35С. 35. Рысс М.Н Витамины . – Л .:Наука , 196 3. – С .3-9. 36. Свободные радикалы в биологии /Под ред . У.Прайор . – М .:Мир , 1979. – С .272-308. 37. Смирнов Н.И . Витамины . – М .:Медицина , 1974. – С .34-40. 38. Соколовский В.В ., Лебедева Л.В ., Лиэлуп Т.Б . Определение аскорбиновой , дегидроаскорбиновой и дикетог улоновой кислот в биологических тканях // Лаб.дело . – 1967. -№ 12. – С .160-162. 39. Суровова А.П . Витамины в нашем рационе // Здоровье . – 1997. -№ 2. – С .17-20. 40. Схимниковский Б.Г . Авитаминозы у детей //Здоровье . – 1998. -№ 6. – С .11-13. 41. Черницкий Е.А ., В оробей А.В . Структура и функции эритроцитарных ме м бран . – Минск : Наука и техника , 1981. – С .23-56. 42. Черняк Н.Б . Биохимические процессы при созревании и старении эритроц и тов //Нормальное кроветворение и его регуляция . – М .:Медицина ,1976. – С .159-186. 43. Baker W.I. Urate and ascorbate: their possible roles as antioxidants in determining longevity of mammalian species //Arch. Biochem. and Biophis. – 1987. -№ 2. – Р .451-457. 44. Basu S., Som S., Ded S. Dehydroascorbic acid reduction in human erythrocytes //J. Chromatogr. Biomed. Appl. – 1991. -№ 1-2. – Р .529-542. 45. Burns J., Evans C. Ascorbic acid in human erythrocytes // J. Biol. Chem. – 1996. - № 4. – P. 223-241. 46. Penney J., Zilua S. Role of ascorbate in our organism // J. Biochem. – 1994. - № 2. – P. 37-49. 47. Pradhu H.R., Krishnamurthy S. Inhibition of ascorbate autooxidation by human blood //Curr. Sci. (India). – 1986. - № 8. – Р .403-405. 48. Sahashi Y., Mioki T., Hasegama T. Reduction of ascorbate in erythrocytes // J. Vi t aminol. – 1996. - № 12. – P.6 – 14. 49. Thompson R.Q. Ascorbic acid content of plasma and cellular components of blood //Anal.Chem. – 1987. - № 8. – Р .1119-1121. 50. Yamazaki M., Mioki T. Ascorbic acid is cellular components // J. Ferment. Tec h nolog. – 1995. - № 7. – P. 422-513. SUMMARY The main aim of this work is the study of concentration ascorbic acid, dehydroascorbic acid and DCGA in the human ’ s erythrocytes. The concentrations of the AA, DAA & DCGA were learned in the common erythrocytes mass. Our results showed that concentration of AA is lower that concentration of DAA, DCGA. Приложение 1 Содержание АК , ДАК и ДКГК в эритроцитах детей , страдающих инсулинзавис и мым сахарным диабетом (мг %) № АК ДКГК ДАК АК 1 27,32 13,06 7,9 6,36 2 27,68 16,66 8,9 2,12 3 12,56 5,3 3,52 3,74 4 17,86 10,02 4,16 3,68 5 19,78 11 6,36 2,42 6 17,84 10,66 6,70 0,84 7 26,64 12,14 7,8 6,7 8 13,18 4,14 3,88 5,16 9 18,04 10,26 4,40 3,38 10 19,74 11,12 6,22 2,4 11 27 16,94 8,06 2 12 18,14 10,8 6,82 0,52 13 19,76 8,48 4,24 7,04 14 14,82 8,32 5,30 1,2 15 27,52 8,48 9,32 9,68 16 17,01 8,15 6,8 2,06 17 19,5 7,01 9,1 3,39 18 16,4 6,4 5,43 4,57 19 17,7 5,22 7,92 4,56 20 12,4 4,81 6,1 1,49 21 16,33 7,49 6,4 2,44 22 17,77 6,29 9,2 2,21 23 23,27 10,01 7,6 5,66 24 18,8 7,26 8,13 3,41 25 20,5 8,16 7,3 5,04 26 22,55 9,25 6,24 7,06 27 17,74 9,14 6 2,6 28 19,22 7,17 7,3 4,75 29 16,38 6,19 6,29 3,9 30 24,14 10,21 7,24 6,69 31 16,88 8,19 5,3 3,39 32 19,02 9,14 4,9 4,98 33 19,74 6,7 7,16 5,88 34 22,16 10,2 8,12 3,84 35 16,01 6,9 5,49 3,62 36 13,3 7,1 4,2 2,08 37 19,2 9,03 6,59 3,58 19,52 8,96 6,54 4,1 % 100 46 33,5 20,5 Приложение 2 Содержание АК , ДАК и ДКГК в эритроцитах детей , страдающих инсулинзавис и мым сахарным диабетом и здоровых детей форма АК ДКГК ДАК АК АК ДКГК ДАК АК АК М m М m М m М m М m М m М m М m С 19.52 8.96 0.9 6.54 0.49 4.1 0.04 12.48 0.5 6.16 1.01 2.2 0.56 4.28 0.82 0.89 % 100 46 33.5 20.5 100 49.4 17.6 33 Р <0.01 <0.05 <0.01 <0.01 <0.01 <0.05 <0.01 <0.01
1Архитектура и строительство
2Астрономия, авиация, космонавтика
 
3Безопасность жизнедеятельности
4Биология
 
5Военная кафедра, гражданская оборона
 
6География, экономическая география
7Геология и геодезия
8Государственное регулирование и налоги
 
9Естествознание
 
10Журналистика
 
11Законодательство и право
12Адвокатура
13Административное право
14Арбитражное процессуальное право
15Банковское право
16Государство и право
17Гражданское право и процесс
18Жилищное право
19Законодательство зарубежных стран
20Земельное право
21Конституционное право
22Конституционное право зарубежных стран
23Международное право
24Муниципальное право
25Налоговое право
26Римское право
27Семейное право
28Таможенное право
29Трудовое право
30Уголовное право и процесс
31Финансовое право
32Хозяйственное право
33Экологическое право
34Юриспруденция
 
35Иностранные языки
36Информатика, информационные технологии
37Базы данных
38Компьютерные сети
39Программирование
40Искусство и культура
41Краеведение
42Культурология
43Музыка
44История
45Биографии
46Историческая личность
47Литература
 
48Маркетинг и реклама
49Математика
50Медицина и здоровье
51Менеджмент
52Антикризисное управление
53Делопроизводство и документооборот
54Логистика
 
55Педагогика
56Политология
57Правоохранительные органы
58Криминалистика и криминология
59Прочее
60Психология
61Юридическая психология
 
62Радиоэлектроника
63Религия
 
64Сельское хозяйство и землепользование
65Социология
66Страхование
 
67Технологии
68Материаловедение
69Машиностроение
70Металлургия
71Транспорт
72Туризм
 
73Физика
74Физкультура и спорт
75Философия
 
76Химия
 
77Экология, охрана природы
78Экономика и финансы
79Анализ хозяйственной деятельности
80Банковское дело и кредитование
81Биржевое дело
82Бухгалтерский учет и аудит
83История экономических учений
84Международные отношения
85Предпринимательство, бизнес, микроэкономика
86Финансы
87Ценные бумаги и фондовый рынок
88Экономика предприятия
89Экономико-математическое моделирование
90Экономическая теория

 Анекдоты - это почти как рефераты, только короткие и смешные Следующий
Если долгими зимними ночами спать, не включать свет и компьютер, не смотреть телевизор, то можно уложиться в соц.норму, а сэкономленной электроэнергии хватит для круглосуточной подсветки небоскреба ЛенЭнерго в Санкт-Петербурге на площади Конституции.
Anekdot.ru

Узнайте стоимость курсовой, диплома, реферата на заказ.

Обратите внимание, курсовая по биологии "Содержание аскорбиновой, дегидроаскорбиновой и дикетогулоновой кислот в эритроцитах здоровых детей и страдающих инсулинзависимым сахарным диабетом", также как и все другие рефераты, курсовые, дипломные и другие работы вы можете скачать бесплатно.

Смотрите также:


Банк рефератов - РефератБанк.ру
© РефератБанк, 2002 - 2016
Рейтинг@Mail.ru